pET-N-GST-PreScission
pET-N-GST-PreScission是一種用于表達(dá)N端含有GST標(biāo)簽(Glutathione S-transferase tag, GST tag)的目的蛋白的原核表達(dá)質(zhì)粒。本質(zhì)粒N端GST標(biāo)簽后含有PreScission酶切位點(diǎn)，可通過PreScission Protease (P2302/P2303)切除N端的GST標(biāo)簽。本質(zhì)粒為卡那霉素抗性。
本質(zhì)粒含有T7啟動子/lac操縱子，可以在異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的誘導(dǎo)下高效啟動目的蛋白表達(dá)。在多克隆位點(diǎn)的前面有一個GST標(biāo)簽的編碼序列。因此在多克隆位點(diǎn)根據(jù)讀碼框插入目的基因就可以表達(dá)N端含有GST標(biāo)簽的目的蛋白。
本載體在N端GST標(biāo)簽與多克隆位點(diǎn)之間含有PreScission蛋白酶識別的八肽序列LEVLFQGP，對應(yīng)的核酸序列為CTGGAAGTTCTGTTCCAGGGGCCC，因此在目的蛋白純化后可以利用PreScission Protease切除N端的GST標(biāo)簽。PreScission蛋白酶酶切發(fā)生在八肽序列的Q和G之間，因此在酶切去除GST標(biāo)簽的時候目的蛋白的N端留下兩個額外的氨基酸殘基GP。
通?？梢圆捎萌鏐eyoGold™ GST-tag Purification Resin (P2251/P2253/P2255)和GST標(biāo)簽蛋白純化試劑盒(P2262)等純化本質(zhì)粒表達(dá)的目的蛋白，也可以使用GST抗體(AG768/AF0174)檢測和少量地分離純化目的蛋白。
pET-N-GST-PreScission質(zhì)粒的主要信息如下：
Feature Nucleotide
Position
Kanamycin resistance ORF
563-1645
LacI coding sequence
3518-4597
GST tag coding sequence
5076-5732
PreScission recognition site sequence
5733-5756
Multiple cloning site(BamHI-XhoI)
5757-5804
pET-N-GST-PreScission質(zhì)粒(5943bp)的圖譜如下：
pET-N-GST-PreScission的多克隆位點(diǎn)的詳細(xì)圖譜如下：
5026
AATTCCCCTC
TAGAAATAAT
TTTGTTTAAC
TTAAGGGGAG
ATCTTTATTA
AAACAAATTG
5076
ATGATGTCCC
CTATACTAGG
TTATTGGAAA
ATTAAGGGCC
TTGTGCAACC
TACTACAGGG
GATATGATCC
AATAACCTTT
TAATTCCCGG
AACACGTTGG
5126
CACTCGACTT
CTTTTGGAAT
ATCTTGAAGA
AAAATATGAA
GAGCATTTGT
GTGAGCTGAA
GAAAACCTTA
TAGAACTTCT
TTTTATACTT
CTCGTAAACA
5176
ATGAGCGCGA
TGAAGGTGAT
AAATGGCGAA
ACAAAAAGTT
TGAATTGGGT
TACTCGCGCT
ACTTCCACTA
TTTACCGCTT
TGTTTTTCAA
ACTTAACCCA
5226
TTGGAGTTTC
CCAATCTTCC
TTATTATATT
GATGGTGATG
TTAAATTAAC
AACCTCAAAG
GGTTAGAAGG
AATAATATAA
CTACCACTAC
AATTTAATTG
5276
ACAGTCTATG
GCCATCATAC
GTTATATAGC
TGACAAGCAC
AACATGTTGG
TGTCAGATAC
CGGTAGTATG
CAATATATCG
ACTGTTCGTG
TTGTACAACC
5326
GTGGTTGTCC
AAAAGAGCGT
GCAGAGATTT
CAATGCTTGA
AGGAGCGGTT
CACCAACAGG
TTTTCTCGCA
CGTCTCTAAA
GTTACGAACT
TCCTCGCCAA
5376
TTGGATATTA
GATACGGTGT
TTCGAGAATT
GCATATAGTA
AAGACTTTGA
AACCTATAAT
CTATGCCACA
AAGCTCTTAA
CGTATATCAT
TTCTGAAACT
5426
AACTCTCAAA
GTTGATTTTC
TTAGCAAGCT
ACCTGAAATG
CTGAAAATGT
TTGAGAGTTT
CAACTAAAAG
AATCGTTCGA
TGGACTTTAC
GACTTTTACA
5476
TCGAAGATCG
TTTATGTCAT
AAAACATATT
TAAATGGTGA
TCATGTAACC
AGCTTCTAGC
AAATACAGTA
TTTTGTATAA
ATTTACCACT
AGTACATTGG
5526
CATCCTGACT
TCATGTTGTA
TGACGCTCTT
GATGTTGTTT
TATACATGGA
GTAGGACTGA
AGTACAACAT
ACTGCGAGAA
CTACAACAAA
ATATGTACCT
5576
CCCAATGTGC
CTGGATGCGT
TCCCAAAATT
AGTTTGTTTT
AAAAAACGTA
GGGTTACACG
GACCTACGCA
AGGGTTTTAA
TCAAACAAAA
TTTTTTGCAT
5626
TTGAAGCTAT
CCCACAAATT
GATAAGTACT
TGAAATCCAG
CAAGTATATA
AACTTCGATA
GGGTGTTTAA
