??????Caspase 3 活性檢測試劑盒(Caspase 3 Activity Assay Kit)是采用分光光度法檢測細胞或組織裂解液中 caspase 3酶活性或純化的caspase 3酶活性的試劑盒。 ??????Caspase(Cysteine-requiring Aspartate Protease)是一個在細胞凋亡過程中起重要作用的蛋白酶家族。 Caspase?3也稱 CPP32、Yama或apopain,有時被寫作caspase-3或caspase 3,屬于caspase家族的CED-3亞家族(CED-3 subfamily),是細胞凋亡過程中的一個關鍵酶。Caspase?3是哺乳動物細胞中研究最多的一個caspase。Caspase?3可以剪切procaspase 3、6、7 和9,并可以直接特異性剪切許多caspase底物,包括PARP(poly(ADP-ribose)polymerase),ICAD(Inhibitor?of?caspase-activated deoxyribonuclease),gelsolin和fodrin等。這些由caspase 3介導的蛋白剪切是細胞凋亡分子機制的重要組成部分。另外,caspase?3在細胞核凋亡過程中也起到了關鍵作用,包括染色質(zhì)固縮(chromatin?condensation),DNA片段化(DNA?fragmentation)等。同時caspase?3對細胞起泡(cell blebbing)也起到關鍵作用。 ??????本Caspase 3活性檢測試劑盒是基于caspase 3可以催化底物Ac-DEVD-pNA(acetyl-Asp-Glu-Val-Asp?p-nitroanilide)產(chǎn)生黃色的pNA(p-nitroaniline),從而可以通過測定吸光度來檢測caspase 3的活性。pNA在405nm附近有強吸收。 ??????試劑盒中提供了caspase 3催化產(chǎn)生的黃色產(chǎn)物pNA,可以作為定量caspase 3酶活性的標準品。 ??????本試劑盒用酶標儀檢測或容量不超過100μl的分光光 度檢測杯檢測時,除標準曲線外可以檢測100個樣品。 包裝清單:
保存條件: ??????-20℃保存,Ac-DEVD-pNA和pNA需避光保存。 注意事項: ??????須自備可以測定A405或A400的酶標儀或容量不超過100μl的分光光度檢測杯及相應分光光度計。優(yōu)先考慮測定A405,如有困難可以測定A400。 ??????Ac-YVAD-pNA需盡量避免反復凍融,請注意適當分裝。 ??????測定蛋白濃度需Bradford蛋白濃度測定試劑盒(P0006),可向碧云天訂購。建議樣品用水稀釋1倍后再用Bradford法測定蛋白濃度,以降低DTT對蛋白濃度測定的干擾。 ??????有文獻報道少數(shù)類型的細胞凋亡檢測不到caspase 3的激活。? ??????pNA(中文名為4-硝基苯胺)對人體有毒,操作時請?zhí)貏e小心,并注意有效防護以避免直接接觸人體或吸入體內(nèi)。pNA(10mM)在4℃、冰浴等較低溫度情況下會凝固而粘在離心管管底、管壁或管蓋內(nèi),可以20-25℃水浴溫育片刻至全部融解后使用。 ??????本試劑盒的裂解液可以和碧云天生產(chǎn)的其它caspase活性檢測試劑盒的裂解液通用,即本試劑盒裂解液制備的蛋白樣品可以用于碧云天其它caspase活性檢測試劑盒的檢測。 ??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。 ??????為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。?
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