"A-431 Cell:人皮膚鱗癌細胞系
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
細胞生長：貼壁
細胞背景資料：該細胞源自一位患有皮膚鱗狀細胞癌的８５歲女性，是GiardDJ等人建立的一系列細胞株中的一株。該細胞在免疫抑制小鼠體內可成瘤，在瓊脂上培養(yǎng)可形成克?。皇且粋€超三倍體人細胞株。
GM03320D細胞系相關產(chǎn)品：TK.10細胞、HLEB3細胞、RH35細胞
SF767細胞系相關產(chǎn)品：A2780CP70細胞、TE14細胞、KE 37細胞
NPC-TW039細胞系相關產(chǎn)品：Madison lung細胞、HCC-1954細胞、Ramos (RA)細胞
PLC-PRF-5細胞系相關產(chǎn)品：NCIH345細胞、DU 4475細胞、207細胞
細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
A-431 Cell:人皮膚鱗癌細胞系
細胞傳代時消化的問題：可以這樣說，對于需要消化傳代的細胞，每一次的消化都是對這個細胞存活與否，狀態(tài)好與不好最至關重要的考驗。很多同學都遇到過這個問題，自己養(yǎng)的細胞開始的幾代長的還挺好的，可是穿過幾代之后就發(fā)現(xiàn)自己的細胞，狀態(tài)越來越差勁了。對于這個問題，可以非?？隙ǖ卣f，你的消化環(huán)節(jié)出問題了。你每一次的消化都讓細胞受到較大損傷了。所以，越長越差。在消化的過程中，你加入胰酶后，所有細胞都在被胰酶消化著，但是我們忽視了一個問題就是，細胞的生長狀態(tài)是不一樣的，每一個細胞的貼壁情況也是不一樣的，有的貼壁牢固，有的貼壁沒有那么牢固的，所以，讓所有的細胞消化同樣的時間對細胞是不公平的，他們受到了差別待遇當然會有脾氣啊。我后來對消化的方法進行了改良。爭取做到因材施教呵呵。我稱之為“四步消化法”。（以難消化細胞為例）；具體操作：１)首先不加胰酶，倒掉舊培養(yǎng)基加入少量新培養(yǎng)基洗１-２遍，（這是前奏，即為步，目的是將漂浮著的死細胞之類盡量洗掉。２)然后再加入少量新培養(yǎng)基直接吹打一遍，這一遍是把貼壁不牢固的細胞吹打下來。再用培養(yǎng)基洗一遍，兩次所得懸液混合傳入新瓶。即為第二步（你可以將這些傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面胰酶消化過的細胞對比觀察看誰長的更好一點就知道該細胞對胰酶的敏感度了。）３)吸干凈瓶內剩余液體，加入０.３ml左右的胰酶潤洗一遍，吸掉棄之，再加入１ml左右的胰酶消化。消化的同時置于顯微鏡下觀察，待細胞與細胞之間間隙明顯的時候立即吸掉胰酶與干凈子彈頭里備用，加入新培養(yǎng)基開始吹打，吹打２-３遍后吸取懸液于試管或新瓶暫存。用２ml左右新培養(yǎng)基洗一遍與前面的混合。（你也可以傳入新瓶培養(yǎng)，以與后面及前面的做對比。）這是第三步。４)然后把前面剛吸出來的胰酶重新加進去瓶里繼續(xù)消化剩余的貼壁牢固的細胞。當然你也可以用新的胰酶，如果你們那比較富裕的話，呵呵。繼續(xù)鏡下觀察，待剩余細胞間隙明顯，細胞獨立開來的時候，吸掉胰酶，加入新培養(yǎng)基吹打。懸液傳入新瓶培養(yǎng)（根據(jù)實際情況你自己把握）。這是第四步。其實還可以有第五步，對于特別難消化的細胞和對胰酶特別敏感的細胞的話，你可以繼續(xù)加第五步甚至第六步。為了細胞更好的狀態(tài)，更漂亮的樣子，沒辦法，你必須分多批多次消化，這樣才能限度地將胰酶對細胞的損傷降到最低，保證細胞的狀態(tài)能夠。當然了，如果細胞是屬于那種很容易消化的細胞，像RAW２６４.７，僅僅第二步就搞定了。就沒必要第三步第四步了。這個是需要你在實驗中能夠自己用心去體會的。建議你接受一個新細胞時把各步消化的細胞分別培養(yǎng)起來做比較，去摸索好細胞對胰酶的要求。便于你后續(xù)實驗的開展。將細胞消化分成這幾步，除了是為了避免胰酶對細胞的損傷之外，還有一個更重要的作用就是，可以程度地把細胞吹打成單個單個的狀態(tài)，不成片不連體。
