保質(zhì)期：一年
儲(chǔ)存條件：-20℃避光保存
分子式：C11H7N2KO3S2
分子量：318.41
Ex(nm)：328
Em(nm)：533
操作方法
以下方案是鉀鹽和鈉鹽制備的一個(gè)例子，它可以適用于大多數(shù)細(xì)胞類型和體內(nèi)動(dòng)物用途。
1.用于體外生物發(fā)光圖像測(cè)定的實(shí)施方案
1.1在無(wú)菌水中制備100mM(100-200X)熒光素原液、混合均勻，立即使用，或單獨(dú)使用等分試樣，并儲(chǔ)存在-20°℃，避免凍融循環(huán)，避免暴露在光線下。
1.2在預(yù)熱的組織培養(yǎng)基中制備0.5-1mM D-熒光素的工作溶液。
1.3從培養(yǎng)細(xì)胞中分離培養(yǎng)基。
1.4將熒光素工作溶液加入細(xì)胞中，并在成像前將細(xì)胞在37℃孵育5-10分鐘。
2.用于體內(nèi)生物發(fā)光圖像測(cè)定的實(shí)施方案
2.1在DPBS中制備15mg/mL熒光素儲(chǔ)備溶液，不含鎂離子和鈣離子，混合均勻。
2.2過(guò)濾器通過(guò)0.2um過(guò)濾器過(guò)濾滅菌溶液。立即使用，或單獨(dú)使用等分試樣，并儲(chǔ)存在-20℃，避免凍融循環(huán)，避免暴露在光線下。
2.3在動(dòng)物體重150mg/kg(或10uL/g熒光素儲(chǔ)備溶液) 成像***-15分鐘腹膜內(nèi)(i.p.)注射熒光素
注意：應(yīng)對(duì)每種動(dòng)物模型進(jìn)行熒光素的動(dòng)力學(xué)研究，以確定峰值信號(hào)時(shí)間。
3.熒光素報(bào)告分析分子測(cè)定的實(shí)施方案
3.1在無(wú)菌水中制備100mM熒光素儲(chǔ)備溶液。立即使用，或單獨(dú)使用等分試樣，并儲(chǔ)存在-20℃，避免凍融循環(huán)，避免暴露在光線下。
3.2制備1mM D-熒光素的工作溶液，其中含有3mM ATP，1mM DTT和15mM MgSO 4的25mM tricina緩沖液。pH7.8。
3.3將5-10ul細(xì)胞裂解夜移入微孔板中。使用不含裂解液的裂解試劑或緩沖液作為空白。
3.4根據(jù)制造商的說(shuō)明，使用熒光素工作溶液的普利光度計(jì)。
3.5注入200μl熒光素工作溶液，無(wú)延遲，10秒積分時(shí)間。
注意1：D-熒光素鉀鹽溶于無(wú)菌水和緩沖液，溶解度可高達(dá)25mg/mL。一般使用濃度為3-15 mg/mL。溶液的pH值、溶液中的氧氣和保存時(shí)間對(duì)其保存過(guò)程中的穩(wěn)定性非常重要。當(dāng)溶液的pH<6.5(發(fā)生水解作用)或>7.5(發(fā)生消旋化作用，D型轉(zhuǎn)化為L(zhǎng)型)的情況下，D-熒光素鉀鹽相對(duì)不穩(wěn)定。如果溶液中存在少量的氧氣，將加速D-熒光素鉀的降解速度。儲(chǔ)備溶液可以在不含ATP的水中制備，并在-20℃下避光儲(chǔ)存。必須用適當(dāng)?shù)膲A中和游離酸溶解
注意2：D-熒光素可與任何現(xiàn)有的文獻(xiàn)或ATP分析系統(tǒng)一起使用。
注意3：如果檢測(cè)ATP，請(qǐng)戴上手套并使用無(wú)ATP容器，盡量減少所有可能的ATP污染源。只使用無(wú)菌無(wú)ATP水和試劑。使用高壓滅菌水進(jìn)行所有試劑制備。
關(guān)鍵字： 熒光染料;動(dòng)物成像;鉀鹽;
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? ?南京星葉生物曾榮獲2021年“創(chuàng)棲霞”大賽筑夢(mèng)新星組三等獎(jiǎng)，2021年度入選紫金山英才棲霞先鋒計(jì)劃高層次創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)人才項(xiàng)目，2021年度入選紫金山英才先鋒計(jì)劃高層次創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)人才項(xiàng)目。