"SK-N-SH Cell:人神經(jīng)母細胞瘤細胞系 細胞形態(tài):上皮細胞樣 細胞生長:貼壁 細胞背景資料:SK-N-SH細胞系由J.L.Bieder建系,它與SK-N-MC所不同的是倍增時間較長且多巴胺-β-羥基酶水平較高。 SK-N-SH在細胞介導(dǎo)的細胞毒性試驗中用作靶細胞系。 NBL-4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:UMRC-2細胞、Simpson細胞、NCI-H498細胞 Capan 2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CHO-K1細胞、NCI-H128細胞、ACC-3細胞 DU145細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RKN細胞、Mc Coy細胞、1.1B4細胞 BALL-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HepG2細胞、SACC-LM細胞、LCLC-103H細胞 細胞物種來源:人源或鼠源等其它物種來源 SK-N-SH Cell:人神經(jīng)母細胞瘤細胞系 如何把細胞養(yǎng)的形態(tài)更好更漂亮。1.不同的細胞,喜歡的環(huán)境是不一樣的。這個不僅僅是說培養(yǎng)基的不同,還有就是細胞生長的空間密度問題。有一些細胞是數(shù)量多一點比較好生長,生長狀態(tài)也比較好。這種一般是屬于生長速度慢的細胞。譬如內(nèi)皮細胞。而有一些是細胞是數(shù)量少一點細胞狀態(tài)會生長的比較好,譬如巨噬細胞和某些腫瘤細胞。尤其是巨噬細胞,生長速度非常得快,貼壁速度很快,所以傳代時就應(yīng)該留很少量的細胞,這樣細胞狀態(tài)會比較好。并且巨噬細胞比較喜歡扎堆生長,而堆與堆之間是有空間的。如果長成相連在一起的一滿片的時候,細胞形態(tài)基本上就會差了,老化的會比較多,對后期實驗結(jié)果是不好的。所以在養(yǎng)細胞的時候應(yīng)該摸索該細胞喜歡的生長空間密度問題。2.對于有些人總是會遇到養(yǎng)的細胞形態(tài)怎么都不好的問題。這個其實是有一個方法可以改善的。對于貼壁細胞,如果細胞形態(tài)不好,(或者細胞形態(tài)不清晰,表面似有異物等)可以在傳代的時候進行如下操作:首先,倒掉舊的培養(yǎng)基,加入3ml新的培養(yǎng)基(有無血清的都可)洗滌一次,用滴管吸走,然后再加入3ml的培養(yǎng)基,進行預(yù)吹打,控制吹打力度,輕輕地大概沿著瓶底過一遍,然后吸走。這時侯再開始正式的消化、吹打。(巨噬細胞我們只吹打,不消化的);其次,把吹打下來的細胞懸液加入到新的培養(yǎng)瓶內(nèi),培養(yǎng)瓶事先加入培養(yǎng)基,放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),按時間點觀察細胞貼壁情況。10分鐘觀察一次,20分鐘,30分鐘觀察一次。選擇一個時間點,已經(jīng)有部分細胞貼壁的情況下,重新置于潔凈臺,底面朝上迅速倒出其中的培養(yǎng)基,加入3ml新培養(yǎng)基再輕輕洗一次。然后加入完全培養(yǎng)基培養(yǎng)。后續(xù)觀察細胞生長情況以及形態(tài)。我稱之為“二傳”。呵呵。如果一次效果還不理想,可重復(fù)多次。直到找到細胞完美形態(tài)。其中要注意,結(jié)合細胞喜歡的生長情況。喜歡多一點數(shù)量長得好的細胞你就等貼壁細胞比較多點的時候再傳。反之亦然。3.關(guān)于培養(yǎng)瓶內(nèi)加入培養(yǎng)基的量的問題。這個是要靠自己去摸索你所養(yǎng)的細胞的。并不是小的玻璃方瓶12ml,大方瓶14ml的。有些細胞反而是培養(yǎng)基少一點相反細胞形態(tài)會長得比較好。(可能也是競爭很大,有優(yōu)勝劣汰吧。呵呵。)對于生長速度快的細胞,易生長的細胞加少一點培養(yǎng)基細胞形態(tài)會更好。但是要注意換液掌握。4.關(guān)于選擇培養(yǎng)瓶的問題。個人發(fā)現(xiàn)生長速度快的細胞在玻璃瓶內(nèi)生長的狀態(tài)會比一次性相對好一些。而對于同一種細胞,在其生長旺盛快速的時期在玻璃瓶內(nèi)的生長狀態(tài)也比內(nèi)好。這可能是因為比玻璃瓶更容易貼壁。生長速度快的細胞在這種相對“更安逸”的環(huán)境里反而長得狀態(tài)不如玻璃瓶好。所以對于生長速度慢的細胞如果想要更漂亮的細胞狀態(tài),比玻璃瓶會好,對于生長速度慢的細胞,玻璃瓶則會更好。同樣,對于同一種細胞,在其生長速度慢的時候,會好一點,比如剛剛復(fù)蘇的時候,或者原代培養(yǎng)的時候。而在其生長旺盛的時候,玻璃瓶則相對會好一點。 