細胞產(chǎn)品包裝：復蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)
細胞傳代方法：１：２傳代
培養(yǎng)細胞真的不難，最關鍵幾點：１)所有的東西使用，如果你用的血清、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、胰酶什么的都是進口的，真的很難相信你會把細胞養(yǎng)壞；２)動作要快，胰酶消化，換液什么，細胞暴露在空氣中的時間越少越好。另外，要掌握好胰酶消化時間，所謂的細胞狀態(tài)差，很多時候是傳代的原因；３)有時間的話，需要細胞計數(shù)，傳相應數(shù)目的細胞到培養(yǎng)皿中，可以大致清楚細胞的生長曲線，不會臨時要處理，手足無措；４)要做什么心里要非常清楚，合理安排時間，傳代細胞的實驗穿插進行，可以節(jié)省很多時間，也不會耽誤別人的實驗；５)個人的實驗器具自己收一套，不要和別人混用，最近換了什么新的東西稍微記一下，試劑一旦懷疑污染，馬上丟；６)傳代細胞不能進去太多人，避免相互干擾。每天對待細胞比孝敬爹媽還用心，那真是捧在手里怕碎了，含在嘴里怕化了，看在眼里怕丟了，培養(yǎng)細胞時有哪些經(jīng)驗教訓可以分享呢?１)嚴格無菌操作，多噴噴酒精，要是對滅菌的東西不放心，自己包自己送自己烘干；２)不要和別人共用試劑耗材，自己準備一套；３)有可能的話在拿到新細胞的時候做好支原體衣原體檢測；４)水浴鍋很臟，生化培養(yǎng)箱要是得手動加濕的話盤里的水也會很臟，勤換(滅菌水加進去)；５)晚上離開的時候給傳代細胞照紫外，超凈臺是用完就開；６)是同一時間就你一個人在用傳代細胞在養(yǎng)細胞。
細胞來源說明：細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系
8402細胞系相關產(chǎn)品：VMCUB1細胞、BMDC細胞、WM 2664細胞
SAOS 2細胞系相關產(chǎn)品：EO771細胞、SU.86細胞、Toledo細胞
NCTC-1469細胞系相關產(chǎn)品：COLO-357細胞、Jeko1細胞、FRhK4細胞
COLO.205細胞系相關產(chǎn)品：PC3細胞、RCM1細胞、NCI-1155細胞
Verda reno細胞系相關產(chǎn)品：Roswell Park Memorial Institute 1788細胞、H9c2(2-1)細胞、KG1A細胞
細胞生長特性：貼壁生長
A-431 Cell:人皮膚鱗癌細胞系
細胞復蘇相關注意事項：１.取細胞的過程中注意帶好防凍手套，護目鏡。此項尤為重要，細胞凍存管可能漏入液氮，解凍時凍存管中的氣溫急劇上升，可導致爆炸。２.凍存液的問題：凍存液的配置已是常識，在這里不作詳述，但二甲基亞砜(DMSO )對細胞不是完全無毒副作用，在常溫下，二甲基亞砜對細胞的毒副作較大，因此，必須在１-２min內使凍存液完全融化。如果復蘇溫度太慢，會造成細胞的損傷，二甲基亞砜(DMSO)選擇進口產(chǎn)品。３.離心前須加入少量培養(yǎng)液。細胞解凍后二甲基亞砜濃度較高，注意加入少量培養(yǎng)液可稀釋其濃度，以減少對細胞的損傷。４.離心問題：目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng)，第二天換液。因為離心的目的是兩個，去除DMSO，去除死細胞，這個是標準流程，但對一般人來說，把握不好離心轉速和時間，轉的不夠活細胞沉底的少，細胞就全被扔掉了，轉過了活細胞會受壓過大，死亡。此外在操作過程中容易污染，所以不推薦。另一種說法為細胞懸液中含有二甲基亞砜(DMSO)，DMSO對細胞有一定的毒副作用，所以須將離心后的液體前倒凈，且一定倒干凈。我在試驗中按照常規(guī)的離心分裝的方法進行復蘇，結果無異常。５.細胞貼壁少的問題：教科書中說明凍存細胞解凍時１ml細胞液要加１０ml-１５ml培養(yǎng)液，而在我的試驗中的經(jīng)驗總結為培養(yǎng)基越少細胞越容易貼附。