"NCI-H446 Cell:人小細胞肺癌細胞系
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
細胞生長：貼壁
細胞背景資料：該細胞是１９８２年由CarneyD和GazdarAF等從一位小細胞肺癌患者的胸腔積液中建立的。細胞的原始形態(tài)并不具有小細胞肺癌特征。這個細胞株是小細胞肺癌的生化和形態(tài)學上的變種，表達神經(jīng)元特有的烯醇酶和腦型肌酸激酶同工酶；左旋多巴脫羧酶、蠶素、抗利尿激素、催產(chǎn)素或胃泌激素釋放肽未達到可檢測水平。與正常細胞相比，該細胞c-mycDNA序列擴增約２０倍，RNA增加１５倍。最初傳代培養(yǎng)基用含有５%FBS的RPMI１６４０，另外添加１０nM化可的松、０.００５mg/ml胰島素、０.０１mg/ml轉(zhuǎn)鐵
UMNSAH/DF#1細胞系相關產(chǎn)品：SUM 149細胞、HELF細胞、IEC-18細胞
HuH-1細胞系相關產(chǎn)品：NIH:OVCAR-8細胞、DHL10細胞、NCI-H2291細胞
SK-HEP-1細胞系相關產(chǎn)品：SKM-1細胞、MC3T3-E1細胞、rRMECs細胞
ETCC-007細胞系相關產(chǎn)品：HEL-92-1-7細胞、UT-7細胞、HCC1187細胞
細胞物種來源：人源或鼠源等其它物種來源
NCI-H446 Cell:人小細胞肺癌細胞系
因為細胞生長的時候肯定是要相互聯(lián)系，大部分的細胞都是要成片生長的，尤其是對于貼壁細胞，單個細胞貼壁之后長著長著就長到一片去了。但是如果是成片的細胞抱團的話，傳代后細胞是不能貼壁的，這樣抱團的細胞就會死亡。所以，消化傳代的時候一定要將細胞消化成單個單個的獨立狀態(tài)，這個啊是非?？季磕愕墓Ψ虻?！細胞一旦脫落入懸液里你很難再將他吹打成單個，因為他沒有受力點了。很難找到受力點讓你對他吹打的力分散開細胞。所以必須要在細胞未脫落之前將其吹打開，受力點就是細胞貼壁的地方。這樣你就必須要嚴格控制好消化的程度啊，這和大師做飯掌握好火候是一樣的道理啊。既要消化到容易吹打下來，又不能太過，一吹就整片脫落，要單個單個地往下掉。所以我才要分批分次地加胰酶消化就是為了保證不同生長狀態(tài)貼壁程度的細胞能夠都維持在好的受力點分散開。這個是很重要的一點。尤其是對于某些細胞這一點就是他活去死的致命點。像Caco-２細胞就是如此。另外關于傳代很重要一點就是一定不能等到細胞長滿的時候才去消化傳代。要在細胞長到７０%左右的時候就要傳代了，一旦發(fā)現(xiàn)細胞生長中已經(jīng)有疊層生長的時候就要立即進行消化傳代。不能再拖了。關于換液傳代時候洗瓶的問題。對于用DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)的細胞，你在洗的時候如果是用無血清１６４０去洗細胞在隨即后的幾次中會比用DMEM洗的長的要好。同樣，用１６４０培養(yǎng)的也有這個現(xiàn)象。如果不嫌麻煩的話，可以用PBS來洗，洗的效果和用無血清培養(yǎng)基洗的效果基本上是一樣的，對于有些細胞會更勝一籌。洗的目的主要是洗去培養(yǎng)瓶里殘留的血清，防止它對胰酶的影響。這樣能夠保證胰酶的消化能力優(yōu)先，是很關鍵的一點。先補充這么多，還會后續(xù)更新。再補充一點：傳代時PBS洗是很重要的一步，最近發(fā)現(xiàn)，用PBS就可以把細胞消化開來。加入PBS放置１０-１５分鐘，有些需要更長的時間，等到細胞一個個分離開來的時候，就可以直接吹打下來，但是和胰酶消化一樣，要控制好時間，不能時間太過了，要不然損傷細胞，細胞不容易成活，狀態(tài)容易不好。這個方法對于某些細胞是很管用的。有些細胞用胰酶消化不容易消化成單個的時候，或者臨時沒有胰酶了，可以選用此方法。不過一定要試試，看是否適合你的細胞。
細胞產(chǎn)品包裝：復蘇形式：T２５培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存形式：１ml凍存管(兩支)
細胞傳代方法：１：２傳代
