方法和結(jié)果：洋蔥伯克霍爾德菌 R34 的 2,4-二硝基甲苯雙加氧酶 （DDO） 在 DntAc α 亞基纈氨酸 350 位置發(fā)生突變體 V350F，對(duì)鄰硝基苯酚 （47 倍） 、間硝基苯酚 （34 倍） 和鄰甲氧基苯酚 （174 倍） 的活性顯著增加，以及現(xiàn)在包括 m-甲氧基苯酚的擴(kuò)大底物范圍、鄰甲酚和 m-甲酚 （野生型 DDO 對(duì)這些底物沒(méi)有可檢測(cè)的活性）。另一種突變體 V350M 對(duì)鄰硝基苯酚（20 倍）和鄰甲氧基苯酚（162 倍）的活性也增加，對(duì)鄰甲酚也顯示出新的活性。使用表達(dá)來(lái)自 pBS（Kan）R34 的重組 R34 dntA 基因座的大腸桿菌 TG1 全細(xì)胞合成產(chǎn)物，并通過(guò)反相高壓液相色譜法在 1 mM 底物下測(cè)定產(chǎn)物形成的初始速率。V350F 以 0.75 +/- 0.15 nmol/min/mg 的速率產(chǎn)生硝基氫醌蛋白質(zhì)，以 0.069 +/- 0.001 nmol/min/mg 的速率從鄰硝基苯酚中產(chǎn)生 3-硝基鄰苯酚，以 0.29 +/- 0.02 nmol/min/mg 蛋白質(zhì)的速率從間硝基苯酚中產(chǎn)生 4-硝基鄰苯二酚，以 2.5 +/- 0.6 nmol/min/mg 蛋白質(zhì)的速率產(chǎn)生 3-硝基鄰苯二酚，以 0.29 +/- 0.02 nmol/min/mg 蛋白質(zhì)的速率產(chǎn)生 3-硝基鄰苯二酚，來(lái)自 m-甲氧基苯酚的甲氧基氫醌在 0.55 +/- 0.02 nmol/min/mg 蛋白質(zhì)中，甲基氫醌為 1.52 +/- 0.02 nmol/min/mg 蛋白質(zhì)和 2-羥基苯甲醇為 0.74 +/- 0.05 nmol/min/mg 蛋白質(zhì)（來(lái)自鄰甲酚），甲基氫醌為 0.43 +/- 0.1 nmol/min/mg 蛋白質(zhì)（來(lái)自間甲酚）。V350M 以 0.33 nmol/min/mg 的速率從鄰硝基苯酚中產(chǎn)生硝基氫醌和 0.089 nmol/min/mg 蛋白質(zhì)的 3-硝基鄰苯二酚，以 2.4 nmol/min/mg 蛋白質(zhì)的速率從鄰甲氧基苯酚中產(chǎn)生甲氧基氫醌，以 1.97 nmol/min/mg 的蛋白質(zhì)產(chǎn)生甲基對(duì)苯二酚，以 0.11 nmol/min/mg 的速率從鄰甲酚中產(chǎn)生 2-羥基苯甲醇。DDO 變體 V350F 和 V350M 對(duì)萘（8 +/- 2.6 nmol/min/mg 蛋白質(zhì)）的活性也表現(xiàn)出 10 倍增強(qiáng)的活性，形成 （1R，2S）-順式-1,2-二氫-1,2-二羥基萘。結(jié)論：因此，通過(guò)活性位點(diǎn)工程對(duì)野生型 DDO 的誘變產(chǎn)生了對(duì)以前未表征的一類(lèi)硝基芳烴雙加氧酶取代酚的變體，其速率相對(duì)較高;針對(duì)野生型 DDO 評(píng)估了 7 種先前未表征的底物，并為 DDO 變體 V350F 和 V350M 發(fā)現(xiàn)了 4 種新型單加氧酶樣產(chǎn)物（甲氧基對(duì)苯二酚、甲基對(duì)苯二酚、2-羥基苯甲醇和 3-硝基鄰苯二酚）。
m-甲氧基通常是吸電子 （EW），sigma（m） = +0.12，sigma（m+） = +0.05。苯氧基自由基的 O* 原子的強(qiáng) EW 活性導(dǎo)致 m-甲氧基變成供電子 （ED），σ（m）（+） = -0.14。在價(jià)鍵項(xiàng)下，這可以歸因于非經(jīng)典共振結(jié)構(gòu) 1c-e。盡管人們?cè)缇椭?m-甲氧基在光激發(fā)態(tài)下是 ED，但現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)它是基態(tài) m-甲氧基苯酚中同解 OH 鍵斷裂的 ED。