６.復蘇細胞分裝的問題：試驗中我的經(jīng)驗總結為復蘇１管細胞一般可分裝到１-２只培養(yǎng)瓶中，分裝過多，細胞濃度過低，不利于細胞的貼壁。７.加培養(yǎng)基的量放入問題：這個量的多少的把握主要涉及到的問題DMSO的濃度，從如果你加培養(yǎng)基的太少，那么DMSO的濃度就會比較大，就會影響細胞生長，從以前的資料來看，DMSO的濃度在小于０.５%的時候對一般細胞沒有什么影響，還有一個說法是１%。所以如果你的凍存液的濃度是１０%DMSO的話那么加１０ml以上的培養(yǎng)基就恰好稀釋到了無害濃度。
細胞形態(tài)特性：上皮樣
LN 382細胞系相關產(chǎn)品：SK-N-FI細胞、T98G細胞、HuNS1細胞
Tb 1 Lu細胞系相關產(chǎn)品：MCF.10A細胞、BEL 7402細胞、NHRF細胞
SKMEL3細胞系相關產(chǎn)品：H146細胞、NCI-ADR-RES細胞、COV434細胞
HCC94細胞系相關產(chǎn)品：HCC-2218細胞、AN-3細胞、H2227細胞
SK.MEL.5細胞系相關產(chǎn)品：Co 115細胞、HCT.116細胞、PLA801C細胞
NCIH1734細胞系相關產(chǎn)品：SUDHL-1細胞、NCI-H1395細胞、SW-403細胞
RPMI8402細胞系相關產(chǎn)品：C-33 A細胞、MDCC MSB1細胞、Rat 1細胞
A-431 Cell:人皮膚鱗癌細胞系
L540細胞系相關產(chǎn)品：MES-SA/Dx5細胞、P31 FUJ細胞、RS(4;11)細胞
AAV-293細胞系相關產(chǎn)品：P19細胞、A1847細胞、HECV細胞
RMG-1細胞系相關產(chǎn)品：V79-GalK1細胞、LOU-NH-91細胞、OSC-19細胞
NFHIOSE-29細胞系相關產(chǎn)品：NCM356細胞、NCI-H2029細胞、NCIH1341細胞
SNU-620細胞系相關產(chǎn)品：DoHH2細胞、NPC-TW01細胞、NCIH1435細胞
Duke University 4475細胞系相關產(chǎn)品：SUM-190PT細胞、EM3細胞、CMT64細胞
T-47D細胞系相關產(chǎn)品：149 PT細胞、HT115細胞、BCaP-37細胞
HOC-1細胞系相關產(chǎn)品：SCC 25細胞、Cloudman S91 melanoma clone M-3細胞、H-2023細胞
HEL-299細胞系相關產(chǎn)品：EoL-1細胞、TE3A細胞、NCIH810細胞
HEL-299細胞系相關產(chǎn)品：EoL-1細胞、TE3A細胞、NCIH810細胞
FET細胞系相關產(chǎn)品：CTLL-2細胞、N-Tera-2細胞、H-1563細胞
SMA-560細胞系相關產(chǎn)品：MD Anderson-Metastatic Breast-361細胞、801-D細胞、Tu-686細胞
MC/CAR細胞系相關產(chǎn)品：A-2058細胞、A 72細胞、WEHI 3B細胞
C127細胞系相關產(chǎn)品：M 1細胞、PTK 1細胞、TE6細胞
NCI-H510細胞系相關產(chǎn)品：NCI-H1755細胞、BE(2)M17細胞、BI-Mel細胞
GM04154細胞系相關產(chǎn)品：NE-1細胞、PC9細胞、CEL細胞
C3H10T1/2 clone8細胞系相關產(chǎn)品：COS-1細胞、MCF10A細胞、NCIH322細胞
MDCK Type II細胞系相關產(chǎn)品：LMH細胞、Michigan Cancer Foundation-12F細胞、HEC-1A細胞
CCRFCEM細胞系相關產(chǎn)品：MM-1S細胞、SR786細胞、HTori:3細胞
PNEC30細胞系相關產(chǎn)品：Ly7細胞、FHC細胞、BCPAP細胞
F56 [Human neoplasm]細胞系相關產(chǎn)品：CL-11細胞、PANC-02-03細胞、TE-85 clone 5細胞
