"PZ-HPV-7 Cell:人前列腺上皮細胞系 細胞形態(tài):上皮細胞樣 細胞生長:貼壁 細胞背景資料:前列腺上皮細胞;HPV18轉(zhuǎn)化;男性 H-2030細胞系相關產(chǎn)品:OCIAML4細胞、HCC827細胞、H-128細胞 SKNBE(1)細胞系相關產(chǎn)品:WERI-Rb 1細胞、HCC-1588細胞、NBL_S細胞 OCI-AML-3細胞系相關產(chǎn)品:HS-294T細胞、MHCC-97細胞、UMUC3細胞 JHH2細胞系相關產(chǎn)品:DMS 153細胞、KCL22細胞、675T細胞 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 PZ-HPV-7 Cell:人前列腺上皮細胞系 如何把細胞養(yǎng)的形態(tài)更好更漂亮。1.不同的細胞,喜歡的環(huán)境是不一樣的。這個不僅僅是說培養(yǎng)基的不同,還有就是細胞生長的空間密度問題。有一些細胞是數(shù)量多一點比較好生長,生長狀態(tài)也比較好。這種一般是屬于生長速度慢的細胞。譬如內(nèi)皮細胞。而有一些是細胞是數(shù)量少一點細胞狀態(tài)會生長的比較好,譬如巨噬細胞和某些腫瘤細胞。尤其是巨噬細胞,生長速度非常得快,貼壁速度很快,所以傳代時就應該留很少量的細胞,這樣細胞狀態(tài)會比較好。并且巨噬細胞比較喜歡扎堆生長,而堆與堆之間是有空間的。如果長成相連在一起的一滿片的時候,細胞形態(tài)基本上就會差了,老化的會比較多,對后期實驗結果是不好的。所以在養(yǎng)細胞的時候應該摸索該細胞喜歡的生長空間密度問題。2.對于有些人總是會遇到養(yǎng)的細胞形態(tài)怎么都不好的問題。這個其實是有一個方法可以改善的。對于貼壁細胞,如果細胞形態(tài)不好,(或者細胞形態(tài)不清晰,表面似有異物等)可以在傳代的時候進行如下操作:首先,倒掉舊的培養(yǎng)基,加入3ml新的培養(yǎng)基(有無血清的都可)洗滌一次,用滴管吸走,然后再加入3ml的培養(yǎng)基,進行預吹打,控制吹打力度,輕輕地大概沿著瓶底過一遍,然后吸走。這時侯再開始正式的消化、吹打。(巨噬細胞我們只吹打,不消化的);其次,把吹打下來的細胞懸液加入到新的培養(yǎng)瓶內(nèi),培養(yǎng)瓶事先加入培養(yǎng)基,放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),按時間點觀察細胞貼壁情況。10分鐘觀察一次,20分鐘,30分鐘觀察一次。選擇一個時間點,已經(jīng)有部分細胞貼壁的情況下,重新置于潔凈臺,底面朝上迅速倒出其中的培養(yǎng)基,加入3ml新培養(yǎng)基再輕輕洗一次。然后加入完全培養(yǎng)基培養(yǎng)。后續(xù)觀察細胞生長情況以及形態(tài)。我稱之為“二傳”。呵呵。如果一次效果還不理想,可重復多次。直到找到細胞完美形態(tài)。其中要注意,結合細胞喜歡的生長情況。喜歡多一點數(shù)量長得好的細胞你就等貼壁細胞比較多點的時候再傳。反之亦然。3.關于培養(yǎng)瓶內(nèi)加入培養(yǎng)基的量的問題。這個是要靠自己去摸索你所養(yǎng)的細胞的。并不是小的玻璃方瓶12ml,大方瓶14ml的。有些細胞反而是培養(yǎng)基少一點相反細胞形態(tài)會長得比較好。(可能也是競爭很大,有優(yōu)勝劣汰吧。呵呵。)對于生長速度快的細胞,易生長的細胞加少一點培養(yǎng)基細胞形態(tài)會更好。但是要注意換液掌握。4.關于選擇培養(yǎng)瓶的問題。個人發(fā)現(xiàn)生長速度快的細胞在玻璃瓶內(nèi)生長的狀態(tài)會比一次性相對好一些。而對于同一種細胞,在其生長旺盛快速的時期在玻璃瓶內(nèi)的生長狀態(tài)也比內(nèi)好。這可能是因為比玻璃瓶更容易貼壁。生長速度快的細胞在這種相對“更安逸”的環(huán)境里反而長得狀態(tài)不如玻璃瓶好。所以對于生長速度慢的細胞如果想要更漂亮的細胞狀態(tài),比玻璃瓶會好,對于生長速度慢的細胞,玻璃瓶則會更好。同樣,對于同一種細胞,在其生長速度慢的時候,會好一點,比如剛剛復蘇的時候,或者原代培養(yǎng)的時候。