"A-253 Cell:人唾液腺腫瘤細胞系
細胞形態(tài):上皮細胞樣
細胞生長:貼壁
細胞背景資料:詳見相關(guān)文獻介紹
MDCK.2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Michigan Cancer Foundation-10A細胞、Shadyside Hospital Pittsburgh-77細胞、Hep G2-Luc細胞
B-95-8細胞系相關(guān)產(chǎn)品:L-cell細胞、CAMA細胞、KTC-1細胞
KP-4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:ES-2細胞、IR983F細胞、P-19細胞
CAKI 1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCI Ly10細胞、MILE SVEN1細胞、RC-4B/C細胞
細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源
A-253 Cell:人唾液腺腫瘤細胞系
細胞消化過程總結(jié):其實絕大部分細胞消化的時候是只要用胰酶潤洗一遍即可,吸去胰酶后,殘留的那些無法計算體積的附著在細胞表面的微量胰酶在37度一般不到2min足夠消化細胞(絕大部分1min不到)。對于這些細胞原則上不要用胰酶孵育細胞,連續(xù)這樣傳代,對細胞傷害很大。簡單的程序是PBS潤洗吸去,胰酶潤洗吸去,然后37度消化。2,什么算是消化好了呢?不是細胞全部成間隔分布很離散的單個圓形才算消化好了,一般你肉眼觀察貼壁細胞層,只要能移動了,多半呈沙壯移動,其實已經(jīng)可以了,很多人喜歡把細胞消化或者吹打成完全分離細胞,這是沒有必要的。一般能移動了,說明細胞與培養(yǎng)基質(zhì)材料的附著已經(jīng)消失了,細胞之間的附著也已經(jīng)消失了,細胞已經(jīng)獨立分布了(雖然沒有呈現(xiàn)很廣的離散分布)。這個時候應(yīng)該停止消化,不要等到看到鏡下所有細胞都分離得非常好,間隙很大,才停止。細胞就是完全成單個細胞懸液,之后在貼壁的過程中仍然會聚集,這個是貼壁培養(yǎng)的細胞,尤其是腫瘤細胞的一個特性,無論死活的細胞都是如此,你可以嘗試,準備100%的單個細胞懸液,貼壁后觀察細胞,仍然是幾個幾個細胞聚集在一起。一些懸浮培養(yǎng)細胞也是如此,容易聚集,不要去嘗試過幾個小時就拿出來吹打成單細胞懸液(不要笑,這個是初養(yǎng)懸浮細胞的人常犯的錯誤,以為懸浮培養(yǎng)就是一個一個分開)。細胞只要能從基質(zhì)上脫離下來,這個時候即使是成片的(比如Calu-3細胞),吹打不超過20次后(一般10次即可),成小規(guī)模聚集(10個細胞左右),是正常的,不要試圖再去延長消化時間,或者像有的同學那樣吹打1h,等待單細胞懸液出現(xiàn)。比較難消化的細胞(潤洗方法5min還不能消化),比如HCT15, LS411和KM12,這樣的細胞一般需要用少量胰酶孵育,但也不需要很多,一般100mm dish,一次最多加入500ul,就足夠了,一般我加300ul。即使這樣難消化的細胞,一般不超過5min,即可見細胞成片移動,就應(yīng)該停止消化。一些正常細胞也會有難消化的時候,比如tsDC細胞,但也只要用少量胰酶孵育,3min左右即可看到成片沙狀移動。
細胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支)
細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。
培養(yǎng)細胞真的不難,最關(guān)鍵幾點:1)所有的東西使用,如果你用的血清、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、胰酶什么的都是進口的,真的很難相信你會把細胞養(yǎng)壞;2)動作要快,胰酶消化,換液什么,細胞暴露在空氣中的時間越少越好。另外,要掌握好胰酶消化時間,所謂的細胞狀態(tài)差,很多時候是傳代的原因;3)有時間的話,需要細胞計數(shù),傳相應(yīng)數(shù)目的細胞到培養(yǎng)皿中,可以大致清楚細胞的生長曲線,不會臨時要處理,手足無措;4)要做什么心里要非常清楚,合理安排時間,傳代細胞的實驗穿插進行,可以節(jié)省很多時間,也不會耽誤別人的實驗;5)個人的實驗器具自己收一套,不要和別人混用,最近換了什么新的東西稍微記一下,試劑一旦懷疑污染,馬上丟;6)傳代細胞不能進去太多人,避免相互干擾。每天對待細胞比孝敬爹媽還用心,那真是捧在手里怕碎了,含在嘴里怕化了,看在眼里怕丟了,培養(yǎng)細胞時有哪些經(jīng)驗教訓可以分享呢?1)嚴格無菌操作,多噴噴酒精,要是對滅菌的東西不放心,自己包自己送自己烘干;2)不要和別人共用試劑耗材,自己準備一套;3)有可能的話在拿到新細胞的時候做好支原體衣原體檢測;4)水浴鍋很臟,生化培養(yǎng)箱要是得手動加濕的話盤里的水也會很臟,勤換(滅菌水加進去);5)晚上離開的時候給傳代細胞照紫外,超凈臺是用完就開;6)是同一時間就你一個人在用傳代細胞在養(yǎng)細胞。
細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系
Kupffer細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs-729-T細胞、HN 4細胞、SUM 190PT細胞
H-740細胞系相關(guān)產(chǎn)品:UACC 812細胞、H-1436細胞、HNE-2細胞
A549/ATCC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:DU-4475細胞、ReNcell CX細胞、CCD-841CoTr細胞
COLO 357細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MB-49細胞、PC 61-5-3細胞、AR42J細胞
Caov-4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:IR983F細胞、Cor L51細胞、SW13細胞
細胞生長特性:貼壁或懸浮,詳見細胞說明書部分
A-253 Cell:人唾液腺腫瘤細胞系
