外泌體 DNA-RNAout

產(chǎn)品及特點(diǎn)本外泌體是指包含了復(fù)雜 RNA 和蛋白質(zhì)的小膜泡 (40-100nm)。多種細(xì)胞在正常及 病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體，經(jīng) 多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中 。所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌 體，且外泌體天然存在于體液中，包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。 有關(guān)他們 分泌和攝取及其組成、“運(yùn)載物”和相應(yīng)功能的精確分子機(jī)制剛剛開始研究。但從外泌 體提取核酸（主要是 RNA）非常棘手，為此本公司開發(fā)于外泌體核酸（DNA 和 RNA） 純化試劑。本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn)：

1. 一管式操作，在同一試管中完成，減少樣品丟失。

2. 沉淀法，不使用離心柱，能有效避免小 RNA 的丟失。

3. 能同時提取 RNA（包括 RNA 和 miRNA）和 DNA。

4. 回收率達(dá)到 90%以上，高于絕大部分基于離心柱的提取方法。
外泌體 DNA-RNAout
規(guī)格及成分 成 份 編 號 小扁盒包裝
外泌體核酸提取溶液 A 180807a 30 mL 外泌體核酸提取溶液 B 180807b 35 mL 外泌體核酸提取溶液 C 180807c 50 mL RNase-free 水 80403 1 mL
使用手冊 180807sc 1 份

外泌體 DNA-RNAout運(yùn)輸及保存 常溫運(yùn)輸保存，但外泌體核酸提取溶液 A 長期保存需要放 4℃。有效期一年。自備試劑 外泌體。

使用方法一、備外泌體（本試劑盒不提供相關(guān)試劑） 注意：自備的外泌體需要立即使用或放-80℃長期保存。用于核酸提取的外泌體可以 是沉淀，也可以是重懸液。 二、外泌體核酸提取

1. 從冰箱取出外泌體核酸提取溶液 A 放室溫或握在手上融化，直到?jīng)]有任何晶體。

2. 標(biāo)記 1.5-2 mL 螺旋蓋塑料離心管(如 Sarstedt CAT#:782.694.006)，為避免污染， 建議不要使用壓蓋式塑料離心管。在每個管蓋上做個標(biāo)記，以在下步離心時有 意將標(biāo)記方向朝向心面或離心面。

3. 將不超過 200μL 的外泌體重懸液加入到標(biāo)記好的塑料離心管中。

4. 每管中加入 600μL 外泌體核酸提取溶液 A，蓋上蓋子后振蕩數(shù)秒混勻。

5. 室溫放置 3 分鐘。

6. 加入 0.7 mL 外泌體核酸提取溶液 B，旋緊蓋后振蕩 30 秒混勻。

7. 14,000 g 室溫離心至少 15 分鐘。注意：離心時如果把標(biāo)記固定朝向心面或離心面， 則在后面的操作均得按此朝向進(jìn)行離心。

8. 小心移棄上清，注意不要觸及管底和管壁離心面的核酸沉淀（此時可能看不見）。

9. 加入 1.0 mL 外泌體核酸提取溶液 C, 振蕩數(shù)秒.

10. 14,000 g 室溫離心 5 分鐘。注意：離心管標(biāo)記的朝向要跟上面的一致。

11. 小心移棄上清，注意不要觸及管底和管壁離心面的核酸沉淀（可能在離心管內(nèi)壁的 離心面呈膜狀）。

12. 再短暫離心數(shù)秒, 用移液器移棄殘留液體（約 50 μL）。

13. 加入 200 μL RNase-free 水，用移液槍仔細(xì)吹打離心管管底和管壁離心面的膜狀沉 淀。如果溶液稍呈混濁狀屬于正常。注意：所得溶液即為外泌體核酸溶液。如果只 需要 RNA，必須去除 DNA，則另外用自備的 RNase-free DNase 對 DNA 污染進(jìn) 行降解。反之如果只需要 DNA，必須去除 RNA，則另外用自備的 DNase-free RNase 對 RNA 污染進(jìn)行降解。

14. 直接取適量用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。樣品可以室溫放置 2 小時，也可保存于-80℃保存一個月。 

5. 無毒環(huán)保，不需要使用苯酚和氯仿等有毒的有機(jī)溶液。

6. 本產(chǎn)品只能用于科研，不能。用于臨床