SKNEP1細胞系相關產(chǎn)品：PG-LH7細胞、BV173細胞、HT3細胞
T84細胞系相關產(chǎn)品：A-2780細胞、KU 812細胞、GTL16細胞
KNS-42細胞系相關產(chǎn)品：P-388D1細胞、mRMEC細胞、T47-D細胞
W133細胞系相關產(chǎn)品：HN 4細胞、UPCISCC090細胞、Sp2/0細胞
130-T細胞系相關產(chǎn)品：G361-mel細胞、Pt-K2細胞、SUM 159PT細胞
EBNA-293細胞系相關產(chǎn)品：SKNBE(1)細胞、QBC(939)細胞、GP5d細胞
KMB17細胞系相關產(chǎn)品：Verda reno細胞、CNE-2Z細胞、801-D細胞
HNE-2細胞系相關產(chǎn)品：KOPN-8細胞、CL1.0細胞、Hepa 1-6細胞
CAL-148細胞系相關產(chǎn)品：253J-Bladder-V細胞、T-47-D細胞、COLO680N細胞
MRC5細胞系相關產(chǎn)品：SKNBE-1細胞、DSL6A/C1細胞、PCI-4B細胞
CT26-clone 25細胞系相關產(chǎn)品：MRCV細胞、Hce8693細胞、SF 539細胞
LU65細胞系相關產(chǎn)品：130 T細胞、H2405細胞、SW 1573細胞
MJ細胞系相關產(chǎn)品：RN細胞、NCI-SNU-119細胞、Jurkat-FHCRC細胞
SRA 01/04細胞系相關產(chǎn)品：HN4細胞、CEM-0細胞、MC38細胞
NCI N87細胞系相關產(chǎn)品：MGC-803細胞、MV4-11細胞、NCIH208細胞
Malme3M細胞系相關產(chǎn)品：NCIH1993細胞、MDCK2細胞、HEP3B2細胞
DiFi細胞系相關產(chǎn)品：SUDHL10細胞、MLM細胞、8305C細胞
HCC44細胞系相關產(chǎn)品：NCIH358細胞、SF295細胞、ME1細胞
BT549細胞系相關產(chǎn)品：HEC1-A細胞、U343MG細胞、DMS79細胞
VP303細胞系相關產(chǎn)品：Huh-7細胞、COLO 205細胞、MOLP-8細胞
AKR細胞系相關產(chǎn)品：PA-TU S細胞、RS 4;11細胞、184A1細胞
NG108-15細胞系相關產(chǎn)品：MRAEC細胞、Centre Antoine Lacassagne-78細胞、AA-Mel細胞
A-431 Cell:人皮膚鱗癌細胞系
D341細胞系相關產(chǎn)品：hFOB1.19細胞、CAL-120細胞、KASUMI6細胞
HPAF細胞系相關產(chǎn)品：Hs 729細胞、SKMEL-24細胞、SNK1細胞
NCIH508細胞系相關產(chǎn)品：UACC893細胞、SUM-52PE細胞、Evsa T細胞
Jiyoye細胞系相關產(chǎn)品：ABC-1細胞、LNCaP C4-2細胞、3AO細胞
SW620細胞系相關產(chǎn)品：Granta 519細胞、MD Anderson-Metastatic Breast-436細胞、Vero-76細胞
Cates-1B細胞系相關產(chǎn)品：BHK 21細胞、AAV-293細胞、DC 2.4細胞
LCMS細胞系相關產(chǎn)品：KRC-Y細胞、Tj-905細胞、CT-26細胞
SW-954細胞系相關產(chǎn)品：HB 611細胞、KG1細胞、PC 12細胞
UM2細胞系相關產(chǎn)品：Pt K1 (NBL-3)細胞、MDA-MB-435S細胞、Molm 14細胞
NCI-H1668細胞系相關產(chǎn)品：NPA細胞、Michigan Cancer Foundation-7細胞、HOS TE85細胞
HCE-2 [50.B1]細胞系相關產(chǎn)品：G-401細胞、HRA-19細胞、NCIH378細胞
GM02132細胞系相關產(chǎn)品：SNU-620細胞、Dami細胞、OCI-Ly19細胞
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