"AD-293 epithelioid cells人胚腎細胞系 細胞背景資料:詳見相關(guān)文獻介紹 細胞形態(tài):上皮細胞樣 細胞復蘇相關(guān)注意事項:1.取細胞的過程中注意帶好防凍手套,護目鏡。此項尤為重要,細胞凍存管可能漏入液氮,解凍時凍存管中的氣溫急劇上升,可導致爆炸。2.凍存液的問題:凍存液的配置已是常識,在這里不作詳述,但二甲基亞砜(DMSO )對細胞不是完全無毒副作用,在常溫下,二甲基亞砜對細胞的毒副作較大,因此,必須在1-2min內(nèi)使凍存液完全融化。如果復蘇溫度太慢,會造成細胞的損傷,二甲基亞砜(DMSO)選擇進口產(chǎn)品。3.離心前須加入少量培養(yǎng)液。細胞解凍后二甲基亞砜濃度較高,注意加入少量培養(yǎng)液可稀釋其濃度,以減少對細胞的損傷。4.離心問題:目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng),第二天換液。因為離心的目的是兩個,去除DMSO,去除死細胞,這個是標準流程,但對一般人來說,把握不好離心轉(zhuǎn)速和時間,轉(zhuǎn)的不夠活細胞沉底的少,細胞就全被扔掉了,轉(zhuǎn)過了活細胞會受壓過大,死亡。此外在操作過程中容易污染,所以不推薦。另一種說法為細胞懸液中含有二甲基亞砜(DMSO),DMSO對細胞有一定的毒副作用,所以須將離心后的液體前倒凈,且一定倒干凈。我在試驗中按照常規(guī)的離心分裝的方法進行復蘇,結(jié)果無異常。5.細胞貼壁少的問題:教科書中說明凍存細胞解凍時1ml細胞液要加10ml-15ml培養(yǎng)液,而在我的試驗中的經(jīng)驗總結(jié)為培養(yǎng)基越少細胞越容易貼附。6.復蘇細胞分裝的問題:試驗中我的經(jīng)驗總結(jié)為復蘇1管細胞一般可分裝到1-2只培養(yǎng)瓶中,分裝過多,細胞濃度過低,不利于細胞的貼壁。7.加培養(yǎng)基的量放入問題:這個量的多少的把握主要涉及到的問題DMSO的濃度,從如果你加培養(yǎng)基的太少,那么DMSO的濃度就會比較大,就會影響細胞生長,從以前的資料來看,DMSO的濃度在小于0.5%的時候?qū)σ话慵毎麤]有什么影響,還有一個說法是1%。所以如果你的凍存液的濃度是10%DMSO的話那么加10ml以上的培養(yǎng)基就恰好稀釋到了無害濃度。 Merwin Plasma Cell tumor-11細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PAI細胞、SUM 190細胞、MCF12A細胞 801-D細胞系相關(guān)產(chǎn)品:IPEC1細胞、Panc02細胞、PANC0813細胞 NPA細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Rabbit Kidney 13細胞、JB-6細胞、GM16136細胞 細胞生長:貼壁 AD-293 epithelioid cells人胚腎細胞系 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 細胞產(chǎn)品包裝:復蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 血清必須貯存于–20~-70℃,若存放于4℃,請勿超過一個月。如果一次無法用完一瓶,可將40~45ml分裝于無菌50ml離心管中,由于血清結(jié)凍時體積會增加約10%,必須預留此膨脹體積之空間,否則易發(fā)生污染或容器凍裂之情形。一般廠商提供之血清為無菌,不需再無菌過濾。若發(fā)現(xiàn)血清有許多懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾,勿直接過濾血清。瓶裝(500ml)血清解凍步驟(逐步解凍法):-20℃或–70℃至4℃冰箱溶解一天,至室溫下全溶后再分裝,一般以50ml無菌離心管可分裝40~45ml。在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沈淀的發(fā)生。勿直接由–20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沈淀。勿將血清置于37℃太久,若在37℃放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定之成份亦會因此受到破壞,而影響血清之品質(zhì)。血清凝絮物:發(fā)生之原因有許多種,但普遍之原因是血清中之脂蛋白(lipoprotein) 變性及解凍后血清中存在之血纖維蛋白(fibrin) 造成,這些凝絮沈淀物不會影響血清本身之品質(zhì)。若欲減少這些凝絮沈淀物,可用離心3000rpm,5min去除,或離心后上清液可以加入培養(yǎng)基中一起過濾。不建議用過濾步驟去除這些凝絮沈淀物,因為會阻塞過濾膜。顯微鏡下觀察之“小黑點”:通常經(jīng)過熱處理之血清,沈淀物的形成會顯著的增多。有些沈淀物在顯微鏡下觀察像是“小黑點”,常會誤認為血清遭受污染,而將血清放在37℃中欲培養(yǎng)此“微生物”,但在37℃環(huán)境下,又會使此沈淀物增多,更會誤認為微生物之增殖,但以培養(yǎng)細菌之培養(yǎng)基檢測,又沒有污染。一般而言,此小黑點應不會影響細胞之生長,但若懷疑此血清之品質(zhì),應立即停用,更換另一批號的血清。 細胞傳代方法:1:2傳代 DHL10細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1793細胞、TB-1 Lu細胞、32D CL3細胞 C41細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEK293-A細胞、C2A細胞、EMT6細胞 H-1092細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs 863.T細胞、MCF 10A細胞、H-1238細胞 MCA-38細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MILE SVEN 1細胞、MOLT 3細胞、OCI Ly10細胞 MAntle cell VERona-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CORL88細胞、PASMCS細胞、Tu686細胞 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系 AD-293 epithelioid cells人胚腎細胞系 細胞生長特性:貼壁生長 細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書 培養(yǎng)細胞真的不難,最關(guān)鍵幾點:1)所有的東西使用,如果你用的血清、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、胰酶什么的都是進口的,真的很難相信你會把細胞養(yǎng)壞;2)動作要快,胰酶消化,換液什么,細胞暴露在空氣中的時間越少越好。另外,要掌握好胰酶消化時間,所謂的細胞狀態(tài)差,很多時候是傳代的原因;3)有時間的話,需要細胞計數(shù),傳相應數(shù)目的細胞到培養(yǎng)皿中,可以大致清楚細胞的生長曲線,不會臨時要處理,手足無措;4)要做什么心里要非常清楚,合理安排時間,傳代細胞的實驗穿插進行,可以節(jié)省很多時間,也不會耽誤別人的實驗;5)個人的實驗器具自己收一套,不要和別人混用,最近換了什么新的東西稍微記一下,試劑一旦懷疑污染,馬上丟;6)傳代細胞不能進去太多人,避免相互干擾。