為什么培養(yǎng)的細胞要及時傳代？體外培養(yǎng)的細胞大多具有生長接觸抑制的特性，也就是說當一個細胞被其他細胞包圍的時候，它就會停止生長，及時傳代后，細胞的生長得以繼續(xù)。培養(yǎng)細胞生長減慢的原因在哪些?其解決辦法有哪些？可能的原因有：更換了不同的培養(yǎng)液或血清；培養(yǎng)液中一些細胞生長必需成分如谷眈肢或生長因子等耗盡或缺乏或己被破壞；培養(yǎng)物中有少量細菌或真菌污染；試劑保存不當；比較新培養(yǎng)液與原培養(yǎng)液成分，比較新血清與舊血清等，找出其它可能的原因。解決辦法：增加起始培養(yǎng)細胞濃度；讓細胞逐漸適應新培養(yǎng)液；換入新鮮配制培養(yǎng)液；補加谷酷肢或生長因子等；用無抗生素培養(yǎng)液培養(yǎng)，如發(fā)現(xiàn)污染，去棄培養(yǎng)物，或用抗生素除菌；血清需保存在５℃到２０℃; 培養(yǎng)液需在２-８℃避光保存;含血清完全培養(yǎng)液在２-８℃保存，并在２周內(nèi)用完;分離培養(yǎng)物，檢測支原體。冷凍管應如何解凍？取出冷凍管后，須立即放入３７℃水槽中快速解凍，輕搖冷凍管使其在１-２分鐘內(nèi)大部分融化，特別注意，需殘留一小塊冰塊，就可拿到超凈工作臺操作細胞，用７５%酒精消毒凍存管，用新鮮培養(yǎng)基將細胞轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶。另外冷凍管由液氮桶中取出解凍時，必須注意安全，預防冷凍管爆裂。
細胞來源說明：細胞主要來源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、INCell、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國外著名大學建系
NCIH1623細胞系相關產(chǎn)品：MRC5細胞、PLA801-95D細胞、HRA19細胞
H-647細胞系相關產(chǎn)品：Kit225/K6細胞、P3X63 AG 8.653細胞、NRK49F細胞
MDA-MB-468-RED細胞系相關產(chǎn)品：GM346細胞、Medical Research Council cell strain-5細胞、Me Wo細胞
HCC-1171細胞系相關產(chǎn)品：MCF-10A細胞、LNCaP.FGC細胞、FDC-P1細胞
HAPI細胞系相關產(chǎn)品：ARO細胞、H1944細胞、NCIH2227細胞
細胞生長特性：貼壁/懸浮生長，混合
NCI-H446 Cell:人小細胞肺癌細胞系
細胞凍存復蘇材料與方法步驟：常用的細胞冷凍貯存器為液氮貯存器，規(guī)格有３５L和５０L兩種。使用時要注意以下幾點：(１)一般兩周需充液氮一次，至少一個月充氮一次。液氮溫度達-１９６℃，使用時注意勿讓液氮濺到皮膚上，以免引起凍傷。(２)液氮容器為雙層結(jié)構(gòu)，中間為真空層，瓶口有雙層焊接處，應防止焊接部裂開。(３)在裝入液氮時，要注意緩慢小心，并用厚紙卷筒或特制漏斗作引導，使液氮直達瓶底，如有專用液氮灌注裝置則更好。若為初次使用，加液氮時更要緩慢，以免溫度驟降而使容器損壞。細胞凍存時常備的材料有：０.２５%胰蛋白酶，含１０%～２０%的血清培養(yǎng)液，DMSO(分析純)或無色新鮮甘油(１２１°C蒸氣高壓消毒)，２mL安瓿(或?qū)Ｓ眉毎麅龃婀?、吸管、離心管、噴燈、紗布袋(或凍存管架)等。主要操作步驟為：(１)選擇處于對數(shù)生長期的細胞，在凍存前一天換液。將多個培養(yǎng)瓶中的細胞培養(yǎng) 液去掉，用０.２５%胰蛋白酶消化。適時去掉胰蛋白酶，加入少量新培養(yǎng)液。用吸管吸取培養(yǎng)液反復吹打瓶壁上的細胞，使其成為均勻分散的細胞懸液。懸浮生產(chǎn)細胞則不要消化處理。然后將細胞收集于離心管中離心(１０００r/min，１０分鐘)。(２)去上清液，加入含２０%小牛血清的完全培養(yǎng)基，于４℃預冷１５分鐘后，逐滴加入已無菌的DMSO或甘油，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，細胞濃度為３×１０６～１×１０７/mL之間。(３)將上述細胞分裝于安瓿或?qū)Ｓ美鋬鏊芰瞎苤?