非凍型血液RNA保存液

產(chǎn)品及特點(diǎn)

由于血液富含 RNase，因此血液 RNA（主要是白細(xì)胞 RNA）非常容易降解，是臨床分子生物學(xué)研究中的一個棘手的問題。為解決此問題，本公司在非凍型組織 RNA 保存液的基礎(chǔ)上，開發(fā)了本產(chǎn)品，它具有下列特點(diǎn):

1. 能快速滲透到新鮮抗凝血液中的有核細(xì)胞內(nèi)（主要是白細(xì)胞），抑制 RNA

分子的降解。保存的血液白細(xì)胞 RNA 常溫可放置 3 天，4℃可放置 5 天，

-20℃可放置 3 個月。

2. 操作簡單，直接將本產(chǎn)品和白細(xì)胞樣品按比例混合即可。

3. 適用于人新鮮血和哺乳動物新白細(xì)胞，不適用于陳舊血液和凍凝血液，也

不適用于禽類血液和其他動物血液。

4. 重復(fù)性好，效果跟進(jìn)口同類產(chǎn)品相當(dāng)。

5. 保存的樣品可直接用本公司動物 RNAout 提取 RNA。
規(guī)格及成分 成 份 編 號 小立盒包裝 
本產(chǎn)品 LM111202 100 mL 使用手冊 LM111202sc 1 份

運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸和保存，有效期兩年。 
自備試劑 無。

使用方法 注意：RNase 污染無處不在，好用本公司的高效無毒固相 RNase 清除劑處理 RNA 工作區(qū)域，千萬不要使用烷基化試劑 DEPC（相當(dāng)于芥子氣）。

一、白細(xì)胞的分離和保存

1. 本產(chǎn)品保存全血的效果不好，故不建議用于全血的保存。必須先分離白細(xì)胞。

2. 室溫 1500-2000 g 離心新鮮血液 10-15 分鐘，最上層為血漿，最下層為紅細(xì)胞，中間層為膜狀的、含白細(xì)胞的 Buffy Coat（含白細(xì)胞多的血液此層可能很厚）。

3. 吸出血漿后，小心將中間的白細(xì)胞層吸出（允許污染少量紅細(xì)胞），按 0.5mL 白細(xì)胞加入到 2.5 mL（5 倍體積）的本產(chǎn)品的比例，將兩者混合。

4. 如此保存的白細(xì)胞可以在常溫（不超過 30℃）下放置 3 天，4℃可放置 5天。如果需要-20℃放置，需要先在 4℃放置 1 天，然后在 13000 g 室溫離心 3 分鐘，小心吸出淺粉紅色的上清液，再將沒有液體保存液的白細(xì)胞沉淀放置在-20℃，如此可放置 3 個月。不能直接有液體保存液的白細(xì)胞懸浮液放置在-20℃，否則凝固形成的冰晶將會刺破白細(xì)胞膜，在凝固的冰晶融化時，白細(xì)胞胞漿成分（含 RNA）會進(jìn)入上清，在離心時丟失，離心得到的只是細(xì)胞殘骸。

5. 使用時，對 4℃或以上溫度保存的白細(xì)胞，將 1.5 mL 本產(chǎn)品和白細(xì)胞的混合物轉(zhuǎn)移到離心管中，13000 g 室溫離心 3 分鐘。小心吸出淺粉紅色的上清液，沉淀為白細(xì)胞，直接用于 RNA 提取。如果是在-20℃保存的已經(jīng)按上步方法處理的白細(xì)胞沉淀，則直接用于 RNA 提取。

二、提取 RNA（本產(chǎn)品不提供 RNA 提取相關(guān)產(chǎn)品）

6. 建議使用或類似的動物 RNAout（本公司產(chǎn)品）。需要注意的是在加入異丙醇沉淀 RNA 時，本產(chǎn)品處理的樣品由于鹽離子濃度高會出現(xiàn)兩層（即兩相，正常樣品會出現(xiàn) RNA 沉淀，不會出現(xiàn)兩層），小心去除上清，然后加入相當(dāng)于下層體積 2 倍的 50%的異丙醇，顛倒混勻后13000 g 室溫離心 10 分鐘，RNA 將沉淀在管底。再按的標(biāo)準(zhǔn)操作流程用 75%乙醇洗滌沉淀即可。

三、RNA 的檢測（列出步驟僅供參考，本產(chǎn)品不提供相關(guān)產(chǎn)品）

7. RNA 完整性的電泳檢測：強(qiáng)烈建議用戶使用甲醛變性膠進(jìn)行 RNA 電泳，因為非變性膠中單鏈 RNA 分子會自生折疊成各種形狀，尤其不能使用DNA 上樣液，因為沒有經(jīng)過去 RNase 處理。

8. RNA 產(chǎn)量產(chǎn)率測定：將 5-10 μL RNA 用 TE 緩沖液 (pH8.2)稀釋 10 倍后檢測其在 OD260 的光吸收。通過光吸收可以得出 RNA 濃度（1 OD260的 RNA=40 μg/mL），進(jìn)而計算出 RNA 的產(chǎn)量（濃度 X 體積)和產(chǎn)率(RNA產(chǎn)量/組織用量)。人血 RNA 產(chǎn)率一般為 2-5 ug/mL。

9. RNA 純度測定：無污染的總 RNA 的 OD260/OD280 一般在 2.0 左右(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān))，高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染，但一般不影響 RT-PCR 等反應(yīng)。