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PlantTaq? DNA Polymerase (Chlorophyll-resistant)
  • PlantTaq? DNA Polymerase (Chlorophyll-resistant)

PlantTaq? DNA Polymerase (Chlorophyll-resistant)

價(jià)格 275 1012
包裝 200次 1000次
最小起訂量 200次
發(fā)貨地 上海
更新日期 2024-12-25
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產(chǎn)品詳情

中文名稱:PlantTaq? DNA Polymerase (Chlorophyll-resistant)保存條件: -20℃保存。
純度規(guī)格: 99.99%產(chǎn)品類別: 分子生物試劑 核酸相關(guān)
2024-12-25 PlantTaq? DNA Polymerase (Chlorophyll-resistant) 200次/275RMB;1000次/1012RMB 275 -20℃保存。 99.99% 分子生物試劑 核酸相關(guān)

PlantTaq™ DNA Polymerase (Chlorophyll-resistant)

信裕生物生產(chǎn)的PlantTaq™ DNA Polymerase (Chlorophyll-resistant),即耐葉綠素PlantTaq™ DNA聚合酶,是一種經(jīng)過基因工程改造的非常高效的適用于植物樣品直接PCR檢測(cè)的耐熱DNA聚合酶。
對(duì)于植物葉片等樣品可以直接PCR檢測(cè),無須提取DNA。本產(chǎn)品對(duì)玉米、絲瓜、甜椒、豆角、黃豆、辣椒、黃瓜、茄子、番茄等植物樣品中的葉綠素、多糖、多酚等各種PCR抑制劑表現(xiàn)出超強(qiáng)的抗性,對(duì)于新鮮采集的、4℃保存或低溫凍存的這些植物的葉片、嫩種子等,都無需進(jìn)行DNA提取純化,可以直接用于PCR擴(kuò)增目的DNA。
所需樣品少,耐受能力高。本產(chǎn)品用于20μl的PCR擴(kuò)增體系時(shí),通常僅加入0.1-1mm直徑葉片即可順利完成PCR檢測(cè)。
本產(chǎn)品提供了一對(duì)陽性對(duì)照引物,便于確認(rèn)PCR檢測(cè)效果。該對(duì)引物是多種植物的通用引物,可以擴(kuò)增多數(shù)植物葉綠體中高度保守的IRB18基因的297bp DNA片段。
本產(chǎn)品用于植物葉片檢測(cè)的效果參考圖1。圖中可見,本產(chǎn)品對(duì)多種常見植物葉片都有很好的PCR擴(kuò)增效果。
圖1. 信裕生物生產(chǎn)的PlantTaq™ DNA Polymerase擴(kuò)增圖中所示不同植物葉片中目的基因的檢測(cè)效果圖。使用PlantTaq™ DNA Polymerase及本產(chǎn)品提供的Control primer mix,在PCR體系中直接加入不同植物葉片,用于擴(kuò)增IRB18基因的297bp DNA片段后的電泳效果圖。M, DNA marker (D0110 DNA Ladder (0.2-12 kb, 12 bands));1, 豆角(Cowpea);2, 黃豆(Soybean);3, 絲瓜(Sponge gourd);4, 甜椒(Capsicum);5, 玉米(Maize);6, 黃瓜(Cucumber);7, 辣椒(Pepper);8, 茄子(Eggplant);9, 番茄(Tomato)。
本產(chǎn)品擴(kuò)增不同長(zhǎng)度目的基因的效果參考圖2。圖中可見,PlantTaq™ DNA Polymerase以番茄葉片為模板可以直接PCR擴(kuò)增出長(zhǎng)達(dá)5kb的DNA片段。
圖2. 信裕生物生產(chǎn)的PlantTaq™ DNA Polymerase直接以番茄葉片為模板擴(kuò)增不同長(zhǎng)度的目的基因的效果圖。M, DNA marker (D0110 DNA Ladder (0.2-12 kb, 12 bands)); 1,IRB18(297bp);2,actin(693bp);3,rbcL(1201bp);4,rpoC2(2069bp);5,rpoC2(3079bp);6,rpoC2(3942bp);7,rpoC2(5000bp)。
本產(chǎn)品擴(kuò)增獲得的PCR產(chǎn)物帶有3'-dA overhangs的粘性末端,可直接用于和T載體連接進(jìn)行TA克隆。
來源:大腸桿菌重組表達(dá)純化獲得。
用途:植物葉片等比較柔嫩的組織樣品基因組DNA中目的基因的直接擴(kuò)增、基因分型(如基因缺失等),以及基因敲除或轉(zhuǎn)基因植物基因型分析。
純度:不含DNA內(nèi)切酶、外切酶和磷酸酯酶,不含RNA酶,滿足常規(guī)PCR反應(yīng)要求。
酶儲(chǔ)存溶液:20 mM Tris-HCl (pH 8.0), 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA, 100 mM KCl, 0.5% (v/v) Nonidet P40, 0.5% (v/v) Tween 20 and 50% (v/v) glycerol。
失活或抑制:酚氯仿抽提可以使PlantTaq™ DNA Polymerase失活。
本產(chǎn)品如果用于50微升的PCR反應(yīng)體系,兩種包裝的本產(chǎn)品分別足夠用于80個(gè)和400個(gè)反應(yīng);如果用于20微升的PCR反應(yīng)體系,兩種包裝的本產(chǎn)品分別足夠用于200個(gè)和1000個(gè)反應(yīng)。
包裝清單:

