中文名：雙鏈DNA酶
英文名：dsDNase
純度：≥90%
貨號(hào)：D397988
包裝：1kit
存儲(chǔ)溫度：-20°C儲(chǔ)存
產(chǎn)品介紹：
產(chǎn)品組成
| 貨號(hào) |
組分 |
規(guī)格 |
| D397988A-50μl |
dsDNase |
50μl |
| D397988B-200μl |
10× dsDNase Buffer |
200μl |
|
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
dsDNase 是一種核酸內(nèi)切酶，能夠裂解 DNA 中的磷酸二酯鍵， 生成帶有 5'- 磷酸和 3'- 羥基末端的寡核苷酸。dsDNase 能夠特異性的消化雙鏈 DNA（double-stranded DNA, dsDNA）而不會(huì)消化單鏈 DNA、引物、探針和 RNA。dsDNase 具有熱敏感性，可在 55℃條件下快速失活。dsDNase 主要用于反轉(zhuǎn)錄實(shí)驗(yàn)前快速去除 RNA 樣本中的基因組 DNA 污染，與傳統(tǒng)的使用 DNase I 去除基因組 DNA 污染 的方法相比，無(wú)需額外加入 EDTA 失活，可減少對(duì) RNA 的損傷，同時(shí)節(jié)省實(shí)驗(yàn)時(shí)間，保證 RNA 水平定量的準(zhǔn)確性。
活性定義
根據(jù) Kunitz 實(shí)驗(yàn)方法，在 25℃ pH 5.0 的條件下，以過(guò)量的大分 子 DNA 為底物，在 260 nm 波長(zhǎng)處每分鐘能引起吸光度增加 0.001 的 酶量定義為 1 個(gè)活性單位（U）。
儲(chǔ)存緩沖液
25 mM Tris-HCl (pH7.5，@25℃ ), 2.0 mM MgCl2, 10 mM NaCl, 0.01 % (v/v) Triton X-100, 50 % (v/v) glycerol。
抑制與失活
抑制條件：金屬離子、EDTA、SDS、DTT、β- 巰基乙醇、高鹽 離子濃度等會(huì)抑制 dsDNase 的活性；失活條件：55℃溫育 5 min。?
質(zhì)量控制
蛋白質(zhì)純度：通過(guò) SDS-PAGE 并考馬斯亮藍(lán)染色，該酶純度 ≥90%。
RNA 酶活性檢測(cè)：將酶液與 RNA 底物 在 37 溫育 1 h，通過(guò)凝膠電泳檢測(cè)沒有發(fā)現(xiàn) RNA 底物降解。
功能檢測(cè)：該產(chǎn)品被用于測(cè)試去除來(lái)自 RNA 樣本中的基因組 DNA 并進(jìn)行了 RT-qPCR 擴(kuò)增，發(fā)現(xiàn)去除率 ≥99.9%。RNA 數(shù)量不受 dsDNase 處理的影響。
使用方法
1. 于冰上配制如下反應(yīng)體系：
2. 輕輕吹打混勻反應(yīng)體系后，將以上混合液在 37℃溫育 2~5 min；
3. 65℃熱失活 2 min，迅速將獲得的 RNA 置于冰上，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
長(zhǎng)期保存請(qǐng)置于 -80℃，避免反復(fù)凍融。
注意事項(xiàng)
1. 若 RNA 樣本下游用于 RT-PCR，且目的基因長(zhǎng)度 ≥3 kb，失活步驟前
需添加終濃度為 10 mM 的 DTT；
2. 為避免 RNA 降解，可在反應(yīng)體系中加入適量的 RNase Inhibitor。
常見問(wèn)題
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關(guān)鍵字： 雙鏈DNA酶;dsDNase
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