而在其生長旺盛的時候,玻璃瓶則相對會好一點。 細胞產(chǎn)品包裝:復蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細胞傳代方法:1:2-1:3傳代;每周換液2-3次。 常見細胞培養(yǎng)中一些問題總結:1)培養(yǎng)基中血清的比例多少合適?血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的含量多少會對細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。血清的含量一般為5%-15%,不要低于5%或高過20%,因為含量過低會導致細胞營養(yǎng)不足,過高則會破壞滲透壓平衡。一般建議血清含量為10%,可以適量加減;2)何時須更換培養(yǎng)基?視細胞生長密度而定,或遵照細胞株基本數(shù)據(jù)上的更換時間,按時更換培養(yǎng)基即可。還可以參照指示劑的顏色變化進行更換;3)購買的復蘇細胞,為何會有脫落?因為運輸?shù)倪^程中不可避免的會有震蕩,收到后可以離心收集;4)購買的細胞冷凍管經(jīng)解凍后,為何會發(fā)生細胞數(shù)目太少之情形?研究人員在冷凍細胞之培養(yǎng)時出現(xiàn)細胞數(shù)目太少,大都是因為離心過程操作上的失誤,造成細胞的物理性損傷,以及細胞流失。建議細胞解凍后不要立刻離心,應待細胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可;5)購買的細胞死亡或細胞存活率不佳可能原因?研究人員在細胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳,常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯誤。冷凍細胞解凍后,加以洗滌細胞和離心。懸浮細胞誤認為死細胞。培養(yǎng)溫度使用錯誤。細胞置于–80°C太久;6)收到的冷凍管瓶身破裂,瓶蓋有裂紋,或瓶蓋脫落之原因?冷凍管瓶蓋裂紋,或瓶身破裂,可能是因為操作者夾取冷凍管時用力不當,造成冷凍管裂損,建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動或松脫,乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象,冷凍管有可能因此而造成細胞污染,故冷凍管于放入和取出液氮桶時,均應立刻將冷凍管再一次扭緊。 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系 KM-12細胞系相關產(chǎn)品:T8細胞、MZCRC1細胞、U-251 MG細胞 PL-11細胞系相關產(chǎn)品:PA1細胞、RINm-5F細胞、B 95.8細胞 SW-1271細胞系相關產(chǎn)品:HeLa/S3細胞、HEK293T/17細胞、DLD 1細胞 Neukoplast細胞系相關產(chǎn)品:HKF細胞、Laboratory of Allergic Diseases 2細胞、TOV21G細胞 BEL-7404細胞系相關產(chǎn)品:CO115細胞、RPMI.8226細胞、High5細胞 細胞生長特性:貼壁 PZ-HPV-7 Cell:人前列腺上皮細胞系 正確的細胞復蘇需知事項:細胞凍存好了,接下來要注意什么問題呢?沒錯,就是記得到時間了,拿出來復蘇。那么,細胞復蘇的過程中又有哪些該注意的事項呢?細胞活力和形態(tài)檢查的作用何在?活力檢查——千萬不要使用不健康的細胞,可能有污染(真菌、支原體等),如果發(fā)現(xiàn)有污染毫不猶豫的丟棄!形態(tài)檢查——檢查細胞的固有形態(tài)和生長行為。凍存細胞:補充新的培養(yǎng)液——在您開始凍存細胞的前一天補充新的培養(yǎng)液。