細胞產(chǎn)品包裝:復(fù)蘇形式:T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式:1ml凍存管(兩支) 細胞傳代方法:1:2傳代 培養(yǎng)細胞真的不難,最關(guān)鍵幾點:1)所有的東西使用,如果你用的血清、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)基、胰酶什么的都是進口的,真的很難相信你會把細胞養(yǎng)壞;2)動作要快,胰酶消化,換液什么,細胞暴露在空氣中的時間越少越好。另外,要掌握好胰酶消化時間,所謂的細胞狀態(tài)差,很多時候是傳代的原因;3)有時間的話,需要細胞計數(shù),傳相應(yīng)數(shù)目的細胞到培養(yǎng)皿中,可以大致清楚細胞的生長曲線,不會臨時要處理,手足無措;4)要做什么心里要非常清楚,合理安排時間,傳代細胞的實驗穿插進行,可以節(jié)省很多時間,也不會耽誤別人的實驗;5)個人的實驗器具自己收一套,不要和別人混用,最近換了什么新的東西稍微記一下,試劑一旦懷疑污染,馬上丟;6)傳代細胞不能進去太多人,避免相互干擾。每天對待細胞比孝敬爹媽還用心,那真是捧在手里怕碎了,含在嘴里怕化了,看在眼里怕丟了,培養(yǎng)細胞時有哪些經(jīng)驗教訓(xùn)可以分享呢?1)嚴格無菌操作,多噴噴酒精,要是對滅菌的東西不放心,自己包自己送自己烘干;2)不要和別人共用試劑耗材,自己準備一套;3)有可能的話在拿到新細胞的時候做好支原體衣原體檢測;4)水浴鍋很臟,生化培養(yǎng)箱要是得手動加濕的話盤里的水也會很臟,勤換(滅菌水加進去);5)晚上離開的時候給傳代細胞照紫外,超凈臺是用完就開;6)是同一時間就你一個人在用傳代細胞在養(yǎng)細胞。 細胞來源說明:細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學(xué)建系 NHA細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MPP-89細胞、CNE細胞、NIE 115細胞 H-1404細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RPMI.8226細胞、CCC-HSF-1細胞、HTR-8細胞 DHL4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:IALM細胞、CALU 1細胞、GDM1細胞 ARO81-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:IBRS2細胞、Bowes melanoma cells細胞、CoCL2細胞 Y1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:CaSki細胞、28SC細胞、LS-123細胞 細胞生長特性:懸浮生長 SK-N-SH Cell:人神經(jīng)母細胞瘤細胞系 細胞復(fù)蘇相關(guān)注意事項:1.取細胞的過程中注意帶好防凍手套,護目鏡。此項尤為重要,細胞凍存管可能漏入液氮,解凍時凍存管中的氣溫急劇上升,可導(dǎo)致爆炸。2.凍存液的問題:凍存液的配置已是常識,在這里不作詳述,但二甲基亞砜(DMSO )對細胞不是完全無毒副作用,在常溫下,二甲基亞砜對細胞的毒副作較大,因此,必須在1-2min內(nèi)使凍存液完全融化。如果復(fù)蘇溫度太慢,會造成細胞的損傷,二甲基亞砜(DMSO)選擇進口產(chǎn)品。3.離心前須加入少量培養(yǎng)液。細胞解凍后二甲基亞砜濃度較高,注意加入少量培養(yǎng)液可稀釋其濃度,以減少對細胞的損傷。4.離心問題:目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進行培養(yǎng),第二天換液。因為離心的目的是兩個,去除DMSO,去除死細胞,這個是標準流程,但對一般人來說,把握不好離心轉(zhuǎn)速和時間,轉(zhuǎn)的不夠活細胞沉底的少,細胞就全被扔掉了,轉(zhuǎn)過了活細胞會受壓過大,死亡。此外在操作過程中容易污染,所以不推薦。另一種說法為細胞懸液中含有二甲基亞砜(DMSO),DMSO對細胞有一定的毒副作用,所以須將離心后的液體前倒凈,且一定倒干凈。我在試驗中按照常規(guī)的離心分裝的方法進行復(fù)蘇,結(jié)果無異常。5.細胞貼壁少的問題:教科書中說明凍存細胞解凍時1ml細胞液要加10ml-15ml培養(yǎng)液,而在我的試驗中的經(jīng)驗總結(jié)為培養(yǎng)基越少細胞越容易貼附。6.復(fù)蘇細胞分裝的問題:試驗中我的經(jīng)驗總結(jié)為復(fù)蘇1管細胞一般可分裝到1-2只培養(yǎng)瓶中,分裝過多,細胞濃度過低,不利于細胞的貼壁。7.