產(chǎn)品編號(hào)
產(chǎn)品名稱
包裝
XY-7248S-1
PlantTaq™ DNA Polymerase
200μl
XY-7248S-2
10X PlantTaq™ PCR Buffer
400μl
XY-7248S-3
Control primer mix (10μM each)
50μl
說明書
1份

保存條件:
-20℃保存。
注意事項(xiàng):
由于PCR反應(yīng)非常靈敏,在使用PlantTaq™ DNA Polymerase時(shí)請(qǐng)注意避免微量待擴(kuò)增DNA的污染,并盡量考慮設(shè)置不加模板的空白對(duì)照以確認(rèn)是否有待擴(kuò)增DNA的污染。
設(shè)置PCR反應(yīng)體系時(shí),20μl和50μl PCR體系中植物樣品的推薦用量分別為0.1-1mm和0.3-3mm直徑葉片或類似大小其它比較柔嫩的植物組織,可以直接添加到PCR體系中,無需進(jìn)行任何額外處理。經(jīng)測(cè)試本產(chǎn)品適用于柔嫩新鮮種子的直接PCR,但不適用于干硬種子的直接PCR。
PCR反應(yīng)結(jié)束之后,酌情3000-5000g離心3-5min以沉淀植物組織碎片,便于吸取上清用于電泳分析等。
需自備dNTP和Nuclease-Free Water。推薦選購信裕生物生產(chǎn)的D7371 dNTP Mixture (2.5mM each)或D7373 dNTP Mixture (25mM each),以及ST876 BeyoPure™ Ultrapure Water (DNase/RNase-Free, Sterile)。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用說明:
1.PCR反應(yīng)體系的設(shè)置:
a.融解并混勻PCR反應(yīng)所需的各種溶液。將PlantTaq™ DNA Polymerase置于冰浴上或冰盒內(nèi)。
b.參考下表在冰浴上設(shè)置PCR反應(yīng)體系(如果有多個(gè)類似的PCR反應(yīng),可以先配制大體積的包含水、buffer、dNTP和PlantTaq™酶的混合物,然后分裝到各PCR反應(yīng)管內(nèi)。根據(jù)情況,有時(shí)混合物中也可以包括引物):

試劑
20μl體系
50μl體系
終濃度
Nuclease-Free Water
14μl
35μl
-
10X PlantTaq™ PCR Buffer
2μl
5μl
1X
dNTP (2.5mM each)
2μl
5μl
0.25mM each
引物混合物(10μM each)
1μl
2.5μl
0.5μM each
PlantTaq™ DNA Polymerase
1μl
2.5μl
-
植物樣品
0.1-1mm直徑
0.3-3mm直徑
-
總體積
20μl
50μl
 