，安瓿裝１～１.５mL在火焰噴燈上封口，封口處要完全封閉，圓滑無勾。冷凍管要將蓋子蓋緊，并標記好細胞名稱和凍存日期，同時作好登記(日期、細胞種類及代次、凍存支數(shù))。(４)將裝好細胞的安瓿或凍存管裝入沙布袋內(nèi);置于液氮容器頸口處存放過夜，次日轉(zhuǎn)入液氮中。采用控制降溫速度的方法也可采用下列步驟：先將安瓿置入４℃冰箱中２～３小時，再移至冰箱冷凍室內(nèi)３～４小時，再吊入液氮容器頸氣態(tài)部分存放２小時，最后沉入液氮中。細胞凍存在液氮中可以長期保存，但為妥善起見，凍存半年后，取出一只安瓿細胞復蘇培養(yǎng)，觀察生長情況，然后再繼續(xù)凍存。
細胞形態(tài)特性：上皮樣
SBC-3細胞系相關產(chǎn)品：HCC4006細胞、NCIH716細胞、RM-1細胞
H-716細胞系相關產(chǎn)品：CHL-IU細胞、KYSE140細胞、MGH-U3細胞
SKNBE-2細胞系相關產(chǎn)品：Laboratory of Allergic Diseases 2細胞、IMCD3細胞、SCL I細胞
FL83B細胞系相關產(chǎn)品：H847細胞、SW 837細胞、WM266-4細胞
H-522細胞系相關產(chǎn)品：HEK-293-F細胞、HTR8/SVneo細胞、H-1703細胞
WM 239A細胞系相關產(chǎn)品：WEHI 164 TC細胞、NCI-H1672細胞、JHH-2細胞
KTA-7細胞系相關產(chǎn)品：Y3-Ag 1.2.3細胞、Colon-38細胞、HOS細胞
NCI-H446 Cell:人小細胞肺癌細胞系
TMD-8細胞系相關產(chǎn)品：293-FT細胞、SKNBE-2細胞、CEM-0細胞
U-CH1細胞系相關產(chǎn)品：CAL33細胞、Rin-M-5F細胞、CT26WT細胞
FUOV1細胞系相關產(chǎn)品：COLO320 DM細胞、MonoMac 6細胞、MNNGHOS細胞
NCC-IT細胞系相關產(chǎn)品：NCI-H2198細胞、MGHU1細胞、SUP-T1細胞
SK_N_FI細胞系相關產(chǎn)品：UMUC1細胞、SUDHL4細胞、HMC-1細胞
NCIH2023細胞系相關產(chǎn)品：CHP 100細胞、COLO 206細胞、Glioma-261細胞
HAPI細胞系相關產(chǎn)品：ARO細胞、H1944細胞、NCIH2227細胞
UCLA-SO-M14細胞系相關產(chǎn)品：C22細胞、NCIH1563細胞、MLE 12細胞
NIH-3T3細胞系相關產(chǎn)品：TM-4細胞、CAL-85-1細胞、HA1800細胞
Vx2細胞系相關產(chǎn)品：697細胞、NCIH2196細胞、Psi-2 DAP細胞
Acanthosis Nigricans 3rd attempt-CArcinoma細胞系相關產(chǎn)品：U251細胞、SNU1040細胞、MLFC細胞
U-251細胞系相關產(chǎn)品：Hs 606細胞、293E細胞、CT26-clone 25細胞
PC-3M-1E8細胞系相關產(chǎn)品：OVCAR-4細胞、ARH 77細胞、QBI-293A細胞
CFSC-8B細胞系相關產(chǎn)品：L-6 myoblast細胞、HCAEC細胞、M20 [Human melanoma]細胞
FL62891細胞系相關產(chǎn)品：PCI-SG231細胞、SNU-601細胞、SNU-668細胞
4175細胞系相關產(chǎn)品：OVCAR433細胞、MDCK II細胞、Human Melanoma Cell Bowes細胞
GP5d細胞系相關產(chǎn)品：SKES-1細胞、OCI-AML2細胞、Vero細胞
ST486細胞系相關產(chǎn)品：GalK1細胞、BNCL-2細胞、CHP100細胞
FDC-P1細胞系相關產(chǎn)品：CMT-93細胞、NCTC clone 929細胞、COLO 829細胞
A 72細胞系相關產(chǎn)品：AC29細胞、SW-579細胞、UPCISCC154細胞
CCRF CEM細胞系相關產(chǎn)品：ARO81-1細胞、MKN 7細胞、2PK-3細胞