在細胞長至70%單層時收獲細胞,計數(shù)活細胞數(shù),用凍存液調(diào)整細胞密度~5 x106 Cell s/ml (根據(jù)不同的細胞類型調(diào)整);凍存液——用凍存液洗細胞并用凍存液重懸細胞,有不同類型的凍存液,根據(jù)細胞類型選擇最合適的凍存液(常用的凍存液成分有):5-10% DMSO——注意確保DMSO不含有其他的毒性物質(zhì);5-15%甘油;如果細胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長,應在50%條件培養(yǎng)基內(nèi)(細胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長24小時)內(nèi)凍存和復蘇。在凍存管上標記好細胞類型,日期,凍存人等信息,并保證每凍存管不超過1.5ml。放入液氮罐之前記錄凍存管的數(shù)量和位置。以最快的速度轉(zhuǎn)移凍存管知液氮罐內(nèi),因此,此步驟使用干冰,或者把凍存管浸入裝有液氮的小盒內(nèi)。此外還要注意,在凍存管上沒有足夠的空間記錄細胞的詳細信息,做好記錄是非常非常重要的!還有一個最重要的,一定要在異地的液氮罐內(nèi)保存同樣的一份細胞,以免其中的一個液氮罐出現(xiàn)問題!細胞正確的復蘇方式和正確的凍存方式同樣重要,熟記以下要點:當從液氮罐內(nèi)取出細胞時,有可能會出現(xiàn)凍存管破裂的情況,使用保護面罩和防護服十分必要;其實,細胞復蘇只是一個簡單的實驗,不過這其中卻不可避免有一些需要注意的細節(jié),不然,也不一定會盡如人意。例如說,人身健康方面:一定要記得做好防凍工作,戴上護目鏡;盡量降低DMSO對細胞的損傷等等。 細胞形態(tài)特性:詳見細胞說明書 MC3T3-E1 Subclone 14細胞系相關產(chǎn)品:P3/X63/Ag8.653細胞、FLS細胞、DMS 53細胞 BC-3-H-I細胞系相關產(chǎn)品:CHP126細胞、Lewis Lung細胞、NBL-3細胞 OCI AML5細胞系相關產(chǎn)品:H-1693細胞、Hs-688A-T細胞、X63Ag8.653細胞 Ej138細胞系相關產(chǎn)品:Hi5細胞、MB-49細胞、G422細胞 MDA435細胞系相關產(chǎn)品:NUGC-3細胞、MFE280細胞、JEG3細胞 EA hy 926細胞系相關產(chǎn)品:GM00637B細胞、SUDHL-6細胞、HS-68細胞 U373 MG細胞系相關產(chǎn)品:D-341細胞、NUGC-4細胞、H-1395細胞 PZ-HPV-7 Cell:人前列腺上皮細胞系 GM 2132細胞系相關產(chǎn)品:GM04154B細胞、GI-1細胞、EFM-192A細胞 TE354T細胞系相關產(chǎn)品:A2008細胞、RPMI6666細胞、PANC 813細胞 D324細胞系相關產(chǎn)品:IMR32細胞、NCI-H211細胞、RMC-1細胞 MC3T3-L1細胞系相關產(chǎn)品:C-Li-7細胞、BV2細胞、MES-SA-Dx5細胞 RPE-1細胞系相關產(chǎn)品:Human Hepatocyte Line 5細胞、H-1793細胞、HFLS細胞 SKOV-433細胞系相關產(chǎn)品:H1703細胞、Hs 729.T細胞、MC-26細胞 HuH-1細胞系相關產(chǎn)品:NIH:OVCAR-8細胞、DHL10細胞、NCI-H2291細胞 CCD18Co細胞系相關產(chǎn)品:HLE B-3細胞、NCI-H1385細胞、HBL 100細胞 38C13細胞系相關產(chǎn)品:YH細胞、P31-FUJ細胞、Tn5 B1-4細胞 38C13細胞系相關產(chǎn)品:YH細胞、P31-FUJ細胞、Tn5 B1-4細胞 SR-786細胞系相關產(chǎn)品:OCI/AML-4細胞、EFM-192B細胞、SK-RC-52細胞 Hep 3B2細胞系相關產(chǎn)品:JKT-1細胞、CCD-841-CoN細胞、769-P細胞 RPMI-7666細胞系相關產(chǎn)品:T HEECs細胞、NTERA-2/D1細胞、Hs281T細胞 KYSE-180細胞系相關產(chǎn)品:SUM190細胞、PC-2 [Human pancreatic carcinoma]細胞、SKNBE(1)細胞 PCI-4B細胞系相關產(chǎn)品:GDM-1細胞、NUGC4細胞、HUT125細胞 