注意:
(a)模板使用量:作為PCR模板的植物組織用量,對(duì)于20μl和50μl PCR反應(yīng)體系,植物樣品的推薦用量分別為0.1-1mm和0.3-3mm直徑葉片或類似大小其它比較柔嫩的植物組織。如果模板為植物種子,盡量使用鮮嫩的植物種子。用干凈的解剖刀去掉種子外殼,剪下直徑約0.5-2mm的組織直接放入PCR管內(nèi);若種子太小,如番茄種子,可直接使用1-2粒完整的種子放入PCR管內(nèi)進(jìn)行擴(kuò)增。50μl PCR體系,植物葉片或是種子直徑不宜超過3mm,太多模板易造成PCR抑制成分偏多,影響PCR效果。推薦取兩份植物組織樣品進(jìn)行平行的PCR實(shí)驗(yàn),以降低取樣的不穩(wěn)定性。為確保取樣的均一性,建議使用專用的打孔器或解剖刀進(jìn)行取樣,并注意防止取樣過程中的交叉污染。每一次取樣,可以用2%的次清洗打孔器或解剖刀。對(duì)于高GC含量的PCR擴(kuò)增,可以嘗試向PCR體系中加入終濃度1-10% (體積百分比)的DMSO。
(b)引物濃度:通常引物的終濃度為0.5μM時(shí)可獲得良好的檢測(cè)效果,也可以根據(jù)情況在0.1-1.0μM范圍內(nèi)調(diào)整引物的終濃度。擴(kuò)增效率不高的情況下,可提高引物的濃度;發(fā)生非特異性反應(yīng)時(shí),可降低引物濃度。
c.用移液器輕輕吹打混勻或輕微Vortex混勻,室溫離心數(shù)秒,使液體和待檢測(cè)植物組織積聚于管底。
d.如果所使用的PCR儀有熱蓋則省略本步驟。如果PCR儀沒有熱蓋,則在管內(nèi)滴入一滴礦物油(ST275 Mineral oil (礦物油))。
e.把設(shè)置好的PCR反應(yīng)體系置于PCR儀上,開始PCR反應(yīng)。
2.PCR反應(yīng)參數(shù)的設(shè)置可以參考如下表格:

步驟
循環(huán)數(shù)
溫度
時(shí)間
說明
1
-
94℃
5min
起始變性
2
30-40
94℃
30sec
變性
55℃
30sec
退火
68℃
2min/kb
延伸
3
-
68℃
10min
最終延伸
4
-
4℃
長(zhǎng)時(shí)間保持
臨時(shí)存放

注意:
a.起始變性(94℃,5min)可以使植物組織樣品裂解,釋放出可用于PCR擴(kuò)增的基因組DNA。
b.需根據(jù)每次反應(yīng)的模板、引物、PCR產(chǎn)物的長(zhǎng)度和GC含量等適當(dāng)優(yōu)化PCR反應(yīng)條件,包括溫度、時(shí)間和循環(huán)數(shù)等。
c.對(duì)于初次進(jìn)行的PCR,為盡量確??梢詳U(kuò)增出預(yù)期的PCR產(chǎn)物,可以把循環(huán)數(shù)設(shè)置為35。

