描述：MTT四唑藍(lán)是一種能接受氫原子的染料，可直接加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中，被活細(xì)胞的線粒體琥珀酸脫氫酶還原為水不溶性的深紫色結(jié)晶狀產(chǎn)物formazan，但死細(xì)胞不能進(jìn)行此還原反應(yīng)。用特定溶劑可溶解MTT所產(chǎn)生的水不溶性紫色結(jié)晶，然后用酶標(biāo)儀在570 nm波長(zhǎng)附近(500~600 nm)處測(cè)定光吸收值，可反映活細(xì)胞的數(shù)量和代謝活力，并由此反映細(xì)胞的存活、增殖、生長(zhǎng)、和毒性。例如加入細(xì)胞生長(zhǎng)因子后，增殖生長(zhǎng)旺盛的細(xì)胞將還原更多的MTT，并具有較高的光吸收度；反之，抗增殖抗腫瘤或細(xì)胞毒藥物處理后細(xì)胞生長(zhǎng)越慢或毒性越大，則光吸收度越低。也用于檢測(cè)非藥物刺激如物理因素對(duì)細(xì)胞增殖和活力的影響。與3H-胸腺嘧啶摻入方法相比，簡(jiǎn)便快速可靠，不使用放射性同位素，廣泛用于檢測(cè)細(xì)胞存活、增殖、生長(zhǎng)、毒性實(shí)驗(yàn)(1)。

組成與儲(chǔ)存： (500 assay)
1. MTT Stock: 5 ml，−20ºC 12個(gè)月
2. MTT 溶解劑: 50 ml, 室溫保存。

使用方法：
1. 使用與酶標(biāo)儀匹配的96孔培養(yǎng)板。測(cè)定細(xì)胞增殖每孔加100微升2000個(gè)細(xì)胞，測(cè)定細(xì)胞毒性每孔加100微升5000個(gè)細(xì)胞。應(yīng)根據(jù)所用的細(xì)胞類型、增殖速度進(jìn)行調(diào)整。注意設(shè)置3個(gè)重復(fù)孔和無(wú)細(xì)胞培養(yǎng)基對(duì)照。37 ºC培養(yǎng)細(xì)胞至合適的時(shí)間，然后給予特定的藥物或物理因素刺激。
2. 藥物處理結(jié)束后，每孔每100 µl培養(yǎng)基加入10µl MTT Stock，37 ºC培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育4小時(shí)。也可在換100 µl新鮮無(wú)血清培養(yǎng)基后再加入MTT Stock。 
3. (a) 如果細(xì)胞貼壁良好，可吸除培養(yǎng)基，然后每孔加入100µl MTT 溶解劑，此時(shí)應(yīng)注意保持各孔內(nèi)液體容積一致。
(b) 如果細(xì)胞貼壁不佳吸除培養(yǎng)基會(huì)導(dǎo)致MTT生成的結(jié)晶丟失，則直接在孔內(nèi)加入100µl MTT溶解劑，注意此時(shí)測(cè)試孔和對(duì)照空內(nèi)原有的液體積應(yīng)并保持一致。37 ºC培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)孵育4小時(shí)。顯微鏡觀察紫色結(jié)晶狀formazan沉積物應(yīng)全部溶解，這通常需要2~4 h但隨細(xì)胞類型、數(shù)量、活力變化。如未完全溶解應(yīng)延長(zhǎng)孵育時(shí)間。顯微鏡觀察一旦結(jié)晶溶解完畢應(yīng)盡快測(cè)定OD吸光度值。
4. 在570nm測(cè)定OD吸光度并進(jìn)行比較計(jì)算。如無(wú)570nm濾光片可用500-600nm范圍內(nèi)的濾光片。注意：為準(zhǔn)確考慮可在699 nm處測(cè)定未還原的MTT本身的吸光度OD值， 然后用OD570減去OD699。這在進(jìn)行3(b)操作時(shí)尤為必要。

說(shuō)明：
1. 在進(jìn)行培養(yǎng)或檢測(cè)反應(yīng)時(shí)應(yīng)觀察培養(yǎng)基是否蒸發(fā)減少。可用封口膜部分封閉培養(yǎng)板。
2. 微生物污染將導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果不準(zhǔn)確。另外，如果MTT Stock由黃色變灰綠色應(yīng)棄去。MTT Stock預(yù)先稀釋于培養(yǎng)基中配制成工作液，通常在4ºC一周內(nèi)穩(wěn)定。
3. 可在非96孔板進(jìn)行MTT Assay，需要成比例加大反應(yīng)體系。反應(yīng)后用比色杯測(cè)定OD。 
4. 濃度高于10%血清將降低靈敏度。使用不含酚紅的培養(yǎng)基將使靈敏度提高約20%。