??????碧云天生產(chǎn)的Thermolabile dsDNase,即熱敏感性雙鏈脫氧核糖核酸酶,是一種用于快速、安全地去除RNA樣品中基因組DNA(genomic DNA, gDNA)污染的重組表達的熱敏感性雙鏈脫氧核糖核酸酶。本產(chǎn)品可特異性剪切雙鏈DNA(double strand DNA, dsDNA)中的磷酸二酯鍵,產(chǎn)生帶有5’-磷酸與3’-羥基末端的寡核苷酸的核酸內(nèi)切酶。 ??????本產(chǎn)品對RNA或單鏈DNA如cDNA和引物幾乎無酶切活性,在鎂離子存在的情況下,本產(chǎn)品對dsDNA的酶切活性比對ssDNA的酶切活性約高5000倍。并且本產(chǎn)品55℃加熱5分鐘即可被失活,因此非常適合用于在反轉(zhuǎn)錄之前快速便捷地去除RNA樣品中的基因組DNA污染。 ??????本產(chǎn)品在20-40℃保持高活性狀態(tài),比牛DNase I的活力約高30倍,但可通過55℃熱處理5分鐘而完全且不可逆地滅活。 ??????特點:dsDNA特異性,特異性消化雙鏈DNA而對單鏈DNA及RNA無活性;熱不穩(wěn)定性,使用相對溫和的55℃加熱處理5分鐘可使Thermolabile dsDNase不可逆失活;活性強,2分鐘孵育即可將RNA樣品中所含有的基因組DNA或1μg基因組DNA消化完畢(參靠圖1)。
??????圖1. 碧云天生產(chǎn)的Thermolabile dsDNase的特異性及熱敏感性檢測效果圖。A. 碧云天生產(chǎn)的Thermolabile dsDNase、同類產(chǎn)品(Competitor dsDNase)及DNase I (D7073)消化400bp雙鏈DNA (dsDNA)或45nt單鏈DNA (ssDNA)的效果對比圖。反應體系均為10μl,dsDNA與ssDNA總量均為400ng,反應條件為37°C孵育2min。圖中可見Thermolabile dsDNase特異性消化dsDNA,而對ssDNA無活性,DNase I對于dsDNA和ssDNA沒有選擇性。B. 55℃孵育5min可使Thermolabile dsDNase完全失活。400ng長度約400bp的PCR產(chǎn)物,加入Thermolabile dsDNase后37℃孵育2min,或者先55℃孵育5min后再37℃孵育2min。
??????用途:制備不含DNA的RNA樣品;反轉(zhuǎn)錄前RNA樣品中去除基因組DNA污染;體外T3、T7、SP6等RNA Polymerases催化的RNA合成后消化去除模板DNA。 ??????來源:Pichia pastoris重組表達Thermolabile dsDNase基因。 ??????分子量:43kDa ??????純度:不含其它DNA內(nèi)切酶與外切酶活性,不含RNA酶活性。 ??????酶儲存溶液:25mM Tris-HCl (pH7.5),2mM MgCl2,10mM NaCl,0.01%(v/v) Triton X-100,50%(v/v) glycerol。 ??????Reaction Buffer(10X):200mM Tris-HCl (pH8.3),60mM MgCl2。 ??????失活或抑制:55℃加熱5min可使Thermolabile dsDNase完全失活;金屬離子螯合劑如EDTA、毫摩爾濃度的鋅等金屬離子、低于0.1%的SDS、高鹽以及還原劑如DTT和巰基乙醇均可抑制Thermolabile dsDNase的酶活性。 包裝清單:
保存條件: ??????-20℃保存。 注意事項: ??????本產(chǎn)品用于反轉(zhuǎn)錄反應前RNA樣品中去除基因組DNA污染時,必須注意RNase-free的相關操作規(guī)范。 ??????本產(chǎn)品僅限于專業(yè)人員的科學研究用,不得用于臨床診斷或治療,不得用于食品或藥品,不得存放于普通住宅內(nèi)。 ??????為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。
碧云天生物技術有限公司
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