Terminal Deoxynucleotidyl Transferase (20U/μl)
Terminal Deoxynucleotidyl Transferase，簡(jiǎn)稱TdT，中文名稱為末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶，是一種非模板依賴的DNA聚合酶，可以催化在寡核苷酸、單鏈或雙鏈DNA的3'羥基端加上dNTP?？梢源呋墓押塑账岬淖疃涕L(zhǎng)度為3個(gè)核苷酸。有報(bào)道TdT也可以在RNA的3'羥基端加上NTP，但對(duì)于RNA的催化活性要弱于DNA。
用途：寡核苷酸或DNA 3'羥基末端標(biāo)記；DNA末端加尾(DNA tailing)；5'-RACE；合成同一種脫氧核苷酸的寡聚鏈等。
來(lái)源：由大腸桿菌表達(dá)，表達(dá)基因的來(lái)源為小牛胸腺。
活性定義：37℃ 60分鐘內(nèi)，催化1nmol dNTP加入到多聚核苷酸3'羥基末端中所需的酶量定義為1個(gè)活性單位。
酶活性檢測(cè)條件：200mM potassium cacodylate (pH7.2), 1mM CoCl2,0.1mM DTT, 0.01% (v/v) Triton X-100, 10μM
oligo(dT)10,1mM dTTP and 0.4MBq/ml[3H]-dTTP。
純度：不含DNA內(nèi)切酶和外切酶，不含RNase。
酶儲(chǔ)存溶液：100mM KAc (pH6.8), 2mM 2-mercaptoethanol, 0.01% (v/v) Triton X-100 and 50% (v/v) glycerol。
Reaction Buffer (5X)：0.125M Tris (pH7.2 at 25℃), 1M potassium cacodylate, 0.05% (v/v) Triton X-100, 5mM
CoCl2。
失活或抑制：70℃加熱10分鐘或加入適量EDTA均可導(dǎo)致Terminal Deoxynucleotidyl Transferase失活。金屬離子螯合劑，較高濃度的銨根離子、氯離子、碘離子和磷酸根均對(duì)Terminal Deoxynucleotidyl Transferase有抑制作用。
包裝清單：
產(chǎn)品編號(hào)
產(chǎn)品名稱
包裝
XY-7095S-1
TdT (20U/µl)
25μl
XY-7095S-2
Reaction Buffer (5X)
0.3ml
保存條件：
-20℃保存。
注意事項(xiàng)：
酶使用時(shí)宜放在冰盒內(nèi)或冰浴上，使用完畢后宜立即放置于-20℃保存。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
使用說(shuō)明：
1. DNA 3'末端標(biāo)記：
a. 參考如下表格設(shè)置反應(yīng)體系：
待標(biāo)記DNA
10 pmol of 3'-termini
[α-32P]-ddATP, ～10TBq/mmol(3000Ci/mmol)
1.85 MBq(50μCi)
補(bǔ)充無(wú)核酸酶的去離子水
至50μl
b. 按上表設(shè)置好反應(yīng)體系后，輕輕混勻(可以用移液器吹打混勻或用Vortex在最低速度輕輕混勻)，隨后離心沉淀液體。
c. 37℃孵育20分鐘。
d. 70℃孵育20分鐘或加入5μl 0.5M EDTA終止反應(yīng)。
說(shuō)明：標(biāo)記的效率和3'羥基末端的類型有關(guān)，3'突出末端的標(biāo)記效率要顯著高于3'縮進(jìn)末端或平末端的標(biāo)記效率。
2. DNA末端加尾(DNA Tailing)：
a. 參考如下表格設(shè)置反應(yīng)體系：
DNA片斷
1 pmol of 3'-termini
dATP or dTTP
130pmol(20 μCi)
或 dGTP or dCTP(四種中通常只需加入一種)
(3000 Ci/mmol)
60pmol
補(bǔ)充無(wú)核酸酶的去離子水
至20μl
b. 按上表設(shè)置好反應(yīng)體系后，輕輕混勻(可以用移液器吹打混勻或用Vortex在最低速度輕輕混勻)，隨后離心沉淀液體。
c. 37℃孵育25分鐘。
d. 70℃孵育25分鐘或加入5μl 0.5M EDTA終止反應(yīng)。
說(shuō)明：在上述反應(yīng)條件下，每個(gè)3'羥基末端可以加上100-130個(gè)dA或dT，或20-30個(gè)dC或dG。
3. 其他用途可以參考上述用途或適當(dāng)?shù)奈墨I(xiàn)資料進(jìn)行。
關(guān)鍵字： Terminal Deoxynucleotidyl Transferase (20U/μl)說(shuō)明書(shū)；Terminal Deoxynucleotidyl Transferase (20U/μl)廠家
上?？道噬锟萍加邢薰臼且患壹邪l(fā)、生產(chǎn)、銷售、服務(wù)于一體的一家生物科技企業(yè)，專營(yíng)生化試劑、標(biāo)準(zhǔn)品、基因、蛋白、抗體、Elisa試劑盒、細(xì)胞生物學(xué)，分子生物學(xué)等高生物產(chǎn)品?？偛课挥谏虾＃⒃诒本?、廣東，江西，吉林等全國(guó)30多個(gè)省市設(shè)有分公司和代理機(jī)構(gòu)。涉及的產(chǎn)品被中國(guó)科學(xué)院、清華、北大、復(fù)旦，上海交大，復(fù)旦醫(yī)學(xué)院，上海中醫(yī)藥大學(xué)，華東師范大學(xué)，第二軍醫(yī)大學(xué)，曙光醫(yī)院，浦東新區(qū)人民醫(yī)院等知名科研院所廣泛使用，可靠而穩(wěn)定的質(zhì)量和完善的售后服務(wù)確。