服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 型號(hào) |
Quick血液基因組DNA快速提取試劑盒(硅膠膜離心柱法) | 50次/100次 | EY01P1008 |
組成及試劑配制
1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
實(shí)驗(yàn)外包
1.基因組學(xué):基因芯片、SNP檢測(cè)、DNA甲基化檢測(cè)、生物信息學(xué)分析
2.轉(zhuǎn)錄組學(xué):microRNA芯片、LncRNA芯片、表達(dá)譜芯片、RNA-seq
3.蛋白質(zhì)組學(xué):2D-DIGE、SILAC、iTRAQ、TMT、Label-free、MRM
4.基因檢測(cè):DNA/RNA提取、RT-PCR、Real-timePCR
5.蛋白質(zhì)檢測(cè):Western blot、Co-ip EMSA、CHIP、免疫熒光、ELISA
6.病理檢測(cè):HE染色、特殊染色、組織切片、免疫組化、流式細(xì)胞分選
7.代謝組學(xué):GC-MS、LC-MS、NMR
8.細(xì)胞及動(dòng)物模型:原代細(xì)胞、細(xì)胞模型、動(dòng)物模型構(gòu)建
PCR實(shí)驗(yàn)步驟:
①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其完全溶解。
②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang,蓋緊管蓋。手動(dòng)劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時(shí)加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀 將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA,混勻后15到30℃孵育10分鐘后,于4℃下12000rpm 離心10分鐘。此時(shí)離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗 移去上清液,每1mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少1ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制),清洗RNA沉淀?;靹蚝螅?/span>4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥 小心吸去大部分乙醇溶液,使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-10分鐘。
⑥溶解RNA沉淀 溶解RNA時(shí),先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次,使其完全溶解,獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 1)紫外吸收法測(cè)定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計(jì)調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(1:100)后,讀取其在分光光度計(jì)260nm和280nm處的吸收值,測(cè)定RNA溶液 濃度和純度。
氧化鈣(塊)(>98%,BR)Calcium oxide lump質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR 大量藍(lán)藻菌基因組DNA氯化銫萃取試劑盒5 豬圓環(huán)病毒Ⅱ型(PCV-Ⅱ)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法) 48T
1酸二氫鈣一水(85%~95%,BR)Calcium phosphate, monobasic, monohydrate質(zhì)量規(guī)格:85%~95%,BR RatIerleukin5,IL-5ELISA試劑盒大鼠白介素5(IL-5)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T Humanphosphoinositide-specificphospholipaseC,PIPLCELISA試劑盒人1酯酰肌醇特異性1酯酶C(PIPLC)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
腺苷-5'-二1酸三鋰鹽ADP.Li3質(zhì)量規(guī)格:>97%,BR 小鼠胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)ELISA試劑盒 ,英文名: IGFBP-3 ELISA Kit ELISAKitIL-3豬白介素3規(guī)格:48T/96T
赤蘚醇;赤蘚糖醇Erythritol質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR 牛葡萄糖61酸脫氫酶(G6PD)ELISA檢測(cè)試劑盒BovineGlucose-6-PhosphateDehydrogenase,G6PDELISAKit 96T/48T Humandecay-acceleratingfactor,DAFELISAKit人降解加速因子(DAF)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
溴莫尼定 Brimonidine質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR 犬肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)試劑盒 Canine Creatine Kinase MB isoenzyme,CK-MB ELISA Kit 人糖皮質(zhì)激素受體α(GR-α)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
磺草靈Asulam質(zhì)量規(guī)格:>95% 英文名稱HumanangiotensionⅠELISAKit人血管緊張素I(AngI)規(guī)格:96T/48T 豬白介素1(IL-1)試劑盒 Pig Ierleukin 1,IL-1 ELISA Kit
磺草靈(標(biāo)準(zhǔn)品)Asulam質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品 化線粒體氧化應(yīng)激活性氧(ROS)初級(jí)熒光測(cè)定試劑盒20 HumanActivatedLeukocyteCellAdhesionMolecule,ALCAMELISAKit 人白細(xì)胞活化黏附因子(ALCAM)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
苯磺酸貝托司汀Bepotastine besilate質(zhì)量規(guī)格:>98.5% Ratierferon-inducibleprotein16,IFI16/p16ELISA試劑盒大鼠γ干擾素誘導(dǎo)蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T HumanPancreastatinELISA試劑盒人胰抑制素(Pancreastatin)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
Quick血液基因組DNA快速提取試劑盒(硅膠膜離心柱法)英文名稱HumanansferrieceptorELISAKit人轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 10338-51-9紅景天苷廠家 Salidroside
超氧化物歧化酶(SOD)紅細(xì)胞裂解樣品制備試劑盒50 28608-75-5葒草苷說明書 Orientin
Ratglycogensyhasekinase,GSKELISA試劑盒大鼠糖原合成酶激酶(GSK)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T 35354-74-6和厚樸酚品牌 Honokiol
小鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β受體Ⅰ(TGFβR1)ELISA試劑盒 ,英文名: TGFβR1 ELISA Kit 528-43-8厚樸酚規(guī)格 Magnolol
犬骨橋素(OPN)ELISA檢測(cè)試劑盒CanineOsteopoin,OPNELISAKit 96T/48T 27409-30-9胡黃連苷I廠家 Picroside I
使用方法:
一、樣品DNA的制備用自選方法提取細(xì)菌樣品DNA。注意:DNA純化方法是決定檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品DNA,后面的PCR再靈敏也不能提高整體檢測(cè)靈敏度。
二、制備O157:H7標(biāo)準(zhǔn)曲線(以10-10E6這6個(gè)10倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對(duì)照,只提供沒有傳染性的、可以直接使用的DNA片段作為陽性對(duì)照。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管,分別為6,5,4,3,2和1號(hào)。
2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL純水(*用帶芯槍頭,下同)。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對(duì)照用TE緩沖液或純水10倍梯度稀釋到10E7拷貝/μL(注:請(qǐng)不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至10E7拷貝/μL,建議每次稀釋10倍,梯度稀釋至10E7拷貝/μL)。
4. 在6號(hào)管中加入5 μL 10E7拷貝/μL的O157:H7陽性對(duì)照(上步稀釋得),充分震蕩1分鐘,得10E6拷貝/μL的陽性對(duì)照。
5. 換槍頭,從6號(hào)管中取5 μL溶液到5號(hào)管中,充分震蕩1分鐘,得10E5拷貝/μL的陽性對(duì)照。6. 換槍頭,從5號(hào)管中取5 μL溶液到4號(hào)管中,重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的陽性對(duì)照。
7. NC管中不加任何陽性對(duì)照。
8. 從1-6號(hào)管中分別取5 μL和待測(cè)樣品一起進(jìn)行定量PCR(見下步),每個(gè)樣品做3次重復(fù)。PCR后得到每個(gè)陽性對(duì)照稀釋樣品的熒光PCR Ct值,并以之為縱軸,以濃度的對(duì)數(shù)值為橫軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
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