加培養(yǎng)基的量放入問題:這個量的多少的把握主要涉及到的問題DMSO的濃度,從如果你加培養(yǎng)基的太少,那么DMSO的濃度就會比較大,就會影響細胞生長,從以前的資料來看,DMSO的濃度在小于0.5%的時候?qū)σ话慵毎麤]有什么影響,還有一個說法是1%。所以如果你的凍存液的濃度是10%DMSO的話那么加10ml以上的培養(yǎng)基就恰好稀釋到了無害濃度。 細胞形態(tài)特性:上皮細胞樣 AU565細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BV2細胞、COLO-741細胞、RL-952細胞 GM06141B細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MGH-U1 (EJ)細胞、SN12-PM6細胞、H-719細胞 Tn 5B1-4細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H2029細胞、OV1/P細胞、Centre Antoine Lacassagne-78細胞 T-84細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SK-RC 39細胞、HCC1500細胞、BHP10-3細胞 P3J細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SW48細胞、P3-x63-Ag8 653細胞、CHOK1細胞 SU-86-86細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HCA 7細胞、NCIH820細胞、OVCA8細胞 SHZ-88細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PF382細胞、NCIH1648細胞、Metastatic Variant 522細胞 SK-N-SH Cell:人神經(jīng)母細胞瘤細胞系 WRL 68細胞系相關(guān)產(chǎn)品:RAT2細胞、LIXC002細胞、U 138 MG細胞 L cell line細胞系相關(guān)產(chǎn)品:IBMF-7細胞、Hs839T細胞、SUM102PT細胞 JM1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MG-HU-3細胞、MOLT 4細胞、S3-HeLa細胞 OCI/AML-3細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDST8細胞、293FT細胞、He La細胞 OSK-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:REC-1細胞、Pro-5 Lec1.3c細胞、A-549細胞 MDA-MB361細胞系相關(guān)產(chǎn)品:DMS-53細胞、LA4細胞、Mouse Podocyte Clone-5細胞 LS 180細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HT-1080細胞、MODE-K細胞、H-661細胞 SK-MEL-28細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HSF細胞、AQ-Mel細胞、4-1st細胞 LNCaP.FGC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NB-19細胞、B10BR細胞、SW-1417細胞 LNCaP.FGC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NB-19細胞、B10BR細胞、SW-1417細胞 MADB-106細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MNNG/HOS Clone F-5細胞、MUTZ-1細胞、Caov-3細胞 WM-115細胞系相關(guān)產(chǎn)品:NCIH1944細胞、MHHCALL2細胞、SK-BR-3細胞 MMAc.SF細胞系相關(guān)產(chǎn)品:PIEC細胞、NCIH2452細胞、CDC/EU.HMEC-1細胞 P30-OHK細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MDA468細胞、KU812-F細胞、H441細胞 L 929細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SUNE-1細胞、HPAF-II/CD18細胞、H711細胞 MN60細胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO-679細胞、VMRCRCZ細胞、WISH細胞 