常見問題:
1.PCR產(chǎn)物非常少或沒有特異性條帶。
a.引物設(shè)計(jì)不佳是PCR過程中最常見的問題。請(qǐng)選擇適當(dāng)?shù)囊镌O(shè)計(jì)軟件進(jìn)行引物設(shè)計(jì),注意引物的GC含量、二級(jí)結(jié)構(gòu)、二聚體、退火溫度、長(zhǎng)度、特異性等方面的問題。在加入酶切位點(diǎn)等的引物中,一定要注意加入酶切位點(diǎn)等后整條引物的GC含量、二級(jí)結(jié)構(gòu)、二聚體、退火溫度、長(zhǎng)度、特異性等方面的問題。在原有引物效果不佳的情況并且陽性對(duì)照引物可以正常工作的情況下,可以考慮更換引物。
b.待擴(kuò)增片段GC含量偏高。向PCR體系中嘗試加入適合擴(kuò)增高GC含量DNA片段的D7226 GC-rich PCR Buffer (4種套裝),并相應(yīng)地根據(jù)其要求或說明調(diào)整PCR反應(yīng)參數(shù)的設(shè)置。
c.目的片段過長(zhǎng)。盡管PlantTaq™ DNA Polymerase可以擴(kuò)增最長(zhǎng)達(dá)5kb的DNA片段,但大多數(shù)時(shí)候更適合擴(kuò)增2-3kb以下的片段。對(duì)于過長(zhǎng)的目的片段的擴(kuò)增,需要適當(dāng)優(yōu)化引物和PCR反應(yīng)參數(shù)。
d.引物的二級(jí)結(jié)構(gòu)、引物二聚體或引物偏短會(huì)導(dǎo)致退火效果不佳。此時(shí)可以采用Touch down等方法進(jìn)行退火,通常采用從65℃逐步緩慢降溫到55℃或50℃的方法,使退火更加充分。
e.退火溫度不佳,需要優(yōu)化。如果有溫度梯度PCR儀,則可以設(shè)置退火的溫度梯度,摸索退火的溫度。如果沒有溫度梯度PCR儀,則可以通過多次PCR反應(yīng)摸索的退火溫度。
f.延伸時(shí)間不足??砂凑彰?kb片段延伸2分鐘進(jìn)行設(shè)置,對(duì)于較難擴(kuò)增的片段可以設(shè)置為每1kb片段延伸3-4分鐘。
g.在不同PCR儀上進(jìn)行PCR反應(yīng),避免有時(shí)PCR儀出現(xiàn)問題。
h.循環(huán)數(shù)不足,適當(dāng)延長(zhǎng)PCR的循環(huán)數(shù)。通常循環(huán)數(shù)最高不必超過40,常用的循環(huán)數(shù)范圍為30-40。
i.模板用量偏少,可以在耐血體積范圍內(nèi)適當(dāng)加大樣品用量,或采用巢式PCR (nested PCR)或二次PCR。巢式PCR即為在原先設(shè)計(jì)的PCR引物內(nèi)側(cè)再設(shè)計(jì)一對(duì)PCR引物,然后對(duì)次PCR產(chǎn)物進(jìn)行稀釋后再進(jìn)行一次PCR擴(kuò)增,這樣一方面可以起到擴(kuò)增作用,同時(shí)也可以從次PCR產(chǎn)物中擴(kuò)增出特異性條帶。二次PCR則為比較簡(jiǎn)單地用原有引物對(duì)次PCR產(chǎn)物進(jìn)行稀釋后再進(jìn)行一次PCR擴(kuò)增,可以起到擴(kuò)增作用,但不能去除非特異性條帶。
j.對(duì)PCR引物進(jìn)行脫鹽甚至PAGE膠或HPLC純化。
k.使用高質(zhì)量的dNTP混合物。
l.適當(dāng)增加PlantTaq™ DNA polymerase的用量。
m.當(dāng)產(chǎn)生較多非特異性條帶時(shí),可以適當(dāng)提高退火溫度。
n.注意設(shè)置適當(dāng)?shù)年栃詫?duì)照和陰性對(duì)照通常會(huì)對(duì)于實(shí)驗(yàn)結(jié)果的判斷有很大幫助。
o.確保沒有漏加任何PCR組分。
2.雜帶較多或條帶彌散
a.退火溫度提高2-5℃。
b.減少植物組織樣品的用量。
c.在室溫配制PCR體系容易產(chǎn)生非特異性條帶。推薦在冰浴上配制PCR反應(yīng)體系。
d.適當(dāng)減少PlantTaq™ DNA Polymerase的用量,加入適合擴(kuò)增高GC含量DNA片段的D7226 GC-rich PCR Buffer (4種套裝)。
e.適當(dāng)縮短延伸時(shí)間。

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公司簡(jiǎn)介

上??道噬锟萍加邢薰臼且患壹邪l(fā)、生產(chǎn)、銷售、服務(wù)于一體的一家生物科技企業(yè),專營(yíng)生化試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、基因、蛋白、抗體、Elisa試劑盒、細(xì)胞生物學(xué),分子生物學(xué)等高生物產(chǎn)品??偛课挥谏虾?,并在北京、廣東,江西,吉林等全國(guó)30多個(gè)省市設(shè)有分公司和代理機(jī)構(gòu)。涉及的產(chǎn)品被中國(guó)科學(xué)院、清華、北大、復(fù)旦,上海交大,復(fù)旦醫(yī)學(xué)院,上海中醫(yī)藥大學(xué),華東師范大學(xué),第二軍醫(yī)大學(xué),曙光醫(yī)院,浦東新區(qū)人民醫(yī)院等知名科研院所廣泛使用,可靠而穩(wěn)定的質(zhì)量和完善的售后服務(wù)確。
成立日期 2015-05-29 (10年) 注冊(cè)資本 100萬元整
員工人數(shù) 50-100人 年?duì)I業(yè)額 ¥ 100萬以內(nèi)
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