產(chǎn)品描述
Hieff NGS® UltimaTM DNA Ligation Module是針對(duì)Illumina®高通量測(cè)序平臺(tái)文庫(kù)構(gòu)建專業(yè)設(shè)計(jì)的DNA連接模塊，其中的亮點(diǎn)為本產(chǎn)品采用一款我公司自主研發(fā)的高效連接酶Fast T4 DNA ligase。本產(chǎn)品可在雙鏈平末端DNA片段或雙鏈3´-dA DNA片段的兩端連接Illumina®測(cè)序平臺(tái)適用的DNA接頭，具有連接效率高、簡(jiǎn)便、可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化等優(yōu)勢(shì)。本產(chǎn)品已與Hieff NGS® UltimaTM Endperp Mix（Cat#12605），2×Super Canace® II High-Fidelity Mix for Library Amplification（Cat#12621）共同用于DNA文庫(kù)構(gòu)建，通過Illumina®高通量平臺(tái)測(cè)序驗(yàn)證其有效性。本產(chǎn)品中提供的所有試劑組分，都經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量與功能驗(yàn)證，最高程度保障產(chǎn)品優(yōu)異性能與批間穩(wěn)定性。
質(zhì)量控制
Fast T4 DNA Ligase
1. SDS-PAGE純度：>95%。
2. 16小時(shí)孵育檢測(cè)：50 μL反應(yīng)體系中包含5μl本酶和1 μg HindIII-λDNA，37°C下孵育16小時(shí)。經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，條帶無(wú)降解；50 μL反應(yīng)體系中包含5μl本酶和1 μg T3 DNA，37°C下孵育16小時(shí)。經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，條帶無(wú)降解。
3. RNase活性：5 μl本酶中加入40 ng FAM-RNA及，37°C下孵育16小時(shí)。經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)，條帶無(wú)降解。
4. 核酸內(nèi)切酶活性：50 μL反應(yīng)體系中加入5 μl本酶和1 μg φX174 RF I DNA，37°C下孵育4小時(shí)。經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，RF II轉(zhuǎn)化比率<10%。
5. 核酸外切酶活性：50 μL反應(yīng)體系中加入至少5 μl本酶和1 μg聲振的[3H]DNA（105 cpm/μg），37°C下孵育4小時(shí)，釋放的放射性<0.1%。
6. 功能活性（平末端連接）：50 μL反應(yīng)體系，在1×Fast Ligation Buffer中，加入0.5 µL Fast T4 DNA Ligase，18 μgHaeIII φX174，16°C孵育7.5分鐘。經(jīng)瓊脂糖電泳檢測(cè)，片段連接率>95%。
7. 功能活性（接頭連接）：50 μL反應(yīng)體系，在1×Fast Ligation Buffer中，加入0.125 µL Fast T4 DNA Ligase，8 nmol12 bp接頭，16°C孵育過夜。經(jīng)瓊脂糖電泳檢測(cè)，無(wú)明顯未連接接頭。
Fast Ligation Buffer
1. 16小時(shí)孵育檢測(cè)：50 μL反應(yīng)體系中包含1×Fast Ligation Buffer和1 μg HindIII-λDNA，37°C下孵育16小時(shí)。經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，條帶無(wú)降解；50 μL反應(yīng)體系中包含1×Fast Ligation Buffer和1 μg T3 DNA，37°C下孵育16小時(shí)。經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，條帶無(wú)降解。
2. 核酸內(nèi)切酶活性：50 μL反應(yīng)體系中包含1×Fast Ligation Buffer和1 μg φX174 RF I DNA，37°C下孵育4小時(shí)。經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，RF II轉(zhuǎn)化比率<10%。
3. RNase活性：在1×Fast Ligation Buffer中加入40 ng FAM-RNA，37°C下孵育16小時(shí)。經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)，條帶無(wú)降解。
4. 磷酸酶活性檢測(cè)：在磷酸酶活性檢測(cè)緩沖液中加入1×Fast Ligation Buffer和2.5 mM對(duì)硝基苯磷酸，37°C下孵育4小時(shí)。經(jīng)光譜測(cè)定法檢測(cè)，405 nm處無(wú)對(duì)硝基苯陰離子特征吸收峰。
關(guān)鍵字： 快速DNA連接模塊_DNA連接_磁珠_
上海翊圣生物科技有限公司（Yeasen Biotech Co., Ltd.）成立于2009年，是專注于酶制劑和抗原抗體開發(fā)的高新技術(shù)型企業(yè)，致力于為生命科學(xué)研究領(lǐng)域內(nèi)的科研客戶及精準(zhǔn)醫(yī)療相關(guān)行業(yè)的工業(yè)客戶提供高質(zhì)量的產(chǎn)品和優(yōu)質(zhì)的服務(wù)。
公司現(xiàn)階段建設(shè)有分子、蛋白、細(xì)胞和免疫四大技術(shù)平臺(tái)，涵蓋全面豐富的產(chǎn)品線，包括PCR、qPCR、高保真DNA聚合酶、逆轉(zhuǎn)錄相關(guān)制劑、克隆試劑盒、高通量測(cè)序MaxUP系列DNA和RNA建庫(kù)試劑盒、細(xì)胞培養(yǎng)、支原體檢測(cè)/預(yù)防/去除試劑，以及體外診斷相關(guān)的酶原料、試劑和磁珠等3000多種試劑和試劑盒，服務(wù)于全國(guó)各級(jí)高校、研究所、醫(yī)院、第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)、生物醫(yī)藥公司等2.5萬(wàn)家客戶，助力發(fā)表高質(zhì)量SCI論文1000余篇。
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