pFastBac1-EGFP (桿狀病毒包裝陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)粒)
pFastBac1-EGFP是以pFastBac1為基礎(chǔ)構(gòu)建的用于在昆蟲(chóng)細(xì)胞表達(dá)EGFP的質(zhì)粒。在polyhedrin (PH)啟動(dòng)子的作用下，可以高效啟動(dòng)EGFP在昆蟲(chóng)細(xì)胞(如Sf9和Sf21等)中的表達(dá)。
在采用Bac-to-Bac桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)目的蛋白時(shí)，pFastBac1-EGFP可以用作監(jiān)測(cè)轉(zhuǎn)染、病毒包裝和目的蛋白表達(dá)效果的對(duì)照質(zhì)粒。表達(dá)的EGFP有很強(qiáng)的綠色熒光，在熒光顯微鏡下可以非常方便地觀察轉(zhuǎn)染、病毒包裝和表達(dá)的效果。
pFastBac1是基于Bac-to-Bac桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)(Bac-to-Bac Baculovirus Expression System)而設(shè)計(jì)的表達(dá)載體。Bac-to-Bac桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)是由Luckow等人于1993年發(fā)展的一種快速而有效產(chǎn)生重組桿狀病毒的方法。該系統(tǒng)主要包括以下兩個(gè)組分：(1)用于插入目的基因的pFastBac載體，目的基因如EGFP等插入后受桿狀病毒特異性啟動(dòng)子(baculovirus-specific promoter) polyhedrin啟動(dòng)子調(diào)控表達(dá)；(2)含桿狀病毒穿梭載體bacmid (bMON14272, 136kb)和輔助質(zhì)粒(helper plasmid，用于表達(dá)轉(zhuǎn)座必須的轉(zhuǎn)座蛋白)的大腸桿菌DH10Bac宿主菌株(D0346)。將pfastBac重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化該菌株可發(fā)生pfastBac重組質(zhì)粒中mini-Tn7元件和bacmid上的mini-attTN7發(fā)生轉(zhuǎn)座，從而形成重組的bacmid。位點(diǎn)特異的轉(zhuǎn)座會(huì)破壞宿主的lacZα基因，從而可通過(guò)藍(lán)白斑篩選重組克隆。PCR等方法鑒定重組克隆后，提取重組的bacmid轉(zhuǎn)染昆蟲(chóng)細(xì)胞，可以產(chǎn)生重組桿狀病毒，并表達(dá)目的蛋白如EGFP等。擴(kuò)增重組的桿狀病毒并感染昆蟲(chóng)細(xì)胞，就可以大量表達(dá)純化目的蛋白了。
pFastBac1-EGFP質(zhì)粒的主要信息如下：
Feature Nucleotide
Position
Ampicillin resistance gene
589-1449
Gentamicin resistance gene
2802-3335
Polyhedrin promoter (PPH)
3904-4032
SV40 polyadenylation signal
4794-5021
pFastBac1-EGFP質(zhì)粒(5397bp)的圖譜如下：
pFastBac1-EGFP的詳細(xì)圖譜如下：
4031
GTGAGCAAGG
GCGAGGAGCT
GTTCACCGGG
CACTCGTTCC
CGCTCCTCGA
CAAGTGGCCC
4081
TCCTGGTCGA
GCTGGACGGC
GACGTAAACG
GCCACAAGTT
AGGACCAGCT
CGACCTGCCG
CTGCATTTGC
CGGTGTTCAA
4131
GGCGAGGGCG
AGGGCGATGC
CACCTACGGC
AAGCTGACCC
CCGCTCCCGC
TCCCGCTACG
GTGGATGCCG
TTCGACTGGG
4181
CTGCACCACC
GGCAAGCTGC
CCGTGCCCTG
GCCCACCCTC
GACGTGGTGG
CCGTTCGACG
GGCACGGGAC
CGGGTGGGAG
4231
TGACCTACGG
CGTGCAGTGC
TTCAGCCGCT
ACCCCGACCA
ACTGGATGCC
GCACGTCACG
AAGTCGGCGA
TGGGGCTGGT
4281
CACGACTTCT
TCAAGTCCGC
CATGCCCGAA
GGCTACGTCC
GTGCTGAAGA
AGTTCAGGCG
GTACGGGCTT
CCGATGCAGG
4331
CATCTTCTTC
AAGGACGACG
GCAACTACAA
GACCCGCGCC
GTAGAAGAAG
TTCCTGCTGC
CGTTGATGTT
CTGGGCGCGG
4381
TCGAGGGCGA
CACCCTGGTG
AACCGCATCG
AGCTGAAGGG
AGCTCCCGCT
GTGGGACCAC
TTGGCGTAGC
TCGACTTCCC
4431
AAGGAGGACG
GCAACATCCT
GGGGCACAAG
CTGGAGTACA
TTCCTCCTGC
CGTTGTAGGA
CCCCGTGTTC
GACCTCATGT
4481
CCACAACGTC
TATATCATGG
CCGACAAGCA
GAAGAACGGC
GGTGTTGCAG
ATATAGTACC
GGCTGTTCGT
CTTCTTGCCG
4531
ACTTCAAGAT
CCGCCACAAC
ATCGAGGACG
GCAGCGTGCA
TGAAGTTCTA
GGCGGTGTTG
TAGCTCCTGC
CGTCGCACGT
4581
CACTACCAGC
AGAACACCCC
CATCGGCGAC
GGCCCCGTGC
GTGATGGTCG
TCTTGTGGGG
GTAGCCGCTG
CCGGGGCACG
4631