CTATTCATGA
ACTTTAGGTC
GTTCATATAT
5676
GCATGGCCTT
TGCAGGGCTG
GCAAGCCACG
TTTGGTGGTG
GCGACCATCC
CGTACCGGAA
ACGTCCCGAC
CGTTCGGTGC
AAACCACCAC
CGCTGGTAGG
5726
GAAGTTCTGT
TCCAGGGGCC
CGGATCCAAG
CTTCTGCAGG
CTTCAAGACA
AGGTCCCCGG
GCCTAGGTTC
GAAGACGTCC
5776
AATTCGATAT
CGTCGACAGA
TCTCTCGAGT
GAGATCCGGC
TGCTAACAAA
TTAAGCTATA
GCAGCTGTCT
AGAGAGCTCA
CTCTAGGCCG
ACGATTGTTT
pET-N-GST-PreScission中沒有的酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that do not cut pET-N-GST-PreScission)包括：
AatII
Acc65I
AflII
AgeI
AhdI
AleI
AscI
AvrII
BaeI
BbvCI
BfuAI
BmgBI
BmtI
BsaI
BseRI
BsiWI
BspMI
BsrGI
Bsu36I
CspCI
EagI
Eco53kI
FseI
KpnI
MfeI
NcoI
NheI
NotI
PacI
PmeI
PmlI
PspXI
RsrII
SacI
SacII
SbfI
SexAI
SfiI
SnaBI
SpeI
SrfI
StuI
pET-N-GST-PreScission中的單酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that cut pET-N-GST-PreScission once)包括：
DraIII
CAC,NNN`GTG
242
MluI
A`CGCG,T
4242
PsiI
TTA|TAA
370
BstAPI
GCAN,NNN`NTGC
4563
PvuI
CG,AT`CG
943
SphI
G,CATG`C
4771
AsiSI
GCG,AT`CGC
943
SgrAI
CR`CCGG,YG
4923
SmaI
CCC|GGG
1067
XbaI
T`CTAG,A
5034
XmaI
C`CCGG,G
1067
NdeI
CA`TA,TG
5074
TspMI
C`CCGG,G
1069
MscI
TGG|CCA
5286
NruI
TCG|CGA
1286
BstBI
TT`CG,AA
5476
AcuI
CTGAAG(N)14,NN`
1597
SwaI
ATTT|AAAT
5506
AlwNI
CAG,NNN`CTG
1729
ScaI
AGT|ACT
5652
BssSI
C`ACGA,G
1968
BamHI
G`GATC,C
5757
BstZ17I
GTA|TAC
2374
HindIII
A`AGCT,T
5763
Tth111I
GACN`N,NGTC
2399
PstI
C,TGCA`G
5769
PflFI
GACN`N,NGTC
2399
EcoRI
G`AATT,C
5775
PpuMI
RG`GWC,CY
3136
EcoRV
GAT|ATC
5783
FspI
TGC|GCA
3164
SalI
G`TCGA,C
5787
BglI
GCCN,NNN`NGGC
3182
BglII
A`GATC,T
5793
PshAI
GACNN|NNGTC
3401
XhoI
C`TCGA,G
5799
HpaI
GTT|AAC
3740
PaeR7I
C`TCGA,G
5799
BssHII
G`CGCG,C
3831
BlpI
GC`TNA,GC
5860
NmeAIII
GCCGAG(N)19,NN`
4041
StyI
C`CWWG,G
5882
pET-N-GST-PreScission質(zhì)粒中推薦使用的測序引物序列如下：
pET-F primer (5619-5638): 5′- AAACGTATTGAAGCTATCCC-3′
pET-R primer (5857-5876): 5′-TGCTAGTTATTGCTCAGCGG-3′
pET-N-GST-PreScission的全序列信息：D2916 pET-N-GST-PreScission.txt。
包裝清單：
KL-2916-1μg
pET-N-GST-PreScission
1μg
KL-2916-100μg
pET-N-GST-PreScission
100μg
保存條件：
-20℃保存。
注意事項：
本質(zhì)粒未經(jīng)碧云天書面許可不得用于任何商業(yè)用途，也不得移交給訂貨人所在實(shí)驗(yàn)室外的任何個人或單位。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
關(guān)鍵字： pET-N-GST-PreScission說明書；pET-N-GST-PreScission廠家
上海康朗生物科技有限公司是一家集研發(fā)、生產(chǎn)、銷售、服務(wù)于一體的一家生物科技企業(yè)，專營生化試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、基因、蛋白、抗體、Elisa試劑盒、細(xì)胞生物學(xué)，分子生物學(xué)等高生物產(chǎn)品?？偛课挥谏虾?，并在北京、廣東，江西，吉林等全國30多個省市設(shè)有分公司和代理機(jī)構(gòu)。涉及的產(chǎn)品被中國科學(xué)院、清華、北大、復(fù)旦，上海交大，復(fù)旦醫(yī)學(xué)院，上海中醫(yī)藥大學(xué)，華東師范大學(xué)，第二軍醫(yī)大學(xué)，曙光醫(yī)院，浦東新區(qū)人民醫(yī)院等知名科研院所廣泛使用，可靠而穩(wěn)定的質(zhì)量和完善的售后服務(wù)確。