柱式植物RNAout（不含DNA酶）

產(chǎn)品及特點

本產(chǎn)品是基因植物 RNAOUT（CAT#：3080）的柱式升級產(chǎn)品，它結(jié)合了植物 RNAOUT 的高效性(其效果在近五十多種各類植物中得到驗證，植物名單見植物RNAOUT產(chǎn)品介紹的附錄)和基因柱式純化系列產(chǎn)品的快捷性。該產(chǎn)品特點如下：

1. 操作更加簡單快速，處理一個樣品只需要約十分鐘，比植物 RNAOUT 快一倍。

2. RNA 純度更高，平均 OD260/280 一般都在 2.0 左右，能夠有效去除大多數(shù)植物中的多糖污染。

3. 適用于所有用植物 RNAOUT 能提出 RNA 的植物(注:對有些植物可能需要在溶液 A 中額外添加 RVC)。

4. 得到的 RNA 可直接用于 RT-PCR、Northern 雜交、cDNA 合成等實驗。

5. 性價比高于進口的柱式植物 RNA 提取產(chǎn)品。

6. 由于小 RNA 太短很難上柱，故如果要提取小 RNA 需要用本公司專門的試劑盒。
規(guī)格及成分 成 份 編 號 大紙盒包裝 
柱式植物 RNA 提取溶液 A LM71203a 50 mL 柱式植物 RNA 提取溶液 B LM71203b 15 mL 柱式植物 RNA 提取溶液 C LM71203c 50 mL 離心吸附柱 LM60911 50 套 通用洗柱液 LM60408 50 mL RNA 洗脫液 LM71207 10 mL 使用手冊 LM71203sc 1 份
注：溶液 B 為淡黃色液體，使用前請觀察顏色是否正常。若溶液 B 有油粒狀顆 粒及分層，屬正?，F(xiàn)象，不影響使用。 

運輸及保存 常溫運輸和保存，溶液 B 需要 4℃保存，有效期一年。

自備試劑 氯仿。

使用方法 1. 估算組織細胞的用量。每次微量提取一般需要 100-200 mg 植物葉片、或 50-100 mg 植物種子、或 200-500 mg 植物果實。

2. 樣品破碎：

1) 勻漿法：先將新鮮植物組織剪切成小塊(保存在 RNALOCKER 中的植物組織需用紙吸去 RNALOCKER 液體后再剪切成小塊)，放入 10-15 mL塑料離心管中，加入 1 mL 溶液 A，然后用勻漿器勻漿 5-20 秒。勻漿時會產(chǎn)生泡沫，但不影響提取效果。

2) 液氮研磨法（適用于復(fù)雜，易降解樣品）：取適量新鮮植物組織放入含液氮的研缽中，迅速將組織研磨成粉末后，將粉末轉(zhuǎn)移到合適的塑料離心管中，加入 1 mL 柱式植物 RNA 提取溶液 A，立即劇烈振蕩20 秒，充分混勻。

注意：溶解柱式植物 RNA 提取溶液 A 沉淀。柱式植物 RNA 提取溶液 A 在 4℃放置后可能會產(chǎn)生沉淀，使用前必須放在 65℃水浴使沉淀徹底溶解并充分搖勻后再取用。

3. 將勻漿物或液氮研磨物轉(zhuǎn)移至干凈的 1.5 mL 塑料離心管中(可以不必轉(zhuǎn)移非液體的細胞碎片)。有的植物組織（比如果實）含有大量水份，勻漿液會多于 1 mL，轉(zhuǎn)移時也只取 1 mL。

4. 在離心管中加入 0.3 mL 的柱式植物 RNA 提取溶液 B 和 0.2 mL 自備氯仿，在振蕩器上振蕩 30 秒混勻，此時溶液呈均勻的乳濁狀。振蕩器振蕩時必須使管底溶液震蕩起來。

5. 室溫 12000-15000 g 離心 3-5 分鐘，兩相間將有約 5-10 毫米厚的細胞破碎物。

6. 將上清液(約 0.6 mL)轉(zhuǎn)移到另一干凈的 1.5 mL 塑料離心管中，下層有機相和中間層含有 DNA、蛋白質(zhì)和其他雜質(zhì)，避免觸及或吸取。留下100 uL 上清液不取。

7. 加入等體積的柱式植物 RNA 提取溶液 C，充分顛倒混勻。如果有沉淀產(chǎn)生（對某些植物，屬于正?，F(xiàn)象），千萬不要去掉沉淀，一定要把所有的混合物上柱。

8. 將一半的溶液（如果有沉淀，則先混勻）轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，13000-15000 g 室溫離心半分鐘，棄穿透液。

9. 將剩下的一半溶液（如果有沉淀，則先混勻）轉(zhuǎn)移到同一離心吸附柱中，13000-15000 g 室溫離心半分鐘，棄穿透液。

10. 加 0.7 mL 通用洗柱液，室溫離心半分鐘，棄穿透液。再加 0.3 mL 通用洗柱液，室溫離心半分鐘，棄穿透液。一般樣品如此洗滌兩次即可，但如果在第 7 步加入柱式植物 RNA 提取溶液 C 后有沉淀產(chǎn)生，則需要洗三次，每次加入的通用洗滌液的量分別為 0.4、0.3 和 0.3 mL。

11. 室溫離心半分鐘。此步十分重要，否則殘留的乙醇會影響 RNA 的使用。

12. 將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到 RNase-free 收集管中，加入 50-100 uL RNA 洗脫液，室溫放置 1-2 分鐘。

13. 13000-15000 g 室溫離心半分鐘，離心管中溶液即為 RNA 樣品，可以立即使用或存放于-80℃待用。

14. RNA 完整性的電泳檢測：如果需要做 Northern 雜交，強烈建議用戶使用甲醛變性膠進行 RNA 電泳，因為非變性膠不能分離所有的 RNA 分子（BioTechniques，28：414，2000）。如果電泳發(fā)現(xiàn) DNA 污染嚴重（跟樣品相關(guān)）建議使用含有 RNase-free DNase 處理步驟的柱植物RNAout 2.0 （ CAT#:90404 ）， 也 可 以 另 購 膜 結(jié) 合 DNA 清除劑（CAT#90904）升級成柱式植物 RNAout 2.0。

15. RNA 產(chǎn)量產(chǎn)率測定：將 5-10 μL RNA 溶于 TE 緩沖液中(pH7.5-8.2 之間)檢測其在OD260的光吸收。通過光吸收可以得出RNA濃度（1 OD260的 RNA=40 μg/mL），進而計算出 RNA 的產(chǎn)量（濃度 X 體積)和產(chǎn)率(RNA產(chǎn)量/組織用量)。

16. RNA 純度測定：無污染的總 RNA 的 OD260/OD280 一般在 1.8-2.1 之間(具體數(shù)值與其堿基組成和溶液成分等多種因素有關(guān))，高于此范圍則分別表示樣品可能有蛋白質(zhì)污染，但一般不影響 RT-PCR 等反應(yīng)。