pCMV-N-mCherry (紅色熒光蛋白)
pCMV-N-mCherry是信裕生物自行研發(fā)的哺乳動物細胞表達質粒,用于表達N端含mCherry (DsRed的突變體,一種非常明亮的紅色熒光蛋白)標簽的融合蛋白。該質粒含有CMV啟動子,可以高效啟動目的蛋白在細胞中的表達。在多克隆位點的前面有一個mCherry的完整編碼序列,因此在多克隆位點根據(jù)閱讀框插入目的基因就可以表達N端含有mCherry標簽的融合蛋白。利用mCherry的熒光特性可以比較容易地觀察融合蛋白的表達水平和細胞內定位,也可以利用mCherry抗體來檢測或免疫沉淀融合蛋白。mCherry與GFP沒有序列同源性,不能使用GFP抗體檢測mCherry。該質粒為卡那霉素抗性。轉染細胞后,可以使用G418篩選穩(wěn)定表達目的蛋白的細胞株。
pCMV-N-mCherry質粒的主要信息如下:
Feature Nucleotide
Position
T3 promoter and T3 primer binding site
620-639
Multiple cloning site
1385-1474
T7 promoter and T7 primer binding site
1494-1515
SV40 polyA signal
1527-1910
f1 origin of ss-DNA replication
2048-2354
Neomycin/kanamycin resistance ORF
2896-3687
HSV-thymidine kinase (TK) polyA signal
3688-4146
pCMV-N-mCherry質粒(4994bp)的圖譜如下:
pCMV-N-mCherry的多克隆位點的詳細圖譜如下:
651
GAGCTCTAGC
GCTACCGGTC
TGAGCAAGGG
CTCGAGATCG
CGATGGCCAG
ACTCGTTCCC
701
AACATGGCCA
TCATCAAGGA
GTTCATGCGC
TTCAAGGTGC
TTGTACCGGT
AGTAGTTCCT
CAAGTACGCG
AAGTTCCACG
751
CTCCGTGAAC
GGCCACGAGT
TCGAGATCGA
GGGCGAGGGC
GAGGCACTTG
CCGGTGCTCA
AGCTCTAGCT
CCCGCTCCCG
801
CCTACGAGGG
CACCCAGACC
GCCAAGCTGA
AGGTGACCAA
GGATGCTCCC
GTGGGTCTGG
CGGTTCGACT
TCCACTGGTT
851
CTGCCCTTCG
CCTGGGACAT
CCTGTCCCCT
CAGTTCATGT
GACGGGAAGC
GGACCCTGTA
GGACAGGGGA
GTCAAGTACA
901
GGCCTACGTG
AAGCACCCCG
CCGACATCCC
CGACTACTTG
CCGGATGCAC
TTCGTGGGGC
GGCTGTAGGG
GCTGATGAAC
951
TCCCCGAGGG
CTTCAAGTGG
GAGCGCGTGA
TGAACTTCGA
AGGGGCTCCC
GAAGTTCACC
CTCGCGCACT
ACTTGAAGCT
1001
GTGGTGACCG
TGACCCAGGA
CTCCTCCCTG
CAGGACGGCG
CACCACTGGC
ACTGGGTCCT
GAGGAGGGAC
GTCCTGCCGC
1051
CAAGGTGAAG
CTGCGCGGCA
CCAACTTCCC
CTCCGACGGC
GTTCCACTTC
GACGCGCCGT
GGTTGAAGGG
GAGGCTGCCG
1101
AGAAGAAGAC
CATGGGCTGG
GAGGCCTCCT
CCGAGCGGAT
TCTTCTTCTG
GTACCCGACC
CTCCGGAGGA
GGCTCGCCTA
1151
GACGGCGCCC
TGAAGGGCGA
GATCAAGCAG
AGGCTGAAGC
CTGCCGCGGG
ACTTCCCGCT
CTAGTTCGTC
TCCGACTTCG
1201
CGGCCACTAC
GACGCTGAGG
TCAAGACCAC
CTACAAGGCC
GCCGGTGATG
CTGCGACTCC
AGTTCTGGTG
GATGTTCCGG
1251
TGCAGCTGCC
CGGCGCCTAC
AACGTCAACA
TCAAGTTGGA
ACGTCGACGG
GCCGCGGATG
TTGCAGTTGT
AGTTCAACCT
1301
CACAACGAGG
ACTACACCAT
CGTGGAACAG
TACGAACGCG
GTGTTGCTCC
TGATGTGGTA
GCACCTTGTC
ATGCTTGCGC
1351
CCACTCCACC
GGCGGCATGG
ACGAGCTGTA
AAGCTTCTGC
GGTGAGGTGG
CCGCCGTACC
TGCTCGACAT
TTCGAAGACG
EcoRIEcoRVSalIBglIIXhoIXbaISpeIApaI
1401
AGGAATTCGA
TATCGTCGAC
AGATCTCTCG
AGTCTAGAAC
TAGTGGGCCC
TCCTTAAGCT
ATAGCAGCTG
TCTAGAGAGC
TCAGATCTTG
ATCACCCGGG