方法和結(jié)果：通過(guò)測(cè)試底物甲苯、鄰甲酚、間甲酚、對(duì)甲酚、苯酚、萘、鄰甲氧基苯酚、間甲氧基苯酚、對(duì)甲氧基苯酚、鄰二甲苯和硝基苯，發(fā)現(xiàn)這些位置影響芳烴的區(qū)域特異性氧化。例如，與野生型 ToMO 相比，TouA 變體 A101V 從 m-甲氧基苯酚中產(chǎn)生的 3-甲氧基鄰苯二酚多出三倍，并從 o-甲酚中產(chǎn)生甲基對(duì)苯二酚，而野生型 ToMO 則沒(méi)有。同樣，變體 A110C 從甲苯合成的鄰甲酚多 1.8 倍，從間甲氧基苯酚合成的 3-甲氧基鄰苯二酚多 1.8 倍，變體 A110G 從硝基苯合成的鄰硝基苯酚多 1.8 倍，從硝基苯合成的對(duì)硝基苯酚少兩倍。A101V 和 A110C 突變不影響與天然底物甲苯的反應(yīng)速率，因此變體具有高活性。結(jié)論：這是這些或類(lèi)似殘基影響這類(lèi)酶催化的首次報(bào)道。發(fā)現(xiàn)野生型 ToMO 可將鄰甲氧基苯酚氧化成甲氧基氫醌 （60%） 和 4-甲氧基間苯二酚 （40%），將 m-甲氧基苯酚氧化成 4-甲氧基鄰苯二酚 （96%） 和 3-甲氧基鄰苯二酚 （4%），將對(duì)甲氧基苯酚氧化成 4-甲氧基鄰苯二酚 （100%）。
150-19-6是3-甲氧基苯酚（3-Methoxyphenol）的CAS號(hào)，以下是對(duì)3-甲氧基苯酚的詳細(xì)介紹：
CAS號(hào)：150-19-6
中文名稱(chēng)：3-甲氧基苯酚
英文名稱(chēng)：3-Methoxyphenol
別名：間甲氧基苯酚、間苯二酚單甲醚
分子式：C7H8O2
分子量：120.14
外觀：無(wú)色透明到淡黃色液體
熔點(diǎn)：-17°C
沸點(diǎn)：244°C
密度：1.131g/cm3
折射率：1.551~1.553
溶解性：微溶于水，可溶于有機(jī)溶劑
3-甲氧基苯酚是一種重要的有機(jī)合成中間體，具有酚羥基和甲氧基兩個(gè)官能團(tuán)，因此可以參與多種化學(xué)反應(yīng)，如取代反應(yīng)、氧化反應(yīng)、縮合反應(yīng)等。
醫(yī)藥化工原料：3-甲氧基苯酚是合成多種醫(yī)藥和化工產(chǎn)品的關(guān)鍵原料，如可用于合成抗氧化劑、殺菌劑、感光材料等。
有機(jī)合成：在有機(jī)合成領(lǐng)域，3-甲氧基苯酚可用于合成其他具有特定功能的有機(jī)化合物。
3-甲氧基苯酚可以通過(guò)多種方法合成，其中一種常用的方法是以間苯二酚和甲醇為原料，在催化劑存在下進(jìn)行醚化反應(yīng)，得到3-甲氧基苯酚。具體的合成步驟和條件可能因不同的合成方法而有所差異。
危險(xiǎn)性：3-甲氧基苯酚具有刺激性，對(duì)眼睛、呼吸道和皮膚有刺激作用。同時(shí)，它也是一種有害物質(zhì)，吸入、皮膚接觸和不慎吞咽都可能對(duì)人體造成傷害。
安全說(shuō)明：在使用3-甲氧基苯酚時(shí)，需要穿戴合適的防護(hù)服、手套和防護(hù)眼鏡或面罩，以防止其接觸到皮膚和眼睛。如果不慎接觸到皮膚或眼睛，應(yīng)立即用大量清水沖洗，并盡快就醫(yī)診治。此外，還需要將3-甲氧基苯酚儲(chǔ)存在陰涼、通風(fēng)、干燥的地方，遠(yuǎn)離火源和熱源，以防止其發(fā)生危險(xiǎn)。
綜上所述，3-甲氧基苯酚是一種重要的有機(jī)化合物，在醫(yī)藥化工、有機(jī)合成等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用前景。然而，由于其具有刺激性和危害性，在使用時(shí)需要嚴(yán)格遵守安全規(guī)定和操作規(guī)程。
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