??????Klenow?Fragment,Exo-,即沒有外切酶活性的Klenow片段,是大腸桿菌聚合酶I(E.coli.DNA polymerase I)的大片段 (Large?Fragment)缺失了外切酶活性的突變體。Klenow Fragment,Exo-保留了DNA聚合酶I的5'→3'聚合酶活性,但缺少完整 的Klenow酶的5'→3'和3'→5'外切酶活性。 ??????特點(diǎn):由于Klenow Fragment,Exo-沒有外切酶活性,其在末端補(bǔ)平時(shí)經(jīng)常會(huì)在3'末端額外加上1個(gè)或多個(gè)核苷酸,因此不能用于產(chǎn)生平末端而用于后續(xù)的連接。 ??????用途:5'突出末端的標(biāo)記;隨機(jī)引物法進(jìn)行DNA標(biāo)記;Sanger雙脫氧法進(jìn)行DNA測(cè)序等。? ??????來源:由大腸桿菌表達(dá),表達(dá)基因的來源為突變的 polA 基因片段。 ??????分子量:約68kDa(單體)。 ??????活性定義:37℃30分鐘內(nèi),催化10nmol脫氧核糖核苷酸(dNTPs)摻入到多聚核苷酸中所需的酶量定義為1個(gè)活性單位。 ??????酶活性檢測(cè)條件:67mM potassium phosphate(pH7.4),6.7mM MgCl2,1mM 2-mercaptoethanol,0.033mM dATP,0.033mM dTTP,0.4MBq/ml[3H]-dTTP,62.5μg/ml poly(dA-dT)·poly(dA-dT)。 ??????純度:不含DNA內(nèi)切酶,不含RNase。 ??????酶儲(chǔ)存溶液:25mM Tris-HCl(pH7.5),0.1mM EDTA,1mM DTT,50%(v/v)glycerol。 ??????Reaction Buffer(10X):500mM Tris-HCl(pH8.0 at 25℃),50mM MgCl2, 10mM DTT。 ??????緩沖液兼容性:在碧云天的內(nèi)切酶反應(yīng)緩沖液1X O、1X R、1X Y、2X Y中的活性為100%,在1X B、1X G中的活性為100%;在碧云天的Taq、Pfu DNA polymerase和M-MuLV反應(yīng)緩沖液中的活性為100%。 ??????失活或抑制:75℃加熱10分鐘或加入適量EDTA均可導(dǎo)致Klenow?Fragment,Exo-失活。金屬離子螯合劑,無機(jī)焦磷酸鹽(PPi),大劑量的無機(jī)磷酸鹽(Pi)均對(duì)Klenow Fragment,Exo-有抑制作用。 包裝清單:
保存條件: ??????-20℃保存。 注意事項(xiàng):? ??????酶使用時(shí)宜存放在冰盒內(nèi)或冰浴上,使用完畢后宜立即放置于-20℃保存。 ??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學(xué)研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。 ??????為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。?
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