RNase H

RNase H，即Ribonuclease H，中文名為核糖核酸酶H，是一種核糖核酸內(nèi)切酶，可以特異性地水解DNA-RNA雜合鏈中的RNA。RNase H不能水解單鏈或雙鏈DNA或RNA中的磷酸二酯鍵，即不能消化單鏈或雙鏈DNA或RNA。
      特點(diǎn)：特異性消化DNA-RNA雜合鏈中的RNA，常用于cDNA第二鏈的合成。
      用途：DNA-RNA雜合鏈中去除RNA，例如cDNA第二條鏈合成前去除mRNA；通過(guò)互補(bǔ)的DNA序列實(shí)現(xiàn)對(duì)RNA的定點(diǎn)剪切；除去雜交到poly(dT)上的mRNA中的poly(A)；體外多腺苷酸化反應(yīng)(polyadenylation reaction)產(chǎn)物研究。
      來(lái)源：E.coli MRE-600細(xì)胞。
      分子量：約18.4kDa(單體)。
      活性定義：37℃20分鐘內(nèi)，能夠催化1nmol雜合雙鏈中的RNA形成酸可溶性核糖核苷酸形式所需的酶量定義為1個(gè)活性單位。
      活性檢測(cè)條件：20mM Tris-HCl(pH7.8)，40mM KCl，8mM MgCl₂，1mM DTT，24μM[³H]-poly(A).poly(dT)，
0.03mg/ml BSA ，4%(v/v)glycerol。
      純度：不含DNA內(nèi)切酶和外切酶，不含其它核糖核酸酶。
      酶儲(chǔ)存溶液：25mM HEPES-KOH(pH8.0)，50mM KCl，1mM DTT，1mM EDTA，0.1mg/ml BSA，50%(v/v)glycerol。
      Reaction Buffer(10X)：200mM Tris-HCl(pH7.8)，400mM KCl，80mM MgCl₂，10mM DTT。
      失活或抑制：65℃加熱10分鐘可使RNase H失活。金屬離子螯合劑和巰基封閉劑均能抑制RNase H活性。
包裝清單：

保存條件：
      -20℃保存。
注意事項(xiàng)： 
      酶使用時(shí)宜存放在冰盒內(nèi)或冰浴上，使用完畢后宜立即放置于-20℃保存。
      本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
      為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。 

使用說(shuō)明：
1. DNA-RNA雜合鏈中去除RNA：
a. 用反轉(zhuǎn)錄酶，例如BeyoRT M-MuLV反轉(zhuǎn)錄酶或BeyoRT M-MuLV反轉(zhuǎn)錄酶(RNase H-)合成cDNA條鏈，70℃孵育10分鐘終止反應(yīng)。
b. 在冰浴上向已經(jīng)合成條鏈的20μl反應(yīng)體系中依次加入如下試劑：

c. 按上述體系配好之后，輕輕混勻(可以用移液器吹打混勻或用Vortex在最低速度輕輕混勻)，隨后離心沉淀液體。
d. 37℃孵育1小時(shí)。
e. 加入2.5μl 0.5M EDTA(pH8.0)混勻，以終止反應(yīng)。
f. 后續(xù)可以使用酚氯仿抽提、乙醇沉淀等方法純化合成的雙鏈cDNA，也可以使用適當(dāng)?shù)腄NA純化試劑盒進(jìn)行純化。DNA純化試劑盒(D0033)可以向碧云天訂購(gòu)。
說(shuō)明：其他情況DNA-RNA雜合鏈中去除RNA的條件可以參考上述條件進(jìn)行。RNase H反應(yīng)的pH范圍約在7.5-8.3均可。
2. 雜合鏈中RNA的去除和cDNA第二鏈的合成：
a. 用反轉(zhuǎn)錄酶，例如BeyoRT M-MuLV反轉(zhuǎn)錄酶(D7153)、BeyoRT M-MuLV反轉(zhuǎn)錄酶(RNase H-)(D7159)或BeyoRT cDNA鏈合成試劑盒(RNase H-)(D7166)合成cDNA條鏈，70℃孵育10分鐘終止反應(yīng)。
b. 在冰浴上向已經(jīng)合成條鏈的20μl反應(yīng)體系中依次加入如下試劑：

c. 按上述體系配好之后，輕輕混勻(可以用移液器吹打混勻或用Vortex在最低速度輕輕混勻)，隨后離心沉淀液體。
d. 15℃孵育2小時(shí)。(注意：反應(yīng)溫度不能超過(guò)15℃)
e. 加入5μl 0.5M EDTA(pH 8.0)混勻，以終止反應(yīng)。
f. 后續(xù)可以使用酚氯仿抽提、乙醇沉淀等方法純化合成的雙鏈cDNA，也可以使用適當(dāng)?shù)腄NA純化試劑盒進(jìn)行純化。DNA純化試劑盒(D0033)可以向碧云天訂購(gòu)。
注：Reaction Buffer(10X)for DNA Polymerase I：500mM Tris-HCl(pH 7.5 at 25℃)，100mM MgCl₂，10mM DTT。
3. 其他用途請(qǐng)參考上述用途或相關(guān)文獻(xiàn)資料進(jìn)行。