一管式反轉(zhuǎn)錄試劑盒(RT MIX)
產(chǎn)品及特點 本產(chǎn)品是一管式反轉(zhuǎn)錄預(yù)混 Mix,內(nèi)含反轉(zhuǎn)錄一鏈合成所需的所有試劑(MMLV、Random primers、Oligo dT Primer、dNTP Mixture、反應(yīng) Buffer 等),用戶只需加入模板 RNA 和 RNase-Free 水即可進行反應(yīng)。本產(chǎn)品特點如下:
1. cDNA 的合成更加方便,用戶只需準(zhǔn)備模板和水即可進行反應(yīng)。
2. 快捷,操作步驟已經(jīng)大限度地簡化,能減少污染,降低實驗誤差。
3. 效率高,特殊優(yōu)化的 oligo dT 和 N6 隨機引物配比,反轉(zhuǎn)錄效率高。
4. 速度快,只需 42℃,20 分鐘即可完成 cDNA 一鏈的合成。
5. 能夠用于 GC 含量高,二級結(jié)構(gòu)復(fù)雜的 RNA 模板,合成 cDNA 片段長度可達 12kb。
6. 兼容性好,合成的 cDNA 可直接用于熒光定量 PCR 反應(yīng),靈敏度高、穩(wěn)定性好。
規(guī)格及成分 成 份 編 號 10 次包裝 50 次包裝
2×RT MasterMix 170403 0.1 mL 0.5 mL
RNase-Free 水 80403 1 mL 1 mL
使用手冊 1 份
運輸及保存 低溫運輸,-20℃保存, 有效期一年。
自備試劑 RNA 模板。
使用方法1. 解凍后顛倒輕彈混勻各組分,以 20 uL 體系為例,按下表加入(2×RT Master Mix很粘稠,取用前請短暫離心,并避免吸頭外壁沾附損失):
2×RT MasterMix 10 uL
Total RNA/mRNA 模板(自備) 50 ng-2 ug/5-200ng
補 RNase-Free 水到 20 uL
注意:對亍二級結(jié)構(gòu)很復(fù)雜的 RNA 模板,推薦使用變性步驟,即在操作步驟之前,將模板 RNA 在 65℃孵育 5 分鐘后迅速轉(zhuǎn)移到冰上,再進行下一步操作。
2. 輕輕混勻,42℃孵育 20 分鐘進行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。
注意:對亍二級結(jié)構(gòu)復(fù)雜或者 GC 含量高的模板,可以提高溫度至 50℃,以增強反轉(zhuǎn)錄效率。
3. 85℃加熱 5 秒鐘滅活反轉(zhuǎn)錄酶置冰上備用(更長時間保存請置于-20℃)。
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