"SK-N-BE(2) Cell:人神經(jīng)母細胞瘤細胞系 細胞形態(tài):上皮細胞樣 細胞生長:貼壁 細胞背景資料:1972年11月從一們多次化療及放療的擴散性神經(jīng)母細胞瘤患兒骨髓穿刺物中建立了SK-N-BE(2)神經(jīng)母細胞瘤細胞株。 該細胞顯示中等水平的多巴胺-β-羥基酶活性。 有報道稱SK-N-BE(2)細胞的飽和濃度超過1x106細胞/平方厘米。細胞形態(tài)多樣,有的有長突觸,有的呈上皮細胞樣。 細胞會聚集,形成團塊并浮起 H-7721細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TSU-Pr1細胞、TGBC-11-TKB細胞、HEp-2細胞 MKN-28細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H820細胞、Japanese Tissue Culture-39細胞、HTh 74細胞 373MG細胞系相關(guān)產(chǎn)品:624 MEL細胞、ARPE19細胞、HMEL細胞 HIEC-6細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM04679細胞、SW1573細胞、RPMI2650細胞 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 SK-N-BE(2) Cell:人神經(jīng)母細胞瘤細胞系 細胞培養(yǎng)過程中相關(guān)問題總結(jié):懸浮性細胞應(yīng)如何繼代處理?一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原培養(yǎng)角瓶中,稀釋細胞濃度即可,若培養(yǎng)液太多時,可將培養(yǎng)角瓶口端稍微抬高,直到無法容納為止。分瓶時取出一部份含細胞之培養(yǎng)液至另一新的培養(yǎng)角瓶,加入新鮮培養(yǎng)基稀釋至適當濃度,重復(fù)前述步驟即可。欲將一般動物細胞離心下來,其離心速率應(yīng)為多少轉(zhuǎn)速?欲回收動物細胞,其離心速率一般為300xg(約1,000rpm),5-10分鐘,過高之轉(zhuǎn)速,將造成細胞死亡;細胞之接種密度為何?依照細胞株基本數(shù)據(jù)上之接種密度或稀釋分盤之比例接種即可。細胞數(shù)太少或稀釋的太多亦是造成細胞無法生長之一重要原因;細胞冷凍培養(yǎng)基之成份為何?動物細胞冷凍保存時最常使用的冷凍培養(yǎng)基是含5-10%DMSO(dimethyl sulfoxide)和90-95%原來細胞生長用之新鮮培養(yǎng)基均勻混合之。注意:由于DMSO稀釋時會放出大量熱能,故不可將DMSO直接加入細胞液中,必須使用前先行配制完成;DMSO之等級和無菌過濾之方式為何?冷凍保存使用之DMSO等級,必須為Tissue culture grade之DMSO,其本身即為無菌狀況,次開瓶后應(yīng)立即少量分裝于無菌試管中,保存于4°C,避免反復(fù)冷凍解凍造成DMSO之裂解而釋出有害物質(zhì),并可減少污染之機會。若要過濾DMSO,則須使用耐DMSO之Nylon材質(zhì)濾膜;冷凍保存細胞之方法?冷凍保存方法一:冷凍管置于4°C 30~60分鐘→ (-20°C 30分鐘)→-80°C 16~18小時(或隔夜)→液氮槽vaporphase長期儲存。冷凍保存方法二:冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3°C至–80°C以下,再放入液氮槽vapor phase長期儲存。-20°C不可超過1小時,以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80°C冰箱中,惟存活率稍微降低一些;細胞欲冷凍保存時,細胞冷凍管內(nèi)應(yīng)有多少細胞濃度?冷凍管內(nèi)細胞數(shù)目一般為1x10(6)cells/ml vial,融合瘤細胞則以5x10(6)cells/ml vial為宜;應(yīng)如何避免細胞污染?細胞污染的種類可分成細菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉?jié){菌。主要的污染原因為無菌操作技術(shù)不當、操作室環(huán)境不佳、污染之血清和污染之細胞等。嚴格之無菌操作技術(shù)、清潔的環(huán)境、與品質(zhì)良好之細胞來源和培養(yǎng)基配制是減低污染之方法;如果細胞發(fā)生微生物污染時,應(yīng)如何處理?直接滅菌后丟棄之。 細胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細胞傳代方法:1:2傳代 常見細胞培養(yǎng)中一些問題總結(jié):1)培養(yǎng)基中血清的比例多少合適?血清是細胞培養(yǎng)上一個極為重要的營養(yǎng)來源,所以血清的含量多少會對細胞的生長會產(chǎn)生極大的影響。血清的含量一般為5%-15%,不要低于5%或高過20%,因為含量過低會導(dǎo)致細胞營養(yǎng)不足,過高則會破壞滲透壓平衡。一般建議血清含量為10%,可以適量加減;2)何時須更換培養(yǎng)基?視細胞生長密度而定,或遵照細胞株基本數(shù)據(jù)上的更換時間,按時更換培養(yǎng)基即可。還可以參照指示劑的顏色變化進行更換;3)購買的復(fù)蘇細胞,為何會有脫落?因為運輸?shù)倪^程中不可避免的會有震蕩,收到后可以離心收集;4)購買的細胞冷凍管經(jīng)解凍后,為何會發(fā)生細胞數(shù)目太少之情形?研究人員在冷凍細胞之培養(yǎng)時出現(xiàn)細胞數(shù)目太少,大都是因為離心過程操作上的失誤,造成細胞的物理性損傷,以及細胞流失。