同步式去基因組DNA污染RT試劑盒
產(chǎn)品及特點(diǎn) 基因組 DNA(gDNA)污染是逆轉(zhuǎn)錄(RT)反應(yīng)最常見的難題,目前的去污染方法主要是 UTP-UNG 法和 RNase-free DNase 法。前者簡單,但成本高,主要用于臨床產(chǎn)品。后者必須把 gDNA 污染去除和 RT 反應(yīng)兩步分開進(jìn)行,不但繁瑣,還增加了第二次污染的幾率。為了克服上述方法的缺點(diǎn),本公司開發(fā)出了本產(chǎn)品,它與UTP-UNG 法和 RNase-free DNase 法比較如下:
UTP-UNG 法 DNase 法 本方法
可跟 RT 反應(yīng)同步進(jìn)行 是 否 是
可用常規(guī) dNTP 否 是 是
跟古細(xì)菌 DNA 聚合酶
(如 Pfu)兼容 否 是 是
此外,本產(chǎn)品還有下列特點(diǎn):
1. 同步式,去除 gDNA 污染和 RT 同步完成,比兩步法操作更簡單,極大地減少了操作誤差。
2. 方便,各種 RT 成分都整合進(jìn)了 RT Mix,用戶只需提供模板即可。
3. 去污染效率高,對(duì) ng 級(jí) gDNA 污染(在 20uL 體系中),去除率達(dá) 99.9%。
4. 跟 PCR 和熒光定量 PCR 兼容,且后續(xù) PCR 可用 Pfu 等古細(xì)菌 DNA 聚合酶(多為高保真酶),而 UTP-UNG 法則跟其不兼容。
5. 本試劑盒所用的 MMLV 逆轉(zhuǎn)錄酶為 RNase H 缺失突變,故合成 cDNA 片段長度可達(dá) 12 kb。還能用于 GC 含量高,二級(jí)結(jié)構(gòu)復(fù)雜的 RNA 模板。
6. 本產(chǎn)品規(guī)格足夠 50 次 20uL 體系的 RT 反應(yīng)。
7. 本產(chǎn)品只用于科研。
規(guī)格及成分 成份 編號(hào) 十孔盒包裝
2×抗污染 RT Mix 170403a 500 uL(白色蓋)
抗污染 MMLV-RI 混合液 170403b 100 uL(紅色蓋)
RNase-free 水 80403 1 mL(本色蓋)
使用手冊(cè) 170403sc 1 份
運(yùn)輸及保存 低溫運(yùn)輸,-20℃保存, 有效期一年。
自備試劑 RNA 模板,PCR 試劑盒。
注意事項(xiàng)1. 實(shí)驗(yàn)過程中請(qǐng)注意避免RNase污染,防止RNA降解或?qū)嶒?yàn)中的交叉污染。
2. 使用之前請(qǐng)充分輕柔混勻各成分,以防因鹽離子濃度局部不均影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
3. 本產(chǎn)品使用后應(yīng)盡快放回-20℃。
4. RNA模板的完整性對(duì)cDNA合成效率起著決定性作用,因此請(qǐng)選擇可靠的RNA提取/純化方法。
5. 操作人員請(qǐng)帶口罩和一次性手套,并經(jīng)常更換手套。
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