CAACCACTAC
CTGAGCACCC
AGTCCGCCCT
GAGCAAAGAC
GTTGGTGATG
GACTCGTGGG
TCAGGCGGGA
CTCGTTTCTG
4681
AGCGCGATCA
CATGGTCCTG
CTGGAGTTCG
TGACCGCCGC
TCGCGCTAGT
GTACCAGGAC
GACCTCAAGC
ACTGGCGGCG
4731
CTCGGCATGG
ACGAGCTGTA
CTTGTCGAGA
AGTACTAGAG
GAGCCGTACC
TGCTCGACAT
GAACAGCTCT
TCATGATCTC
pFastBac1-EGFP中沒(méi)有的酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that do not cut pFastBac1-EGFP)包括：
AatII
Acc65I
AfeI
AflII
AgeI
ApaI
AscI
AsiSI
BbvCI
BfuAI
BlpI
BmgBI
BmtI
BsiWI
BspDI
BspMI
BssHII
BstAPI
BstBI
BstEII
Bsu36I
ClaI
CspCI
Eco53kI
EcoNI
EcoO109I
EcoRI
FseI
KasI
KpnI
MluI
NarI
NdeI
NheI
NotI
NruI
NsiI
PacI
PaeR7I
PflMI
PluTI
PmeI
PmlI
PpuMI
PshAI
PspOMI
PspXI
PstI
PvuII
RsrII
SacI
SalI
SbfI
SexAI
SfiI
SfoI
SgrAI
SmaI
SpeI
SphI
SrfI
StuI
SwaI
TspMI
XbaI
XcmI
XhoI
XmaI
ZraI
pFastBac1-EGFP中的單酶切位點(diǎn)(Restriction enzymes that cut pFastBac1-EGFP once)包括：
NgoMIV
G`CCGG,C
127
BsmBI
CGTCTCN`NNNN,
3182
NaeI
GCC|GGC
129
PflFI
GACN`N,NGTC
3228
BanII
G,RGCY`C
157
Tth111I
GACN`N,NGTC
3228
BsaHI
GR`CG,YC
836
BbsI
GAAGACNN`NNNN,
3757
PvuI
CG,AT`CG
1005
SnaBI
TAC|GTA
3881
FspI
TGC|GCA
1153
AccI
GT`MK,AC
3883
AlwNI
CAG,NNN`CTG
1852
BstZ17I
GTA|TAC
3884
BseYI
C`CCAG,C
1960
BsmFI
GGGAC(N)10`NNNN,
4000
TfiI
G`AWT,C
2290
BamHI
G`GATC,C
4032
SapI
GCTCTTCN`NNN,
2381
NcoI
C`CATG,G
4036
BspQI
GCTCTTCN`NNN,
2381
HindIII
A`AGCT,T
4758
MscI
TGG|CCA
2709
MfeI
C`AATT,G
4873
BstXI
CCAN,NNNN`NTGG
2713
HpaI
GTT|AAC
4886
SacII
CC,GC`GG
2766
BclI
T`GATC,
5022
BaeI
,(N)5`(N)10ACNNNNGTAYC(N)7,(N)5`
2798
AvrII
C`CTAG,G
5037
pFastBac1-EGFP的全序列信息請(qǐng)參考信裕生物的網(wǎng)站上該質(zhì)粒的信息。
pFastBac1-EGFP質(zhì)粒使用信裕生物研發(fā)的LipoInsect™轉(zhuǎn)染試劑(C0551)轉(zhuǎn)染SF9細(xì)胞的效果參考圖1。
圖1. pFastBac1-EGFP質(zhì)粒轉(zhuǎn)化DH10Bac，獲得的重組bacmid用信裕生物生產(chǎn)的LipoInsect™轉(zhuǎn)染試劑(C0551)轉(zhuǎn)染SF9細(xì)胞4天后的效果圖。左側(cè)為明場(chǎng)照片，右側(cè)為熒光照片。
包裝清單：
產(chǎn)品編號(hào)
產(chǎn)品名稱
包裝
KL-2802
pFastBac1-EGFP (桿狀病毒包裝陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)粒)
1μg
保存條件：
-20℃保存。
注意事項(xiàng)：
本質(zhì)粒未經(jīng)信裕生物書面許可不得用于任何商業(yè)用途，也不得移交給訂貨人所在實(shí)驗(yàn)室外的任何個(gè)人或單位。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
關(guān)鍵字： pFastBac1-EGFP (桿狀病毒包裝陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)粒)說(shuō)明書；pFastBac1-EGFP (桿狀病毒包裝陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)粒)廠家
上海康朗生物科技有限公司是一家集研發(fā)、生產(chǎn)、銷售、服務(wù)于一體的一家生物科技企業(yè)，專營(yíng)生化試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、基因、蛋白、抗體、Elisa試劑盒、細(xì)胞生物學(xué)，分子生物學(xué)等高生物產(chǎn)品?？偛课挥谏虾?，并在北京、廣東，江西，吉林等全國(guó)30多個(gè)省市設(shè)有分公司和代理機(jī)構(gòu)。涉及的產(chǎn)品被中國(guó)科學(xué)院、清華、北大、復(fù)旦，上海交大，復(fù)旦醫(yī)學(xué)院，上海中醫(yī)藥大學(xué)，華東師范大學(xué)，第二軍醫(yī)大學(xué)，曙光醫(yī)院，浦東新區(qū)人民醫(yī)院等知名科研院所廣泛使用，可靠而穩(wěn)定的質(zhì)量和完善的售后服務(wù)確。