建議細胞解凍后不要立刻離心,應(yīng)待細胞生長隔夜后再更換培養(yǎng)基即可;5)購買的細胞死亡或細胞存活率不佳可能原因?研究人員在細胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳,常見原因可歸納為:培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯誤。冷凍細胞解凍后,加以洗滌細胞和離心。懸浮細胞誤認為死細胞。培養(yǎng)溫度使用錯誤。細胞置于–80°C太久;6)收到的冷凍管瓶身破裂,瓶蓋有裂紋,或瓶蓋脫落之原因?冷凍管瓶蓋裂紋,或瓶身破裂,可能是因為操作者夾取冷凍管時用力不當,造成冷凍管裂損,建議使用止血鉗小心夾取。另冷凍管瓶蓋松動或松脫,乃因熱脹冷縮之物理現(xiàn)象,冷凍管有可能因此而造成細胞污染,故冷凍管于放入和取出液氮桶時,均應(yīng)立刻將冷凍管再一次扭緊。 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系 MOLT-3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HKBML細胞、NE1-E6E7細胞、BEL-7402細胞 Rat Glomerular Endothelial細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH747細胞、JeKo-1細胞、NCI747細胞 C33細胞系相關(guān)產(chǎn)品:2B4細胞、B16-F10--RED細胞、MNNG-HOS (TE 85, clone F-5)細胞 Biopsy xenograft of Pancreatic Carcinoma line-3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:FU-97細胞、OCM-1細胞、WM-451Lu細胞 GB1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO 680N細胞、HL1細胞、rUCMSCs細胞 細胞生長特性:貼壁生長 SK-N-BE(2) Cell:人神經(jīng)母細胞瘤細胞系 正確的細胞復(fù)蘇需知事項:細胞凍存好了,接下來要注意什么問題呢?沒錯,就是記得到時間了,拿出來復(fù)蘇。那么,細胞復(fù)蘇的過程中又有哪些該注意的事項呢?細胞活力和形態(tài)檢查的作用何在?活力檢查——千萬不要使用不健康的細胞,可能有污染(真菌、支原體等),如果發(fā)現(xiàn)有污染毫不猶豫的丟棄!形態(tài)檢查——檢查細胞的固有形態(tài)和生長行為。凍存細胞:補充新的培養(yǎng)液——在您開始凍存細胞的前一天補充新的培養(yǎng)液。在細胞長至70%單層時收獲細胞,計數(shù)活細胞數(shù),用凍存液調(diào)整細胞密度~5 x106 Cell s/ml (根據(jù)不同的細胞類型調(diào)整);凍存液——用凍存液洗細胞并用凍存液重懸細胞,有不同類型的凍存液,根據(jù)細胞類型選擇最合適的凍存液(常用的凍存液成分有):5-10% DMSO——注意確保DMSO不含有其他的毒性物質(zhì);5-15%甘油;如果細胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長,應(yīng)在50%條件培養(yǎng)基內(nèi)(細胞在無血清培養(yǎng)基內(nèi)生長24小時)內(nèi)凍存和復(fù)蘇。在凍存管上標記好細胞類型,日期,凍存人等信息,并保證每凍存管不超過1.5ml。放入液氮罐之前記錄凍存管的數(shù)量和位置。以最快的速度轉(zhuǎn)移凍存管知液氮罐內(nèi),因此,此步驟使用干冰,或者把凍存管浸入裝有液氮的小盒內(nèi)。此外還要注意,在凍存管上沒有足夠的空間記錄細胞的詳細信息,做好記錄是非常非常重要的!還有一個最重要的,一定要在異地的液氮罐內(nèi)保存同樣的一份細胞,以免其中的一個液氮罐出現(xiàn)問題!細胞正確的復(fù)蘇方式和正確的凍存方式同樣重要,熟記以下要點:當從液氮罐內(nèi)取出細胞時,有可能會出現(xiàn)凍存管破裂的情況,使用保護面罩和防護服十分必要;其實,細胞復(fù)蘇只是一個簡單的實驗,不過這其中卻不可避免有一些需要注意的細節(jié),不然,也不一定會盡如人意。例如說,人身健康方面:一定要記得做好防凍工作,戴上護目鏡;盡量降低DMSO對細胞的損傷等等。 細胞形態(tài)特性:上皮細胞樣 J774.A1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:DMS114細胞、UMR 106細胞、RGC-6細胞 OCI Ly3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Tokyo Medical and Dental university 8細胞、MDAMB436細胞、CESS細胞 H-508細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LLCPK1細胞、NCIH727細胞、University of Arizona Cell Culture-812細胞 HuH28細胞系相關(guān)產(chǎn)品:IHH4細胞、LS 513細胞、PTK-2細胞 NG108-15細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MRAEC細胞、Centre Antoine Lacassagne-78細胞、AA-Mel細胞 P30-OHK細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA468細胞、KU812-F細胞、H441細胞 