INS1E細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HEC1B細胞、KTCTL140細胞、HEK 293T/17細胞 F442-A細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MOLT-16細胞、DH 82細胞、UCLA-SO-M14細胞 DOK細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM12878細胞、Nthy ori 3.1細胞、NB-19細胞 G361細胞系相關(guān)產(chǎn)品:EBNA-293細胞、H-1755細胞、Ly10細胞 A20細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HNE2細胞、HME1細胞、95C細胞 TE 32細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Pro-5 Lec1.3c細胞、T-ALL 1細胞、NCI-H23細胞 HUC細胞系相關(guān)產(chǎn)品:FK81細胞、HuT78細胞、OSK-1細胞 Co320細胞系相關(guān)產(chǎn)品:HOMEC細胞、H-508細胞、SU-DHL1細胞 RKO細胞系相關(guān)產(chǎn)品:WM451Lu細胞、SKML-28細胞、HSC(Human Schwann)細胞 H-711細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM03570細胞、SNK1細胞、NIT-1細胞 AR4-IP細胞系相關(guān)產(chǎn)品:S3 HeLa細胞、Scott and White No. 13細胞、Rat Fetal Lung-6細胞 SRA01/04 (HLE)細胞系相關(guān)產(chǎn)品:AMO-1細胞、SBC3細胞、3-LL細胞 NB1-RGB細胞系相關(guān)產(chǎn)品:D10.G4.1細胞、SW 1116細胞、C-4 I細胞 Ramos-RA1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-740細胞、H2052_MM細胞、870細胞 NH-6細胞系相關(guān)產(chǎn)品:SKNBE-2細胞、HS0578T細胞、SK-MES1細胞 KNS-81細胞系相關(guān)產(chǎn)品:H-1876細胞、RS1細胞、BRL 3A細胞 H-1341細胞系相關(guān)產(chǎn)品:A1847細胞、MDBK (NBL-1)細胞、D-341Med細胞 GM05372細胞系相關(guān)產(chǎn)品:J 774A.1細胞、HF-91細胞、FaDu細胞 IGROV-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:G361細胞、PC-9/GR細胞、RPE-1細胞 OCI-AML2細胞系相關(guān)產(chǎn)品:COLO320DM細胞、Panc02.03細胞、HNE1細胞 HCC2157細胞系相關(guān)產(chǎn)品:IMR-32細胞、Panc10.05細胞、OV433細胞 R2C細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Y3-Ag1,2,3細胞、SW-620細胞、HOP-92細胞 NMCG-1細胞系相關(guān)產(chǎn)品:GM00215細胞、TE-32細胞、CAL 62細胞 WEHI 3B細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Tca-8113細胞、4T1.2細胞、Nb2-11細胞 NCI H157細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Hs-606-T細胞、HPAF/CD18細胞、KGN細胞 Hs 274.T細胞系相關(guān)產(chǎn)品:KU.812細胞、HECV細胞、NCIH23細胞 BBE細胞系相關(guān)產(chǎn)品:Kupffer細胞、Y1細胞、HuCCT-1細胞 SK-N-SH Cell:人神經(jīng)母細胞瘤細胞系 SW982細胞系相關(guān)產(chǎn)品:MD Anderson-Metastatic Breast-436細胞、HEI-193細胞、HS 1.Tes細胞 BT 325細胞系相關(guān)產(chǎn)品:BCaP-37細胞、KNS-62細胞、DU-4475細胞 Hce8693細胞系相關(guān)產(chǎn)品:UPCI-SCC-154細胞、ME-1 [Human 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