HCC-78細胞系相關產(chǎn)品:H358細胞、RPMC細胞、L-Wnt-3A細胞 C-4-I細胞系相關產(chǎn)品:Capan2細胞、beta-TC6細胞、Jijoye細胞 CCRF-CEM細胞系相關產(chǎn)品:SNU-601細胞、ZR-75-1細胞、OCLY8細胞 MV-4-11細胞系相關產(chǎn)品:OCILY-3細胞、SPC-A1細胞、UACC-893細胞 AM38細胞系相關產(chǎn)品:RPMI8226/S細胞、VMRCLCD細胞、Co 205細胞 HSC4細胞系相關產(chǎn)品:H1105細胞、mIMCD-3細胞、NSH細胞 B5537SKIN細胞系相關產(chǎn)品:MLTC-1細胞、HT 29細胞、OVCAR-3細胞 MC-116細胞系相關產(chǎn)品:SBC3細胞、NPA87-1細胞、H-510細胞 Wistar Institute, Susan Hayflick細胞系相關產(chǎn)品:HEK293-EBNA1細胞、RPMI-1846細胞、JROECL 21細胞 MEG01細胞系相關產(chǎn)品:OVCAR4細胞、Hs706T細胞、Murine Long bone Osteocyte-Y4細胞 6-T CEM細胞系相關產(chǎn)品:1.1B4細胞、TR146細胞、Walker256細胞 UPCISCC090細胞系相關產(chǎn)品:LA-4 [Mouse lung adenoma]細胞、2PK-3細胞、3T3F442A細胞 U266B1細胞系相關產(chǎn)品:OV433細胞、EO771細胞、OV1063細胞 NCIH187細胞系相關產(chǎn)品:J774.A1細胞、CMT.64細胞、HMEC1細胞 SK-Mel 1細胞系相關產(chǎn)品:Hs 683細胞、KYSE 140細胞、Murine Leydig Tumor Cell line-1細胞 SF539細胞系相關產(chǎn)品:K562細胞、SJ-Rh 30細胞、3T3NIH細胞 HMSC細胞系相關產(chǎn)品:A2780CP細胞、SNU-387細胞、KU.812細胞 NCIH526細胞系相關產(chǎn)品:Panc8.13細胞、WERI Rb-1細胞、ATC241細胞 TE671/RD細胞系相關產(chǎn)品:WB-F344細胞、NCIH345細胞、SNU739細胞 VERO C 1008細胞系相關產(chǎn)品:IMCD3細胞、FDCP-1細胞、Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-4細胞 HL-1細胞系相關產(chǎn)品:HK-2 [Human kidney]細胞、H1792細胞、OCI-Ly7細胞 SUNE1細胞系相關產(chǎn)品:GM06141B細胞、NCIH1930細胞、NCIH446細胞 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T細胞 HCC9204細胞系相關產(chǎn)品:BEL 7402細胞、RKO_AS45細胞、Roswell Park Memorial Institute 7666細胞 OVISE細胞系相關產(chǎn)品:HCC1954BL細胞、H2087細胞、HM細胞 P3/NS1/1-Ag4.1細胞系相關產(chǎn)品:H2444細胞、IR 983F細胞、LC1細胞 JVM-3細胞系相關產(chǎn)品:KYSE180細胞、HEL92.1.7細胞、Tca8113細胞 686LN-M4e細胞系相關產(chǎn)品:HSC-2細胞、Dx5細胞、786-O RCC細胞 NCI-H838細胞系相關產(chǎn)品:hTERT-RPE-1細胞、R1610細胞、Okayama University Medical School-23細胞 Panc_03_27細胞系相關產(chǎn)品:A2780/Taxol細胞、Strain KB細胞、GP293細胞 U251n細胞系相關產(chǎn)品:IM-9細胞、NCIH748細胞、H-1672細胞 OCILY3細胞系相關產(chǎn)品:Madison細胞、T-CAM2細胞、SK-MEL-1細胞 "
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