產(chǎn)品名稱:人惡性黑色素瘤細胞SK-MEL-28
傳代方法 | 次建議1:2傳代 | 凍存條件 | 無血清凍存液（貨號：C7001） |
細胞描述 | 本庫的細胞僅用于科研工作，未經(jīng)許可不得用于其他目的，使用者不得將本庫細胞轉(zhuǎn)讓給第三者。 |
培養(yǎng)備注 | 用無菌離心管收集瓶子培養(yǎng)基，留作過渡培養(yǎng) |
人惡性黑色素瘤細胞SK-MEL-28收到貨后處理
細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細胞運輸?shù)霓k法。收到細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作，培養(yǎng)箱靜置2-4小時。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，加入6ml完全培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基）
人惡性黑色素瘤細胞SK-MEL-28培養(yǎng)步驟
一、復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?/span>6cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
二、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
a）、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
b）、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi)，嚴(yán)格無菌操作；將小管細胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右完全培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。
三、細胞凍存：（注：無血清凍存液凍存細胞的方法請參考我司官網(wǎng)貨號：C7001）
1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3、用適量的凍存液重懸細胞，并放置于凍存管中；
4、先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃
人惡性黑色素瘤細胞SK-MEL-28部分產(chǎn)品：
YS3461 CCRFS180II 小鼠肉瘤成纖維細胞CCRFS180II
YS3462 351 小鼠雜交瘤細胞抗CD235.1
YS3463 FreestyleCHOS 中國倉鼠卵巢細胞Freestyle CHO-S
YS3464 SH2 小鼠B淋巴細胞白血病SH2
YS3465 H1Hela 人宮頸癌細胞H1 Hela
YS3466 IPECJ2 豬正常的腸上皮細胞IPEC-J2
YS3467 CHO/DHFR 中國倉鼠卵巢細胞CHO/DHFR
YS3468 MEL（MEL745AclDS19） 小鼠紅白血病細胞MEL（MEL-745A cl. DS19）
YS3469 JAWSⅡ 小鼠骨髓（未成熟）樹突狀細胞JAWSⅡ
YS3470 ZFL 斑馬魚肝臟組織細胞ZFL
YS3471 GM12882 人B淋巴細胞GM12882
YS3472 GM01176 人成纖維細胞GM01176
YS3473 GM50142 人B淋巴細胞GM50142
YS3474 GM50113 人B淋巴細胞GM50113
YS3475 GM11404 人B淋巴細胞GM11404
YS3476 GM23465 人B淋巴細胞GM23465
YS3477 GM01359 人成纖維細胞GM01359
YS3478 AG09802 人B淋巴細胞AG09802
YS3479 GM21833 人B淋巴細胞GM21833
YS3480 VK2/E6E7 人陰道粘膜上皮細胞VK2/E6E7
YS3481 GM02008 人成纖維細胞GM02008
YS3482 GM11115 人成纖維細胞GM11115
YS3483 GM13325 人成纖維細胞GM13325
YS3484 GM09326 人成纖維細胞GM09326
YS3485 GM00526 人成纖維細胞GM00526
YS3486 GM50152 人B淋巴細胞GM50152
YS3487 H197/IGFIR 褐家鼠腦海馬體成纖維細胞H19-7/IGF-IR
YS3490 EO771 小鼠髓樣乳腺癌貼壁細胞EO771
YS3491 GM03606 唐氏綜合癥背景羊水來源細胞GM03606
YS3492 BB71 小鼠（骨髓瘤）雜交瘤細胞BB7.1
YS3493 BBM1 小鼠（骨髓瘤）雜交瘤細胞BBM.1
YS3494 L243 小鼠（骨髓瘤）雜交瘤細胞L243
YS3495 4.00E+11 小鼠（骨髓瘤）雜交瘤細胞4E11
YS3496 BB77 小鼠（骨髓瘤）雜交瘤細胞BB7.7
YS3497 IGG6A6 小鼠（骨髓瘤）雜交瘤細胞IGG-6A6
YS3498 93F10 小鼠（骨髓瘤）雜交瘤細胞9.3F10
YS3499 NEGFP4C 小鼠神經(jīng)干細胞NE-GFP-4C
YS3500 GM00325 人成纖維細胞GM00325
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