細胞名稱：L6 大鼠成肌細胞
組織來源：骨胳?。怀杉〖毎?/p>
培養(yǎng)條件：DMEM +10% FBS
形 態(tài)：貼壁；成肌細胞
背 景：該細胞是Yaffe在甲基膽蒽存在的情況下從大鼠大腿肌原代培養(yǎng)的zui初兩代細胞中分離得到的；在培養(yǎng)基中融合形成多核的肌管和橫紋肌纖維，細胞融合的程度隨著代數(shù)的增加而下降，因此細胞應(yīng)低代次冷凍并周期性地重新克隆以選擇融合能力強的細胞。該細胞應(yīng)在達匯合狀態(tài)前傳代，以延緩細胞分化能力的喪失，如果讓培養(yǎng)容器中的細胞長滿，這株細胞的成肌組分將迅速耗盡。
L6(大鼠成肌細胞)“一代”指從細胞接種到分離再培養(yǎng)的一段期間，與細胞世代或倍增不同。在一代中，細胞培增3～6次。細胞傳代后，一般經(jīng)過三個階段：游離期、指數(shù)增生期和停止期。常用細胞分裂指數(shù)表示細胞增殖的旺盛程度，即細胞群的分裂相數(shù)／100個細胞。一般細胞分裂指數(shù)介于0.2％～0.5％，腫瘤細胞可達3～5％。接種2～3天分裂增殖旺盛，是活力zui好時期，稱指數(shù)增生期(對數(shù)生長期)，適宜進行各種試驗。
formazan結(jié)晶的生成量僅與活L6(大鼠成肌細胞)數(shù)目成正比（死細胞中琥珀酸脫氫酶消失，不能將MTT還原）。還原生成的formazan結(jié)晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸鈉（pH 4.7）的MTT溶解液中溶解，利用酶標儀測定490 nm處的光密度OD值，以反映出活細胞數(shù)目。也可以用DMSO來溶解。MTT粉末和溶液保存時都需要避光，用鋁箔紙包好就可以。實驗的時候一般關(guān)閉超凈臺上的日光燈來避光，覺得這樣比較好。
1.接種：用含10％胎小牛血清得培養(yǎng)液配成單個細胞懸液，以每孔1000－10000個接種到96孔板，每孔體積200ul.
2.L6(大鼠成肌細胞)培養(yǎng)：同一般培養(yǎng)條件，培養(yǎng)3－5天（可根據(jù)試驗?zāi)康暮鸵鬀Q定培養(yǎng)時間）。
3.呈色：培養(yǎng)3－5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS 配)20ul.
繼續(xù)孵育4小時，終止培養(yǎng)，小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液，對于懸浮需要離心后再吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液。每孔加150ul DMSO，振蕩10分鐘，使結(jié)晶物充分融解。
4.比色：選擇490nm波長，在酶聯(lián)免疫監(jiān)測儀上測定各孔光吸收值，記錄結(jié)果，以時間為橫坐標，吸光值為縱坐標繪制L6(大鼠成肌細胞)生長曲線。
關(guān)鍵字： L6 大鼠成肌細胞_大鼠成肌細胞_
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