CEM C7細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NPC-TW 039細胞、A2008細胞、BeWo細胞 SK-N-BE(2) Cell:人神經(jīng)母細胞瘤細胞系 HPC-Y5細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM02131A細胞、H1694細胞、IEC 6細胞 HEL 299細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H2085細胞、MM.1S細胞、L-5178-Y細胞 Case 3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH2106細胞、BGC823細胞、H1666細胞 ARO81-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:IBRS2細胞、Bowes melanoma cells細胞、CoCL2細胞 SCC154細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Plaepi 34細胞、VM-CUB1細胞、BHT101細胞 COLO 680N細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SVG(P12)細胞、J45.01細胞、5637細胞 QGY7701細胞系相關(guān)產(chǎn)品:U343細胞、CX1細胞、AM細胞 Roswell Park Memorial Institute 7951細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCI-ADR-RES細胞、SKN-AS細胞、A-375.S2細胞 H-647細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Kit225/K6細胞、P3X63 AG 8.653細胞、NRK49F細胞 Mc Coy細胞系相關(guān)產(chǎn)品:FHs74 Int細胞、526細胞、KASUMI1細胞 L-M[TK-]細胞系相關(guān)產(chǎn)品:FRTL 5細胞、H2286細胞、C57 Mouse Tumor 93細胞 GM04154B細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CG-4細胞、HCV-29細胞、SNU-354細胞 CW2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Epstein-Barr-2細胞、MJ細胞、HS 683T細胞 L 132細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Roswell Park Memorial Institute 8226細胞、MES-13細胞、H1694細胞 PC14細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LMTK-細胞、Sup T-1細胞、HOPC細胞 MUTZ-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKM1細胞、HEK293-EBNA細胞、HIT-T15細胞 Tokyo Medical and Dental university 8細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CEK細胞、HB 611細胞、FLC-7細胞 H1184細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OV-CA 432細胞、KCL22S細胞、YAC細胞 CNE-2Z細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Centre Antoine Lacassagne-27細胞、WM35細胞、Line 870 Emory University-4細胞 MBMEC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CNLMG-B5537SKIN細胞、alphaTC1 Clone 6細胞、UPCI:SCC90細胞 SK-MEL-24細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HL 60細胞、EM-3細胞、NuTu 19細胞 MLOY4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PC615.3細胞、GM346細胞、GM00346細胞 C 643細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NPC-TW 01細胞、HTh74細胞、MDA-453細胞 MBVP細胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO-16細胞、Human Corneal Endothelial Cells-12細胞、SK-N-DZ細胞 MUM2B細胞系相關(guān)產(chǎn)品:EL4細胞、H-187細胞、KP-N-RT-BM-1細胞 HNSC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCASMC細胞、MDAMB435S細胞、HEL細胞 SK-CO-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-1734細胞、NCI-H1437細胞、CV 