細胞名稱:RTE 大鼠氣管上皮細胞
培養(yǎng)條件:MEM +20% FBS
形 態(tài):貼壁;多角
RTE(大鼠氣管上皮細胞)“一代”指從細胞接種到分離再培養(yǎng)的一段期間,與細胞世代或倍增不同。在一代中,細胞培增3~6次。細胞傳代后,一般經過三個階段:游離期、指數增生期和停止期。常用細胞分裂指數表示細胞增殖的旺盛程度,即細胞群的分裂相數/100個細胞。一般細胞分裂指數介于0.2%~0.5%,腫瘤細胞可達3~5%。接種2~3天分裂增殖旺盛,是活力zui好時期,稱指數增生期(對數生長期),適宜進行各種試驗。
formazan結晶的生成量僅與活RTE(大鼠氣管上皮細胞)數目成正比(死細胞中琥珀酸脫氫酶消失,不能將MTT還原)。還原生成的formazan結晶可在含50%的N,N-二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸鈉(pH 4.7)的MTT溶解液中溶解,利用酶標儀測定490 nm處的光密度OD值,以反映出活細胞數目。也可以用DMSO來溶解。MTT粉末和溶液保存時都需要避光,用鋁箔紙包好就可以。實驗的時候一般關閉超凈臺上的日光燈來避光,覺得這樣比較好。
1.接種:用含10%胎小牛血清得培養(yǎng)液配成單個細胞懸液,以每孔1000-10000個接種到96孔板,每孔體積200ul.
2.RTE(大鼠氣管上皮細胞)培養(yǎng):同一般培養(yǎng)條件,培養(yǎng)3-5天(可根據試驗目的和要求決定培養(yǎng)時間)。
3.呈色:培養(yǎng)3-5天后,每孔加MTT溶液(5mg/ml用PBS 配)20ul.
繼續(xù)孵育4小時,終止培養(yǎng),小心吸棄孔內培養(yǎng)上清液,對于懸浮需要離心后再吸棄孔內培養(yǎng)上清液。每孔加150ul DMSO,振蕩10分鐘,使結晶物充分融解。
4.比色:選擇490nm波長,在酶聯免疫監(jiān)測儀上測定各孔光吸收值,記錄結果,以時間為橫坐標,吸光值為縱坐標繪制RTE(大鼠氣管上皮細胞)生長曲線。
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