NCI-H128細胞系相關產(chǎn)品：UO.31細胞、YTMLC-90細胞、GM03573A細胞
NCI-522細胞系相關產(chǎn)品：SR細胞、He La細胞、TE14細胞
OCILY7細胞系相關產(chǎn)品：SNU-520細胞、PT-67細胞、Hs839T細胞
GM02219D細胞系相關產(chǎn)品：RMa-bm細胞、WSU-DLCL2細胞、HFT8810細胞
201T細胞系相關產(chǎn)品：Fetal Bovine Heart Endothelial細胞、KALS-1細胞、MDBK (NBL-1)細胞
GC-1 spg細胞系相關產(chǎn)品：NCI-H3255細胞、CHL-CL-11細胞、NMC-G1細胞
Sarcoma OSteogenic-2細胞系相關產(chǎn)品：8305C_1細胞、MZ-CRC-1細胞、MC116細胞
GM-346細胞系相關產(chǎn)品：OVHM細胞、KM H-2細胞、NBLS細胞
MT4細胞系相關產(chǎn)品：B6Tert-1細胞、XWLC-05細胞、MRC-5細胞
Capan 1細胞系相關產(chǎn)品：CAOV3細胞、BHP 10-3細胞、NCI-SNU-5細胞
HCoEpiC細胞系相關產(chǎn)品：P36細胞、C8D1A細胞、HONE-1細胞
H-2170細胞系相關產(chǎn)品：WILL-2細胞、Y-79細胞、RN-c細胞
SKRC-20細胞系相關產(chǎn)品：NCI-H2342細胞、JOSK-M細胞、SUM 52細胞
QGP1細胞系相關產(chǎn)品：NCI-H220細胞、MT-2J細胞、LS-180細胞
MCA38細胞系相關產(chǎn)品：U-hth74細胞、DMS 273細胞、P3/NSI/1-AG4-1細胞
IHH4細胞系相關產(chǎn)品：NCTC929細胞、NCI-H1836細胞、VP267細胞
SKRC-42細胞系相關產(chǎn)品：H-1618細胞、Ra No. 1細胞、NK-92MI細胞
LAPC-4細胞系相關產(chǎn)品：MESSA Dx5細胞、COR-L51細胞、B95.8細胞
H82sclc細胞系相關產(chǎn)品：Y 1細胞、SCC-4細胞、Pro-5WgaRI3C細胞
C17.2細胞系相關產(chǎn)品：U 138 MG細胞、Eca109細胞、U266S細胞
H-1792細胞系相關產(chǎn)品：Detroit 562細胞、NTERA-2 clone D1細胞、HuPT3細胞
TW 01細胞系相關產(chǎn)品：A20細胞、ECC-1細胞、SC細胞
NCI-H446 Cell:人小細胞肺癌細胞系
HCA-7細胞系相關產(chǎn)品：VP267細胞、Hep G2-Luc細胞、PBL細胞
SCC-9細胞系相關產(chǎn)品：Ls-174-T細胞、TU 686細胞、A2780/CP70細胞
HL-60 clone15細胞系相關產(chǎn)品：MLOY4細胞、Tn-5B1-4細胞、NIH-OVCAR-3細胞
GS-9L細胞系相關產(chǎn)品：BC-028細胞、Neukoplast細胞、OAW42細胞
University of Michigan-Renal Carcinoma-2細胞系相關產(chǎn)品：HT 1376.T細胞、OVCAR 433細胞、PANC 1005細胞
BetaTC6細胞系相關產(chǎn)品：NIH-OVCAR-3細胞、Hs895.T細胞、A-172細胞
DHL6細胞系相關產(chǎn)品：KASUMI6細胞、C22細胞、LM(TK-)細胞
TK.10細胞系相關產(chǎn)品：HeLa/DDP細胞、ECV-304細胞、TOV112細胞
KYSE-410細胞系相關產(chǎn)品：TE1細胞、SKMEL-1細胞、BTT739細胞
Vero E-6細胞系相關產(chǎn)品：OCI-AML4細胞、T84細胞、Walker/LLC-WRC 256細胞
J82細胞系相關產(chǎn)品：Y1細胞、SW-480細胞、CAKI 1細胞
FHs74 Int細胞系相關產(chǎn)品：HRC-99細胞、Caco-2細胞、UCLA NPA-87-1細胞
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