柱式血液RNAout

產(chǎn)品及特點(diǎn)

本產(chǎn)品經(jīng)過基因精心優(yōu)化而得，多項(xiàng)指標(biāo)超過國內(nèi)外同類產(chǎn)品。本產(chǎn)品是基因在血液 RNAOUT（CAT#：3071）基礎(chǔ)上開發(fā)的柱式升級(jí)產(chǎn)品，

專門從動(dòng)物全血樣品中快速提取總 RNA。跟血液 RNAOUT 相比，本產(chǎn)品具有

下列特點(diǎn)：

1. 比血液 RNAout 更加簡單快捷，直接使用新鮮的或冷凍的抗凝全血樣品，不需裂解紅細(xì)胞等任何預(yù)處理步驟，整個(gè)提取過程只需要十分鐘左右，可以全在室溫下進(jìn)行。

2. 產(chǎn)量和純度更高，OD260/280 均在 2.0 左右，產(chǎn)率一般為 2-5 ug/mL人血。

3. 每次微量提取的大樣品處理量可以達(dá)到 1.5 mL，高于進(jìn)口的同類產(chǎn)品。

4. 與常用的抗凝劑(包括肝素，EDTA，檸檬酸鈉，草酸鈉)兼容，得到的RNA 可以直接用于 RT-PCR 和 Northern 雜交等研究。
規(guī)格及成分 成 份 編 號(hào) 大紙盒包裝 
柱式血液 RNAout 溶液 A LM71202a 50 mL 柱式血液 RNAout 溶液 B LM71202b 15 mL（棕色瓶） 柱式血液 RNAout 溶液 C LM71202c 50 mL 離心吸附柱 LM60911 50 套 通用洗柱液 LM60408 50 mL RNA 洗脫液 LM71207 10 mL 使用手冊(cè) LM71202sc 1 份

運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸和保存，有效期一年。

自備試劑 氯仿。 

使用方法 

1. 將 0.2-1.5 mL 新鮮或解凍后的抗凝全血加入到 1.5 mL 塑料離心管中。

2. 12000-15000 g 室溫離心 3 分鐘，棄上清(血漿)。如果此時(shí)血液細(xì)胞沉淀體積大于 0.2 mL， 則需要減少血液的使用量，具體減少量需根據(jù)具體情況決定，因?yàn)楦鱾€(gè)個(gè)體(尤其是患者)血液中白細(xì)胞數(shù)目差別很大。

3. 將 1 mL 溶液 A 加入到血液細(xì)胞沉淀中，用移液槍充分吹打沉淀使細(xì)胞裂解。

4. 將 0.3 mL 的溶液 B 加入到離心管中，劇烈震蕩 30 秒。

5. 和 0.2 mL 氯仿加入到離心管中，劇烈震蕩 30 秒。

6. 12000-15000 g 室溫離心 3-5 分鐘，將上清液(為無色或淺紅色，約0.5-0.9 mL)轉(zhuǎn)移到另一干凈離心管中。注意：轉(zhuǎn)移的液體不要超過 0.7mL，否則下一步不能加入等體積的溶液 C。為防止污染，好留 100 uL左右的上清液。下層有機(jī)相一般呈深紅色，中間層為白色，含有 DNA，蛋白質(zhì)和其他細(xì)胞破碎物，避免觸及或吸取。

7. 加入等體積的溶液 C，充分顛倒混勻。

8. 分兩次將溶液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，每次轉(zhuǎn)移后 12000-15000 g 室溫離心半分鐘，棄穿透液。

9. 加 0.7 mL 通用洗柱液，室溫離心半分鐘，棄穿透液。

10. 如果有必要，可以再加 0.3 mL 通用洗柱液，室溫離心半分鐘，棄穿透液。注意：增加此步可以進(jìn)一步提高 RNA 的純度。

11. 室溫 12000-15000 g 離心半分鐘。此步十分重要，否則殘留的通用洗柱液會(huì)影響 RNA 的后續(xù)反應(yīng)。

12. 將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到一個(gè)自備的 RNase-free 的收集管中，加入 50-100uL RNA 洗脫液，室溫放置 1-2 分鐘。

13. 12000-15000 g 室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為 RNA 樣品，可以立即使用或存放于-80℃待用。

14. RNA 完整性的電泳檢測：如果需要做 Northern 雜交，強(qiáng)烈建議用戶使用甲醛變性膠進(jìn)行 RNA 電泳，因?yàn)榉亲冃阅z不能分離所有的 RNA 分子（BioTechniques，28：414，2000）。

15. RNA 產(chǎn)量產(chǎn)率測定：將 5-10 μL RNA 溶于 TE 緩沖液中(pH7.5-8.2 之間)檢測其在 OD260 的光吸收。通過光吸收可以得出 RNA 濃度（1OD260 的 RNA=40 μg/mL），進(jìn)而計(jì)算出 RNA 的產(chǎn)量（濃度 X 體積)和產(chǎn)率(RNA 產(chǎn)量/組織用量)。人血 RNA 產(chǎn)率一般為 2-5 ug/mL。

16. RNA純度測定：無污染的總RNA的OD260/OD280一般在2.0左右(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān))，高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染，但一般不影響 RT-PCR 等反應(yīng)。