化學(xué)名

3-[2,4-dimethyl-5-[(Z)-(2-oxo-1H-indol-3-ylidene)methyl]-1H-pyrrol-3-yl]propanoic acid

簡(jiǎn)稱

TSU-68

別名

SU-6668, Orantinib, SU 6668, SU6668

中文名

N/A

化學(xué)式

C₁₈H₁₈N₂O₃

分子量

310.35

CAS號(hào)

252916-29-3

純度

98%

溶劑/溶解度

Water<1mg/ml; DMSO62mg/ml; Ethanol<1mg/ml

溶液配制

5mg加入1.61ml DMSO，或者每3.1mg加入1ml DMSO，配制成10mM溶液。SF5301-10mM用DMSO配制。

產(chǎn)品描述

TSU-68 (SU6668, Orantinib)有效作用于PDGFR自磷酸化，無(wú)細(xì)胞試驗(yàn)中Ki為8nM，也強(qiáng)效抑制Flk-1和FGFR1反式磷酸化，對(duì)IGF-1R、Met、Src、Lck、Zap70、Abl和CDK2幾乎沒有抑制活性；對(duì)EGFR沒有抑制作用。Phase 3。

信號(hào)通路

Protein Tyrosine Kinase; Angiogenesis

靶點(diǎn)

PDGFRβ

FGFR1

Flk1

－

－

IC50

8nM(Ki)

1.2μM(Ki)

2.1μM(Ki)

－

－

體外研究

TSU-68是ATP競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑，作用于Flk-1/KDR磷酸轉(zhuǎn)移、FGFR1磷酸轉(zhuǎn)移和PDGFRβ激酶時(shí)，Ki分別為2.1μM、1.2μM和8nM。0.03-10μM　TSU-68作用于VEGF刺激的HUVECs，抑制KDR酪氨酸磷酸化。最低濃度為0.03-0.1μM的TSU-68作用于過(guò)量表達(dá)PDGFRβ的NIH-3T3 細(xì)胞，也抑制PDGF刺激的PDGFRβ酪氨酸磷酸化。10μM和更高濃度TSU-68抑制FGF酸性-誘導(dǎo)的FGFR1底物2的磷酸化。然而，高達(dá)100μM TSU-68作用于過(guò)量表達(dá)EGFR的NIH-3T3細(xì)胞，不抑制EGF刺激的EGFR酪氨酸磷酸化。TSU-68抑制VEGF驅(qū)動(dòng)的和FGF驅(qū)動(dòng)的HUVECs分裂，平均IC50分別為0.34和9.6μM。TSU-68作用于人類骨髓性白血病MO7E細(xì)胞，抑制肝細(xì)胞因子(SCF)受體c-kit的酪氨酸自磷酸化，IC50為0.1-1μM，也抑制ERK1/2磷酸化。TSU-68也抑制SCF刺激的MO7E細(xì)胞增殖，IC50為0.29μM，且誘導(dǎo)凋亡。

體內(nèi)研究

TSU-68按75-200mg/kg劑量作用于攜帶多種移植瘤的無(wú)胸腺小鼠，包括A375、Colo205、H460、Calu-6、C6、SF763T和SKOV3TP5細(xì)胞，抑制細(xì)胞生長(zhǎng)。TSU-68按75mg/kg劑量作用于C6神經(jīng)膠細(xì)胞移植瘤，也阻斷腫瘤血管生成。TSU-68按200mg/kg劑量作用于HT29人類結(jié)腸癌腫瘤模型，降低腫瘤邊緣的平均血管通透性和腫瘤中心的平均血漿容積分?jǐn)?shù)。TSU-68促進(jìn)腫瘤周圍形成異?；|(zhì)形成。TSU-68按200mg/kg劑量作用于兔VX2肝臟腫瘤模型，增加注射化學(xué)治療的效果。

臨床實(shí)驗(yàn)

N/A

特征

TSU-68是有效的受體酪氨酸激酶Flk-1/KDR、PDGFRβ和FGFR1抑制劑。

酶活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

方法

測(cè)定Flk-1和FGFR1磷酸轉(zhuǎn)移活性的酪氨酸激酶實(shí)驗(yàn)在預(yù)包被肽底物聚Glu,Tyr(4:1)的96孔板上進(jìn)行，聚Glu,Tyr(4:1)溶于PBS，每孔加20μg，在4℃下溫育過(guò)夜。溶于PBS的1-5% (w/v) BSA阻斷過(guò)量的蛋白質(zhì)結(jié)合位點(diǎn)。純化的GST-FGFR1(激酶域)或GST-Flk-1(胞漿區(qū)) 融合蛋白加到孔中，激酶稀釋buffer濃度為2×，含100mM HEPES，50mM NaCl，40μM NaVO₄和0.02% (w/v) BSA。作用于GST-Flk-1和GST-FGFR1的酶終濃度為50ng/ml。SU6668溶于DMSO，所需的終濃度為100×，且按1:25稀釋在H₂O中。25μl稀釋的SU6668隨后加到每個(gè)反應(yīng)孔中。加入溶于MnCl₂溶液的不同濃度ATP開始激酶反應(yīng)，MnCl₂終濃度為10mM。板在室溫下溫育5-15分鐘，然后加入EDTA終止反應(yīng)。然后用 TBST沖洗板三次。兔多克隆抗磷酸酪氨酸的抗血清加到孔中，用含0.5% (w/v) BSA，0.025% (w/v)脫脂奶粉和100μM NaVO₄的TBST按1：1×10⁴稀釋，然后在37℃下溫育１小時(shí)。用TBST沖洗板三次，隨后加入HRP標(biāo)記山羊抗兔抗血清二抗。板在37℃下溫育1小時(shí)，然后用TBST沖洗三次。加入2,22,2'-azino-di-[3-ethylbenzthiazoline sulfonate]底物后定量檢測(cè)磷酸化酪氨酸。

細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞系

表達(dá)PDGFRβ或EGFR的HUVECs和NIH-3T3細(xì)胞

濃度

0.03-10μM，溶于DMSO，作為10mM儲(chǔ)存溶液

處理時(shí)間

1小時(shí)

方法

細(xì)胞按每35mm孔接種3×10⁵個(gè)細(xì)胞在含10% (v/v) FBS的DMEM培養(yǎng)基上，細(xì)胞生長(zhǎng)融合，然后在含0.1%血清的DMEM培養(yǎng)基上處理2小時(shí)，然后進(jìn)行藥物處理。HUVECs按每10cm板接種2×10⁶個(gè)細(xì)胞在內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基上，細(xì)胞生長(zhǎng)融合，然后在含0.5% FBS的內(nèi)皮細(xì)胞疾病培養(yǎng)基上進(jìn)行24小時(shí)，然后進(jìn)行藥物處理。所有細(xì)胞和SU6668溫育1小時(shí)，然后用100ng/ml配體刺激10分鐘。進(jìn)行Western blotting。

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

動(dòng)物模型

攜帶A375、Colo205、H460、Calu-6、C6、SF763T和SKOV3TP5移植瘤的雌性BALB/c，nu/nu鼠

配制

溶于DMSO

劑量

75-200mg/kg

給藥方式

腹腔注射或口服飼喂，每天一次。

產(chǎn)品編號(hào)

產(chǎn)品名稱

包裝

SF5301-10mM

TSU-68 (VEGFR抑制劑)

10mM×0.2ml

SF5301-5mg

TSU-68 (VEGFR抑制劑)

5mg

SF5301-25mg

TSU-68 (VEGFR抑制劑)

25mg

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說(shuō)明書

1份