pCMV-N-mCherry中沒有的酶切位點(Restriction enzymes that do not cut pCMV-N-mCherry)包括:
AclI
AflII
AscI
AsiSI
BaeI
BcgI
BlpI
BmgBI
BsiWI
BsmBI
BspEI
BspQI
BssHII
BstXI
BstZ17I
EarI
EcoNI
FseI
NotI
NruI
PmeI
PmlI
PpuMI
PshAI
PspXI
SacII
SapI
ScaI
SmaI
SwaI
TspMI
XmaI
XmnI
pCMV-N-mCherry中的單酶切位點(Restriction enzymes that cut pCMV-N-mCherry once)包括:
NdeI
CA`TA,TG
240
BglII
A`GATC,T
1421
SnaBI
TAC|GTA
346
PaeR7I
C`TCGA,G
1427
CspCI
,NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN`
382
XhoI
C`TCGA,G
1427
NheI
G`CTAG,C
597
XbaI
T`CTAG,A
1433
BmtI
G,CTAG`C
597
SpeI
A`CTAG,T
1439
SacI
G,AGCT`C
651
PspOMI
G`GGCC,C
1445
Eco53kI
GAG|CTC
653
ApaI
G,GGCC`C
1445
AfeI
AGC|GCT
660
PvuI
CG,AT`CG
1525
AgeI
A`CCGG,T
664
BclI
T`GATC,A
1681
AhdI
GACNN,N`NNGTC
871
MfeI
C`AATT,G
1774
SbfI
CC,TGCA`GG
1032
HpaI
GTT|AAC
1787
BbsI
GAAGACNN`NNNN,
1112
BtsI
GCAGTG,NN`
1861
PflMI
CCAN,NNN`NTGG
1113
MluI
A`CGCG,T
1910
BbvCI
CC`TCA,GC
1215
DraIII
CAC,NNN`GTG
2137
Bpu10I
CC`TNA,GC
1215
SfiI
GGCCN,NNN`NGGCC
2796
BsgI
GTGCAG(N)14,NN`
1269
ClaI
AT`CG,AT
2864
SgrAI
CR`CCGG,YG
1358
BspDI
AT`CG,AT
2864
XcmI
CCANNNN,N`NNNNTGG
1362
EagI
C`GGCC,G
2930
BsrGI
T`GTAC,A
1377
Tth111I
GACN`N,NGTC
3142
BamHI
G`GATC,C
1385
PflFI
GACN`N,NGTC
3142
HindIII
A`AGCT,T
1391
BsrDI
GCAATG,NN`
3257
EcoRI
G`AATT,C
1403
RsrII
CG`GWC,CG
3540
EcoRV
GAT|ATC
1411
BstBI
TT`CG,AA
3706
SalI
G`TCGA,C
1415
BsaI
GGTCTCN`NNNN,
4013
AccI
GT`MK,AC
1416
PciI
A`CATG,T
4942
pCMV-N-mCherry質粒中推薦使用的測序引物序列如下:
N-mCherry primer (1284-1303): 5′-AGTTGGACATCACCTCCCAC-3′
T7 primer (1494-1515): 5′-GTAATACGACTCACTATAGGGC-3′
pCMV-N-mCherry的全序列信息:D2711 pCMV-N-mCherry-seq.txt
pCMV-N-mCherry質粒轉染細胞后的表達效果請參考圖1。
圖1. pCMV-N-mCherry質粒轉染細胞后的表達效果圖。左側為明場照片,右側為熒光照片。
包裝清單:
KL-2711-1μg
pCMV-N-mCherry (紅色熒光蛋白)
1μg
KL-2711-100μg
pCMV-N-mCherry (紅色熒光蛋白)
100μg
保存條件:
-20℃保存。
注意事項:
本質粒未經信裕生物書面許可不得用于任何商業(yè)用途,也不得移交給訂貨人所在實驗室外的任何個人或單位。
本產品僅限于專業(yè)人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。
為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
關鍵字: pCMV-N-mCherry (紅色熒光蛋白)說明書;pCMV-N-mCherry (紅色熒光蛋白)廠家
上??道噬锟萍加邢薰臼且患壹邪l(fā)、生產、銷售、服務于一體的一家生物科技企業(yè),專營生化試劑、標準品、基因、蛋白、抗體、Elisa試劑盒、細胞生物學,分子生物學等高生物產品。總部位于上海,并在北京、廣東,江西,吉林等全國30多個省市設有分公司和代理機構。涉及的產品被中國科學院、清華、北大、復旦,上海交大,復旦醫(yī)學院,上海中醫(yī)藥大學,華東師范大學,第二軍醫(yī)大學,曙光醫(yī)院,浦東新區(qū)人民醫(yī)院等知名科研院所廣泛使用,可靠而穩(wěn)定的質量和完善的售后服務確。