動植物總蛋白微量提取試劑盒

產(chǎn)品及特點

本產(chǎn)品用于快速提取動植物總蛋白，用于 SDS-PAGE 凝膠電泳和 Western

印跡分析以及蛋白活性測定等。本產(chǎn)品的其主要特點是：

1. 提取過程十分簡便，勻漿離心即可，整個過程只需要十幾分鐘。

2. 采用獨特的溫和裂解成分，蛋白保持天然活性。

3. 適用于各種動植物組織材料，包括新鮮或冰凍的材料。

4. 得到的提取物可以直接用于 SDS-PAGE、2D 電泳、Western 印跡分析以及

蛋白活性測定等下游實驗。

5. 一次可以處理 100mg 左右的樣品，足夠進行幾十次 SDS-PAGE mini 膠電泳

檢測。

運輸及保存 常溫運輸和保存，但收到貨后 5×SDS-PAGE 上樣液需-20℃保存，頻繁使用時可

以放 4℃保存，產(chǎn)品有效期為出廠后一年。

使用方法

使用前，好請在動植物總蛋白微量提取溶液 A 中加入自備的、新鮮配制的 1M

DTT 溶液 50uL。

一：勻漿法

注意：對致密的實體組織（如肌肉），好用 Polytron 剪切式勻漿機勻漿處理。

1. 稱取動物或植物組織樣品 100 mg，剪刀剪成黃豆大小，轉(zhuǎn)移到 10-15 mL 的塑料離心管中。

2. 加入 1mL 動植物總蛋白微量提取溶液 A，在冰上用 Polytron 剪切式勻漿機勻漿，直到?jīng)]有肉眼可見的組織塊。為了避免產(chǎn)熱，可以分多次勻漿，其間放冰上讓勻漿液冷卻。

3. 將勻漿液全部轉(zhuǎn)移到 1.5 mL 的塑料離心管中。

4. 4℃ 12,000 g 離心 10 分鐘，組織殘渣碎片將形成沉淀。

5. 將上清液轉(zhuǎn)移至一新的 1.5 mL 塑料離心管中即得到蛋白溶液，可置于-70℃冰箱保存或立即使用。如果要進行 SDS-PAGE 電泳，可取部分到離心管中，加入 5×SDS-PAGE 上樣緩沖液使其終濃度為 1×（加入樣品體積的 1/4 即可，40uL 樣品加入 10uL 5×SDS-PAGE 上樣緩沖液），在沸水中水浴 5 分鐘后立即上樣電泳。

二：直接研磨法

注意：可以使用玻璃和陶瓷的研缽，也可以使用與微量離心管式的研磨杵

1. 稱取動物或植物組織樣品 100 mg，剪刀剪成黃豆大小，轉(zhuǎn)移到預冷的研缽或離心管中。

2. 加入 1mL 動植物總蛋白微量提取溶液 A，用研磨杵研磨，直到?jīng)]有肉眼可見的組織塊。

3. 將勻漿液全部轉(zhuǎn)移到 1.5 mL 的塑料離心管中。

4. 4℃ 12,000g 離心 10 分鐘，組織殘渣碎片將形成沉淀。

5. 將上清液轉(zhuǎn)移至一新的 1.5 mL 塑料離心管中即得到蛋白溶液，可置于-70℃冰箱保存或立即使用。如果要進行 SDS-PAGE 電泳，可取部分到離心管中，加入 5×SDS-PAGE 上樣緩沖液使其終濃度為 1×（加入樣品體積的 1/4 即可，40uL 樣品加入 10uL 5×SDS-PAGE 上樣緩沖液），在沸水中水浴 5 分

鐘后立即上樣電泳。

三：液氮研磨法

注意：好使用玻璃和陶瓷的研缽

1. 取大約 100 mg 動物或植物組織樣品，轉(zhuǎn)移到預冷的研缽中。

2. 加入少量液氮，用研磨杵研磨成粉。

3. 加入 1mL 動植物總蛋白微量提取溶液 A 溶解，然后將溶液全部轉(zhuǎn)移到 1.5 mL的塑料離心管中。

4. 4℃ 12,000 g 離心 10 分鐘，組織殘渣碎片將形成沉淀。

5. 將上清液轉(zhuǎn)移至一新的 1.5 mL 塑料離心管中即得到蛋白溶液，可置于-70℃冰箱保存或立即使用。如果要進行 SDS-PAGE 電泳，可取部分到離心管中，加入 5×SDS-PAGE 上樣緩沖液使其終濃度為 1×（加入樣品體積的 1/4 即可，40uL 樣品加入 10uL 5×SDS-PAGE 上樣緩沖液），在沸水中水浴 5 分

鐘后立即上樣電泳。

注意：

1．如果 4℃ 12,000 g 離心 10 分鐘后得到的上清液中還有可見的沉淀，可以將上清轉(zhuǎn)移到一個新的離心管中后再 4℃ 12,000 g 離心 10 分鐘，以去除可見的小碎片。

2．植物組織中存在有大量的多酚、多糖、色素、次生代謝產(chǎn)物，如果需要除去植物蛋白樣品中殘存的色素等雜質(zhì)，可以在后得到的上清液中加入 5倍體積的冷丙酮或冷甲醇，混勻后-20℃放置 1 小時或過夜，然后 4℃12,000 rpm 離心 10 min，棄上清后室溫風干 3-5 分鐘，然后將樣品溶于自備的后續(xù)實驗緩沖液中即可。經(jīng)過此純化處理后，部分蛋白質(zhì)可能會發(fā)生變性，不能再用于活性檢測。