每天對待細胞比孝敬爹媽還用心,那真是捧在手里怕碎了,含在嘴里怕化了,看在眼里怕丟了,培養(yǎng)細胞時有哪些經(jīng)驗教訓可以分享呢?1)嚴格無菌操作,多噴噴酒精,要是對滅菌的東西不放心,自己包自己送自己烘干;2)不要和別人共用試劑耗材,自己準備一套;3)有可能的話在拿到新細胞的時候做好支原體衣原體檢測;4)水浴鍋很臟,生化培養(yǎng)箱要是得手動加濕的話盤里的水也會很臟,勤換(滅菌水加進去);5)晚上離開的時候給傳代細胞照紫外,超凈臺是用完就開;6)是同一時間就你一個人在用傳代細胞在養(yǎng)細胞。 OVCAR10細胞系相關(guān)產(chǎn)品:U 937細胞、LS-180細胞、SAOS 2細胞 LPC-H12細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-RC 42細胞、MCF7/WT細胞、Kuramochi細胞 TK+/- (clone 3.7.2C)細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-H2106細胞、130 T細胞、PLC-8024細胞 NCI-H2591細胞系相關(guān)產(chǎn)品:AML 12細胞、MC38細胞、Tu 212細胞 Michigan Cancer Foundation-7細胞系相關(guān)產(chǎn)品:WM-239細胞、Hs 888Lu細胞、SW-13細胞 IMR-90細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LC1細胞、WILL2細胞、MIN6細胞 6-10B細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-ChA-1細胞、OVCA8細胞、SU-86-86細胞 SW 1116細胞系相關(guān)產(chǎn)品:WM239A細胞、PF382細胞、MCF-12A細胞 OCI-Ly07細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA-175細胞、Nthy-ori 3-1細胞、U118MG細胞 NFS-60細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs-600-T細胞、MeSoTheliOma-211H細胞、293 H細胞 AD-293 epithelioid cells人胚腎細胞系 TE671/RD細胞系相關(guān)產(chǎn)品:WB-F344細胞、NCIH345細胞、SNU739細胞 ChaGo K-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:UCH1細胞、HIT clone T15細胞、KYSE 510細胞 Panc 4.03細胞系相關(guān)產(chǎn)品:WEHI-3細胞、RTE細胞、NCI-H2452細胞 OCILY7細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU-520細胞、PT-67細胞、Hs839T細胞 SGC-996細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs 604.T細胞、HCET細胞、LAN1細胞 Hs888Lu細胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO 829細胞、Y79細胞、SUM52PE細胞 Hs888Lu細胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO 829細胞、Y79細胞、SUM52PE細胞 HepG2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Centre Antoine Lacassagne-148細胞、Primary Liver Carcinoma/Poliomyelitis Research Foundation/5細胞、JKT1細胞 Colo741細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KYSE-410細胞、EnCa1細胞、TE671細胞 Human Melanoma Cell Bowes細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Jeko1細胞、hEM15A細胞、Ca 9-22細胞 CCRFCEM細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MM-1S細胞、SR786細胞、HTori:3細胞 SW-48細胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO 16細胞、H-2030細胞、B16 F1細胞 OCI-Ly7細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NRK 49F細胞、HFT 8810細胞、PC-2 [Human pancreatic carcinoma]細胞 LA-N-6(OAN)細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Mel RM細胞、MHCC97H細胞、NG 108-15細胞 GAK細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RSC-364細胞、C-28I2細胞、SVEC4-10細胞 OV2008細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NS1-Ag4/1細胞、HRC-99細胞、NCI-H727細胞 RH7777細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KALS-1細胞、HCC-827細胞、NCI-128細胞 L-428細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NBLS細胞、SKGIIIA細胞、SNU-638細胞 Transformed C3H Mouse Kidney-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW-1088細胞、NK92-MI細胞、HAEC細胞 PC3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDCK-2細胞、NCI-H1770細胞、NUGC3細胞 NCM356細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDCK II細胞、REC1細胞、AK細胞 Panc_05_04細胞系相關(guān)產(chǎn)品:JIMT1細胞、H2172細胞、McARH7777細胞 C2BBe1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PC3-M細胞、GT39細胞、HPAF2細胞 REC1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MKN-7細胞、HEMCSS細胞、CEM clone 7細胞 Mv.1.Lu細胞系相關(guān)產(chǎn)品:YAC細胞、BC-027細胞、LICCF細胞 P-19細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HPAF/CD18細胞、184A1細胞、Spodoptera frugiperda clone 9細胞 TE9細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM03569細胞、NCIH838細胞、RPMI-6666細胞 Hi-five細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HTh-74細胞、CAL851細胞、NCIH211細胞 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