??????碧云天生產的SABC-AP Kit (IHC, ICC, Blotting & ELISA)是基于Streptavidin-Biotin Complex (SABC)信號放大系統(tǒng)而研制的用于免疫組化(Immunohistochemistry,?IHC)、免疫細胞化學(Immunocytochemistry,?ICC)、Western、Northern、Southern、EMSA等印跡(blotting)檢測以及ELISA等基于生物素標記的各種高靈敏度檢測。 ??????本試劑盒檢測靈敏度高。與常規(guī)的檢測方法相比,由于本試劑盒采用了SABC信號放大系統(tǒng),檢測靈敏度顯著提高,通常檢測靈敏度比常規(guī)方法可以提高約5-10倍。常規(guī)方法檢測信號過弱時,強烈推薦嘗試本試劑盒。 ??????本試劑盒特異性強、背景低。本試劑盒采用了比Avidin特異性更強、背景更低、靈敏度更高的Streptavidin。Streptavidin (鏈霉親和素)是從Streptomyces adidinii?中純化獲得的一種分子量為66kD的四聚體蛋白,可以同時結合4個生物素分子,其對生物素的解離常數(Kd, dissociation constant)可達10-15M,比通??乖贵w的親和力高約100萬倍,可以確保與生物素高度專一地結合。Streptavidin與雞蛋清來源的Avidin (親和素)在空間結構以及與生物素的親和力方面具有高度的相似性,但Streptavidin等電點幾乎為中性(pI=6.0-6.5),其在中性條件下幾乎不帶電荷。而Avidin的pI=10.5,在中性條件下帶正電荷。因此Streptavidin比Avidin的非特異性結合更低,檢測靈敏度更高。 ??????檢測原理:參考圖1,組織、細胞、轉移到膜上的或者結合于多孔細胞培養(yǎng)板上的抗原先與一抗結合,后者再與生物素標記的二抗結合;按照適當比例將Streptavidin和生物素標記的堿性磷酸酶(Biotin-labeled Alkaline Phosphatase, Biotin-AP)混合,形成網絡狀的SABC-AP (Streptavidin-Biotin Complex containing AP)復合物;接著二抗上標記的生物素再與SABC-AP結合,加入AP底物進行顯色即可檢測到相應的信號。其中Streptavidin和Biotin-AP混合后形成網絡狀復合物是信號能被放大的關鍵,相當于一個待檢測的生物素分子通過SABC-AP復合物的識別最終可以由很多個AP分子來顯示其信號,從而達到了信號放大的效果。
圖1. 本試劑盒的檢測原理圖。
??????本試劑盒用于IHC、ICC或Blotting時,可以配制成100ml的SABC工作液。按照IHC和ICC每個樣品需要使用100μl的SABC工作液計算,本試劑盒可用于1000個樣品的檢測。按照每張膜需10ml SABC工作液計算,本試劑盒可用于10次的Blotting檢測。本試劑盒用于ELISA檢測時,可以配制成500ml SABC工作液。按照ELISA檢測每個樣品需要使用100μl的SABC工作液計算,本試劑盒可用于5000個樣品的檢測。 包裝清單:
保存條件: ??????-20℃保存,一年有效。4℃保存,一個月有效。 注意事項: ??????本試劑盒使用過程中所需的溶液不能含有堿性磷酸酶抑制劑,也不能加入可能含有生物素的溶液,如常規(guī)血清、脫脂奶粉、細胞培養(yǎng)液等,否則會降低本試劑盒的檢測靈敏度。 ??????任何與液體孵育有關的步驟都需要確保液體能很好地覆蓋樣品。樣品沒有被液體充分覆蓋而最終出現發(fā)干的情況,會導致染色不能正常進行。 ??????實驗所需緩沖液宜新鮮配制。長期放置的緩沖液可能會因為微生物污染,而導致檢測效果的下降。 ??????本試劑盒中的兩種試劑需配套使用,切勿與其它試劑混用。 ??????本產品僅限于專業(yè)人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內。 ??????為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
碧云天生物技術有限公司
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