細胞復(fù)蘇相關(guān)注意事項:1.取細胞的過程中注意帶好防凍手套,護目鏡。此項尤為重要,細胞凍存管可能漏入液氮,解凍時凍存管中的氣溫急劇上升,可導(dǎo)致爆炸。2.凍存液的問題:凍存液的配置已是常識,在這里不作詳述,但二甲基亞砜(DMSO )對細胞不是完全無毒副作用,在常溫下,二甲基亞砜對細胞的毒副作較大,因此,必須在1-2min內(nèi)使凍存液完全融化。如果復(fù)蘇溫度太慢,會造成細胞的損傷,二甲基亞砜(DMSO)選擇進口產(chǎn)品。3.離心前須加入少量培養(yǎng)液。細胞解凍后二甲基亞砜濃度較高,注意加入少量培養(yǎng)液可稀釋其濃度,以減少對細胞的損傷。4.離心問題:目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng),第二天換液。因為離心的目的是兩個,去除DMSO,去除死細胞,這個是標準流程,但對一般人來說,把握不好離心轉(zhuǎn)速和時間,轉(zhuǎn)的不夠活細胞沉底的少,細胞就全被扔掉了,轉(zhuǎn)過了活細胞會受壓過大,死亡。此外在操作過程中容易污染,所以不推薦。另一種說法為細胞懸液中含有二甲基亞砜(DMSO),DMSO對細胞有一定的毒副作用,所以須將離心后的液體前倒凈,且一定倒干凈。我在試驗中按照常規(guī)的離心分裝的方法進行復(fù)蘇,結(jié)果無異常。5.細胞貼壁少的問題:教科書中說明凍存細胞解凍時1ml細胞液要加10ml-15ml培養(yǎng)液,而在我的試驗中的經(jīng)驗總結(jié)為培養(yǎng)基越少細胞越容易貼附。6.復(fù)蘇細胞分裝的問題:試驗中我的經(jīng)驗總結(jié)為復(fù)蘇1管細胞一般可分裝到1-2只培養(yǎng)瓶中,分裝過多,細胞濃度過低,不利于細胞的貼壁。7.加培養(yǎng)基的量放入問題:這個量的多少的把握主要涉及到的問題DMSO的濃度,從如果你加培養(yǎng)基的太少,那么DMSO的濃度就會比較大,就會影響細胞生長,從以前的資料來看,DMSO的濃度在小于0.5%的時候?qū)σ话慵毎麤]有什么影響,還有一個說法是1%。所以如果你的凍存液的濃度是10%DMSO的話那么加10ml以上的培養(yǎng)基就恰好稀釋到了無害濃度。
細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書
RPTC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MES13細胞、293A細胞、M.D. Anderson-Prostate Cancer-2b細胞
MAVER1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU-761細胞、HuNS1細胞、FF-WT-BJ細胞
C643細胞系相關(guān)產(chǎn)品:VCaP細胞、CL1細胞、Hepa1-6細胞
HuH7細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CAL-120細胞、MeT 5A細胞、M 1細胞
OC 316細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SF-539 BT細胞、Nittby-Salford 1細胞、MNNG-HOS (Cl#5)細胞
SW 948細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MGc80-3細胞、U-87-MG細胞、Murine Thymic Epithelial Cell line 1細胞
RC13細胞系相關(guān)產(chǎn)品:JF305細胞、BE2-C細胞、HSC5細胞
A-253 Cell:人唾液腺腫瘤細胞系
KG1A細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Colon-26細胞、UWB1.289+BRCA1細胞、Anip973細胞
IPLB-SF-21細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Z-138細胞、COLO320 DM細胞、786O細胞
JEG3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:L428細胞、CCRF-CEM C1細胞、HuO9細胞
MONO-MAC 6細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-2135細胞、P30/OHK細胞、EOC 20細胞
H-69細胞系相關(guān)產(chǎn)品:VK2 (E6/E7)細胞、E304細胞、NCI-H1048細胞
AtT 20細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HN13細胞、A549/ATCC細胞、MCF7/WT細胞
Panc-813細胞系相關(guān)產(chǎn)品:IA-LM細胞、PCI:SG-231細胞、OE-19細胞
Human Corneal Epithelial cells-Transformed細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH1755細胞、NCI H69細胞、WEHI-3B細胞
Hs 832(C).T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-2085細胞、NW38細胞、HCC-202細胞
Hs 832(C).T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-2085細胞、NW38細胞、HCC-202細胞
NKT細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MASMC細胞、Tca8113細胞、SKMEL5細胞
MEF (CF-1)細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HPDE6c7細胞、RMG-I細胞、1301細胞
SK-N-BE(2)-M17細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MAntle cell VERona-1細胞、Mono-Mac-1細胞、J111細胞
P3HRI細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SCL I細胞、CCF-STTG1細胞、MDST8細胞
Colo-201細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NK-92 MI細胞、BEL 7404細胞、Ha Fe細胞
UCLA-RO 81細胞系相關(guān)產(chǎn)品:M-14細胞、HTori:3細胞、MDA.MB.231細胞
Pt K1 (NBL-3)細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Jurkat 77細胞、Hs-281-T細胞、Huh-7.5.1細胞
AMC-HN-8細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BEL7405細胞、HMSC細胞、SKMES-1細胞
SF 295細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA-MB 453細胞、SW-1116細胞、HuP-T3細胞
NKM-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:ZYM-SVEC01細胞、SCL-1細胞、Roswell Park Memorial Institute 1788細胞
