Klenow Fragment

Klenow Fragment，又稱Klenow片段，是大腸桿菌聚合酶I(E.coli.DNA polymerase I)的大片段(Large Fragment)。
Klenow Fragment保留了DNA聚合酶I的5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性，但缺少完整的Klenow酶的5'→3'外切酶活性。Klenow Fragment的3'→5'外切酶活性保證了其合成DNA時(shí)的準(zhǔn)確性(proofreading)。
特點(diǎn)：對(duì)于5'突出或3'突出的粘末端都可以催化產(chǎn)生平末端，用于后續(xù)的平端連接。
用途：雙鏈DNA 5'突出(5'overhang)末端的補(bǔ)平(fill-in)；雙鏈DNA 3'突出(3'overhang)的打平(也稱削平)；5'突出末端的標(biāo)記；隨機(jī)引物法進(jìn)行DNA標(biāo)記；Sanger雙脫氧法進(jìn)行DNA測(cè)序；cDNA第二鏈的合成或定點(diǎn)突變反應(yīng)第二鏈的合成。 
來源：由大腸桿菌表達(dá)，表達(dá)基因的來源為polA 基因片段。
分子量：約68kDa(單體)。
活性定義：37℃30分鐘時(shí)間內(nèi)，催化10nmol脫氧核糖核苷酸(dNTPs)摻入到多聚核苷酸中所需的酶量定義為1個(gè)活性單位。
酶活性檢測(cè)條件：67mM potassium phosphate(pH7.4)，6.7mM MgCl₂，1mM 2-mercaptoethanol，0.033mM 
dATP，0.033mM dTTP，0.4MBq/ml[³H]-dTTP，62.5μg/ml poly(dA-dT)·poly(dA-dT)。
純度：不含DNA內(nèi)切酶，不含RNase。
酶儲(chǔ)存溶液：25mM Tris-HCl(pH7.5)，0.1mM EDTA，1mM DTT，50%(v/v)glycerol。
Reaction Buffer(10X)：500mM Tris-HCl(pH8.0 at 25℃)，50mM MgCl₂，10mM DTT。
緩沖液兼容性：在信裕生物的內(nèi)切酶反應(yīng)緩沖液1X O、1X R、1X Y、2X Y中的活性為100%，在1X B、1X G中的活性為
100%；在信裕生物的Taq、Pfu DNA polymerase和M-MuLV反應(yīng)緩沖液中的活性為100%。
失活或抑制：75℃加熱10分鐘或加入適量EDTA均可導(dǎo)致Klenow Fragment失活。金屬離子螯合劑，無機(jī)焦磷酸鹽(PPi)，大劑量的無機(jī)磷酸鹽(Pi)均對(duì)Klenow Fragment有抑制作用。
包裝清單：

保存條件：
-20℃保存。
注意事項(xiàng)： 
酶使用時(shí)宜存放在冰盒內(nèi)或冰浴上，使用完畢后宜立即放置于-20℃保存。
本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用說明：
1. 雙鏈DNA 5'突出(5'overhang)末端的補(bǔ)平：
a. 參考如下表格設(shè)置反應(yīng)體系：

b. 按上表設(shè)置好反應(yīng)體系后，輕輕混勻(可以用移液器吹打混勻或用Vortex在最低速度輕輕混勻)，隨后離心沉淀液體。
c. 37℃孵育10分鐘。
d. 75℃孵育10分鐘終止反應(yīng)。
2. 雙鏈DNA 5'突出(5'overhang)末端的標(biāo)記：
a. 參考如下表格設(shè)置反應(yīng)體系：

b. 按上述體系配好之后，輕輕混勻(可以用移液器吹打混勻或用Vortex在最低速度輕輕混勻)，隨后離心沉淀液體。
c. 30℃孵育15分鐘。
d. 75℃孵育10分鐘終止反應(yīng)。
3. 其他用途可以參考上述用途或適當(dāng)?shù)奈墨I(xiàn)資料進(jìn)行。