??????T4 Polynucleotide Kinase，簡稱T4 PNK，中文名稱T4多聚核苷酸激酶，是一種多聚核苷酸5'羥基激酶，可以催化ATP的γ位磷酸基團向單鏈或雙鏈DNA、RNA、寡核苷酸或帶有3'磷酸基團的單核苷酸的5'羥基轉(zhuǎn)移。其他NTP也可產(chǎn)生相同的反應：5'-OH + NTP → 5'-P + NDP。
??????上述的磷酸化反應是可逆的。當缺失ATP并且存在ADP的情況下，T4 Polynucleotide Kinase可以顯示出5'磷酸酯酶的活性，催化單鏈或雙鏈DNA、RNA、寡核苷酸或帶有3'磷酸基團的單核苷酸的5'磷酸基團向ADP的轉(zhuǎn)移形成ATP。其他NTP也可產(chǎn)生相同的反應：5'-P + NDP → 5'-OH + NTP(最適pH為6.4左右)。
??????當ATP和ADP都適量存在時，T4 Polynucleotide Kinase可以催化單鏈或雙鏈DNA、RNA、寡核苷酸或帶有3'磷酸基團的單核苷酸的5'磷酸基團和ATP的γ位磷酸基團之間的交換反應。其他NTP也可產(chǎn)生相同的反應：5'-P + NTP + NDP→5'-P + NDP + NTP。
??????T4 Polynucleotide Kinase同時具有3'磷酸酯酶活性，可催化3'磷酸化的多聚核苷酸的去磷酸化：3'-P → 3'-OH + Pi(最適pH為5.9左右)。
??????T4 Polynucleotide Kinase的激酶活性在C-末端附近，而磷酸酯酶活性在N-末端附近。
??????用途：寡核苷酸、DNA或RNA的5'末端標記，用作Southern、Northern、EMSA等的探針，凝膠電泳的marker，DNA測序引物，PCR引物等；使寡核苷酸、DNA或RNA的5'端磷酸化，確保后續(xù)連接反應順利進行；催化3'磷酸化的單核苷酸的5'磷酸化，使該單核苷酸可以和DNA或RNA的3'末端連接；去除3'端磷酸基團。
??????來源：由大腸桿菌表達，表達基因的來源為T4嗜菌體。
??????活性定義：37℃ 30分鐘內(nèi)，將轉(zhuǎn)移ATP上1 nmol γ-磷酸基團轉(zhuǎn)移到DNA 5'-OH末端所需的酶量定義為1個活性單位。
??????酶活性檢測條件：100mM Tris-HCl(pH8.0)，10mM MgCl₂，5mM DTT，0.5mM 5'-OH DNA，0.05mM ATP，
0.1MBq/ml [γ-³³P]-ATP。
??????純度：不含DNA內(nèi)切酶和外切酶，不含RNA酶。
??????酶儲存溶液：20mM Tris-HCl(pH7.5)，25mM KCl，0.1mM EDTA，2mM DTT，50% glycerol。
??????Reaction Buffer A(10X)(用于磷酸化反應)：500mM Tris-HCl(pH7.6 at 25℃)，100mM MgCl₂，50mM DTT，1mM
spermidine，1mM EDTA。
??????Reaction Buffer B(10X)(用于交換反應)：500mM imidazole-HCl(pH6.4 at 25℃)，0.18M MgCl₂，50mM DTT，
1mM spermidine，1mM EDTA，1mM ADP。
??????緩沖液兼容性：在碧云天的內(nèi)切酶反應緩沖液1X G、1X O、1X Y、2X Y中的活性為100%，在1X B、1X R中的活性為75-100%；在碧云天的Taq、Pfu DNA polymerase和M-MuLV反應緩沖液中的活性為50-100%。
??????失活或抑制：75℃加熱10分鐘可使T4?Polynucleotide?Kinase失活，加入EDTA也可使T4 Polynucleotide Kinase失活。金屬離子螯合劑、磷酸鹽、銨根離子、大于50mM的KCl和NaCl均可顯著抑制T4 Polynucleotide Kinase的活性。
包裝清單：

保存條件：
??????-20℃保存。
注意事項：?
??????銨鹽沉淀獲得的DNA不能用于T4?Polynucleotide?Kinase的標記反應。銨鹽可強烈抑制T4 Polynucleotide Kinase的酶活性。
??????PEG可促進磷酸化反應速率和效率；交換反應體系應加入PEG。?
??????酶使用時宜存放在冰盒內(nèi)或冰浴上，使用完畢后宜立即放置于-20℃保存。
??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。
??????為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。?