COLO 699細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TE671/RD細胞、UCD-MLA-144細胞、ZR-75-30細胞
C33-A細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCI-Ly03細胞、A-498細胞、NGP細胞
Ishikawa細胞系相關(guān)產(chǎn)品:C166細胞、CCD19Lu細胞、SUM-102PT細胞
NCI-H1693細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MARC 145細胞、RCK8細胞、Hs888Lu細胞
LS180細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW982細胞、MDA-MB453細胞、Hs 294T細胞
TYK-nu細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SEG-1細胞、Mv 1 Lu (NBL-7)細胞、HTSMC細胞
SKMEL-24細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA-134細胞、AE 1201細胞、MV4II細胞
Hep 3B細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Factor Dependent Continuous-Paterson 1細胞、SNGM細胞、HEK 293 c18細胞
HEK293-EBNA1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:16HBE細胞、M21細胞、IPECJ2細胞
10RGB細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCM1A細胞、TKB-1細胞、CEM-T4細胞
3AO細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TH1細胞、H711細胞、RN細胞
HO1-N-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:143TK-細胞、NCIH847細胞、YD15細胞
hRMECs細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HSAS4細胞、LSECs細胞、NCI-H1672細胞
WRL68細胞系相關(guān)產(chǎn)品:D-283細胞、H-2107細胞、LC-2/ad細胞
87 MG細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs888 Lu細胞、KU.812細胞、HSC-T6細胞
RD-ES細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BSC1細胞、H-810細胞、OCI-AML-4細胞
MC 3T3-E1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUNE1細胞、WBF344細胞、OE19細胞
B16F0細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEK-293-FT細胞、NCI H2106細胞、MLA144細胞
NCI-H2228細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEM細胞、CaES-17細胞、Jiyoye(P-2003)細胞
F98細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MC-CAR細胞、YES 2細胞、YAC-1細胞
CWR22R細胞系相關(guān)產(chǎn)品:EAhy926細胞、A72細胞、SK_N_BE2C細胞
OVCAR-8/ADR細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Psi2 DAP細胞、MDAMB134VI細胞、X63-Ag8-653細胞
SAS細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GA-10-Clone-4細胞、NPA細胞、H-650細胞
A-253 Cell:人唾液腺腫瘤細胞系
UM-UC14細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH510細胞、OVCAR 8細胞、Psi2-DAP細胞
Hs706T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SR786細胞、JC細胞、Panc02細胞
Fetal Human Lens-124細胞系相關(guān)產(chǎn)品:bEnd.3[BEND3]細胞、A375-S2細胞、A-431細胞
SK HEP 01細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HcaF細胞、Wien-133細胞、CAMA-1細胞
DHBE細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW900細胞、Suzhou Human Glioma-44細胞、Hep 3B2_1-7細胞
HuTu-80細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Alpha Mouse Liver 12細胞、3T3-L1 ad細胞、Vero from pool #76細胞
GM07404D細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H1838細胞、NS20Y細胞、KP2細胞
A72細胞系相關(guān)產(chǎn)品:JROECL19細胞、P3/NS1/1-Ag4.1細胞、PF382細胞
ND7/23細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BA/F3細胞、LN229細胞、P3X63 Ag8細胞
Hs-852-T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:U-343MG細胞、H-295R細胞、ACC2細胞
Mono-Mac-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:ssMCF7細胞、ATC241細胞、Normal Rat Kidney細胞
MPC 11細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KLE細胞、McA-RH7777細胞、L cells (TK-)細胞
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