柱式DNA膠回收試劑盒（又名柱式DNAback）
產(chǎn)品及特點(diǎn) 本試劑盒用于從瓊脂糖凝膠中或DNA反應(yīng)體系中(如PCR反應(yīng))回收DNA片段。試劑盒采用可以高效、專一結(jié)合DNA的硅膠膜和獨(dú)特的溶膠體系，可以從瓊脂糖凝膠中或DNA反應(yīng)體系中高效快速回收DNA片段，回收效率可達(dá)50-90%（跟片段大小相關(guān)）。本產(chǎn)品的特點(diǎn)如下:

1. 高效，回收效率最高可達(dá)90%（跟片段大小和膠濃度等因素有關(guān)），可以跟跟國(guó)外著名廠家的產(chǎn)品媲美。

2. 快速，整個(gè)過(guò)程只需要十余分鐘。洗脫液不需要額外加乙醇。

3. 兩用，既可用于膠回收，也可以用于PCR或其他酶反應(yīng)回收。

4. 范圍廣，回收DNA的長(zhǎng)度范圍為50 bp-40 Kb（但效率各不相同）。

5. 能回收單鏈、雙鏈及環(huán)狀DNA，吸附量為10ug。

6. 回收的DNA可直接用于酶切、連接、PCR、測(cè)序等多種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。

7. 本試劑盒足夠純化50片含DNA的瓊脂糖凝膠條（每片膠條重量不超過(guò)250mg），可以純化50次酶反應(yīng)（包括PCR反應(yīng)，每次體積不超過(guò)250uL）。
柱式DNA膠回收試劑盒（又名柱式DNAback）
規(guī)格及成分 成 份 編 號(hào) 大紙盒包裝 
通用溶膠液 60409 25 mL
吸附柱活化液 170602 25 mL
通用洗柱液 60408 50 mL
離心吸附柱(窄口) 60911 50 套
DNA 洗脫液 3.0 170603 10 mL
使用手冊(cè) 60202sc 1 份

柱式DNA膠回收試劑盒（又名柱式DNAback）運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸及保存，有效期為一年。由于通用溶膠液 2.0 是高鹽溶液，因此在低溫時(shí)容易產(chǎn)生沉淀。如果產(chǎn)生沉淀，需要 60℃加熱溶解后才可以使用。 

自備試劑 異丙醇

使用方法 一：對(duì)膠回收：

1. 用干凈的刀片切取含 DNA 片段的瓊脂糖凝膠（100 mg 左右，盡可能多地把多余的膠切除，否則會(huì)影響回收效率），放入一干凈的 1.5 mL 塑料離心管（自備）中稱重，按重量比為 1：2 的比例加入通用溶膠液 2.0 (0.1 g 的瓊脂糖凝膠需要加入 0.2mL 的通用溶膠液 2.0)。如果瓊脂糖凝膠的濃度大于 2%，則需要按 1：3 的比例加入通用溶膠液 2.0 溶解膠塊。

2. 50℃保溫 10 分鐘使膠完全溶化，每隔 2-3 分鐘振蕩數(shù)次以促進(jìn)瓊脂糖凝膠的溶化。如果片段長(zhǎng)度在 300bp 以下，建議不要 50℃保溫，而是延長(zhǎng)溶膠時(shí)間，以免 DNA 變性，影響回收率。

3. 在等待期間，活化離心吸附柱。在離心吸附柱中加入 0.5mL 吸附柱活化液，套上收集管后室溫放置 2 分鐘，然后 12,000 rpm 離心 2 分鐘，倒棄穿透液，再將吸附柱套上收集管后待用。活化后的離心吸附柱必須在當(dāng)天使用。

4. 在上柱前，在溶化的膠中加入相當(dāng)于膠塊體積 1/2 的異丙醇（對(duì) 100mg膠塊，加 50uL），快速振蕩 10 秒混勻。

5. 將溶液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，套上收集管，靜置 3 分鐘。注意：靜置有助于 DNA 與離心吸附柱的硅膠膜結(jié)合。本產(chǎn)品提供的離心吸附柱的上樣體積為 0.8mL，若溶膠液的總體積大于 0.8mL，一次加不完，可以分多次將溶液加入到吸附柱中。

6. 12000-15000 g 離心 1 分鐘，倒掉收集管中的穿透液。

7. 加入 0.7mL 通用洗柱液于離心柱中，12000-15000 g 離心 1 分鐘，倒棄收集管中的廢液。如果回收的 DNA 用于鹽敏感實(shí)驗(yàn)（如平末端連接或直接測(cè)序）,建議加入通用洗柱液后靜置 2-5 分鐘再離心。

8. 12000-15000 g 離心半分鐘以去除離心柱中的殘留液體。

9. 將離心柱吸附置于一新的干凈的塑料離心管（自備）中，懸空加入 50 uLDNA 洗脫液于離心吸附柱硅膠膜的中央。注意：如果回收的 DNA 用于測(cè)序，則可用重蒸水（自備）洗脫 DNA。DNA 洗脫液可以也用 TE 替代，但用水或 TE 替代 DNA 洗脫液 3.0 時(shí)，回收率可能稍有降低。

10. 靜置 3 分鐘后 12000-15000 g 離心 1 分鐘。

11. 離心管底部所得溶液即為純化的 DNA 溶液，可立即用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)或者放-20℃長(zhǎng)期保存。如果將所得 DNA 溶液再次加回到離心吸附柱中，重復(fù)洗脫過(guò)程，將得到更多的 DNA。

12. 用電泳方法或測(cè) OD 方法確定回收所得 DNA 的濃度，1 OD260 對(duì)應(yīng)的濃度是 50ug/mL（對(duì)雙鏈 DNA）或 40ug/mL（對(duì)單鏈 DNA），純凈 DNA的 OD260/OD280 比值應(yīng)該在 1.8 左右。注意：OD 讀數(shù)跟 pH 相關(guān)，如果用自備的重蒸水洗脫，OD 值會(huì)低于在 DNA 洗脫液 3.0 中測(cè)定的數(shù)字。

二：PCR 或其他酶反應(yīng)回收

13. 直接在 PCR 或其他酶反應(yīng)管中加 2 倍體積的通用溶膠液，振蕩 10 秒混勻。如果 PCR 反應(yīng)中使用了石蠟，需要預(yù)先去除。

14. 活化離心吸附柱。在離心吸附柱中加入 0.5mL 吸附柱活化液，套上收集管后室溫放置 2 分鐘，然后 12,000 rpm 離心 2 分鐘，倒棄穿透液，再將吸附柱套上收集管后待用。活化后的離心吸附柱必須在當(dāng)天使用。

15. 在上柱前，在反應(yīng)液和溶膠液的混合液中加入相當(dāng)于反應(yīng)體積 1/2 的異丙醇（對(duì) 100uL 的反應(yīng)液，加 50uL），快速振蕩 10 秒混勻。

16. 直接進(jìn)入上面膠回收操作的第 5 步并進(jìn)行后面的操作。