1細胞 GM03569細胞系相關(guān)產(chǎn)品:UCLA NPA-87-1細胞、NCIH3255細胞、BV2細胞 Centre Antoine Lacassagne-51細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LWnt-3A細胞、HT 1197.T細胞、SRA01/04細胞 KYSE50細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HMVEC細胞、OCI-Ly10細胞、EJ-1細胞 NL-20細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RERF-LC-MS細胞、9L細胞、Hs832.Tc細胞 P3-X63-Ag8細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Colo-678細胞、Sp2/mIL-6細胞、HEY A8細胞 MFD-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LAPC-4細胞、JHH-7細胞、MC3T3-E1 Subclone 24細胞 MDA-MB-134VI細胞系相關(guān)產(chǎn)品:OCI-AML3細胞、LM-TK-細胞、NCI-H2087細胞 PL-11細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PA1細胞、RINm-5F細胞、B 95.8細胞 H1155細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HM細胞、C32 [Human melanoma]細胞、NCIH526細胞 LCMS細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KRC-Y細胞、Tj-905細胞、CT-26細胞 NPC-TW039細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Madison lung細胞、HCC-1954細胞、Ramos (RA)細胞 P3X63-Ag8.653細胞系相關(guān)產(chǎn)品:8226/S細胞、PC14細胞、OV3121細胞 MCF7ADR細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SNU-5細胞、A549ATCC細胞、BrCL12細胞 Madin-Darby Canine Kidney細胞系相關(guān)產(chǎn)品:U-251細胞、CCC-HEL-1細胞、RERF-LC-MS細胞 MDA-MB-436細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CCRF/CEM/0細胞、MRASMC細胞、SCC090細胞 IAR-20細胞系相關(guān)產(chǎn)品:LM1細胞、VA-ES-BJ細胞、BE(2)-M17細胞 SK-N-BE(2) Cell:人神經(jīng)母細胞瘤細胞系 NCI-H596細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDCK supertube細胞、Vero C1008細胞、Los Angeles Prostate Cancer-4細胞 H841細胞系相關(guān)產(chǎn)品:B16 F1細胞、MonoMac1細胞、TE-671細胞 CCD-841CoN細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HPF細胞、Tsup-1細胞、hTERT-RPE細胞 GBCSD細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Vx2細胞、IGROV細胞、Hs 274.T細胞 PLA-802細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BC-025細胞、H1930細胞、SK-ChA1細胞 B16 melanoma F10細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH69細胞、OKT3細胞、EFO-27細胞 CHOS細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MCF 7細胞、HBE 135-E6E7細胞、TYKnu細胞 Ramos (RA 1)細胞系相關(guān)產(chǎn)品:hESC細胞、K7M2 wt細胞、SW-1990細胞 NCI-H1573細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CCD19-Lu細胞、CNE1-LUC細胞、Scott細胞 GM00346細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Ontario Cancer Institute-Acute Myeloid Leukemia-3細胞、BT474細胞、HFL-1細胞 Granta519細胞系相關(guān)產(chǎn)品:TE15細胞、Balb/c 3T3細胞、Ishikawa細胞 LS174細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HIBEC細胞、Colon26細胞、Human Corneal Epithelial cells-Transformed細胞 "
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