產(chǎn)品名稱(chēng)：正常人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞NHEK
傳代方法 | 次建議1:2傳代 | 凍存條件 | 無(wú)血清凍存液（貨號(hào)：C7001） |
細(xì)胞描述 | 本庫(kù)的細(xì)胞僅用于科研工作，未經(jīng)許可不得用于其他目的，使用者不得將本庫(kù)細(xì)胞轉(zhuǎn)讓給第三者。 |
培養(yǎng)備注 | 用無(wú)菌離心管收集瓶子培養(yǎng)基，留作過(guò)渡培養(yǎng) |
正常人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞NHEK收到后處理
細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)霓k法。收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后，先打開(kāi)外包裝，用75%酒精噴灑整個(gè)瓶消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作，培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)。鏡下觀察：未超過(guò)80%匯合度時(shí)，可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，加入6ml完全培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過(guò)80%匯合度時(shí)，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見(jiàn)細(xì)胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基）
正常人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞NHEK培養(yǎng)步驟
一、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入6cm皿中），培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
二、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
a）、對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細(xì)胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)液，將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
b）、對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
PS：若客戶收到2ml小管細(xì)胞，收到細(xì)胞后，用75%酒精噴灑整個(gè)管子消毒后放到超凈臺(tái)或安全柜內(nèi)，嚴(yán)格無(wú)菌操作；將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右完全培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度：若密度未超過(guò)80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過(guò)80%，可直接進(jìn)行傳代（方法同上）。
三、細(xì)胞凍存：（注：無(wú)血清凍存液凍存細(xì)胞的方法請(qǐng)參考我司官網(wǎng)貨號(hào)：C7001）
1、細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3、用適量的凍存液重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；
4、先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃
正常人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞NHEK部分相關(guān)細(xì)胞如下：
YS2636 CMECs 大鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞CMECs
YS2637 LA4 鼠肺癌細(xì)胞LA4
YS2638 RAMSCs 大鼠脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞RAMSCs
YS2639 W256 Walker氏癌肉瘤256瘤株W256
YS2640 293C18293E 人胚腎細(xì)胞293C18293E
YS2641 ABE-812 小鼠前B淋巴母細(xì)胞瘤細(xì)胞ABE-8.12
YS2642 HP615 小鼠肺癌細(xì)胞HP615
YS2643 BEND 牛子宮內(nèi)膜上皮細(xì)胞BEND
YS2644 H4IIE 大鼠肝癌細(xì)胞H4IIE
YS2645 L6TG 大鼠肌母細(xì)胞L6TG
YS2646 AMCHN8 人喉癌細(xì)胞AMCHN8
YS2647 HUSMC 人子宮平滑肌細(xì)胞HUSMC
YS2648 IOSE29 人卵巢上皮細(xì)胞IOSE29
YS2649 HemECs 人血管瘤內(nèi)皮細(xì)胞HemECs
YS2650 NHEK 正常人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞NHEK
YS2651 HPMEC 人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞HPMEC
YS2652 BAEC 牛主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞BAEC
YS2653 HConEpic 人結(jié)膜上皮細(xì)胞HConEpic
YS2654 HD11 雞巨噬細(xì)胞HD11
YS2655 RASMC 大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞RASMC
YS2656 KTA7 人肺腺癌細(xì)胞KTA7
YS2657 alphaTC1clone6 鼠胰島素瘤胰島a細(xì)胞alphaTC1clone6
YS2658 RAOEC 大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞RAOEC
YS2659 Walker256 大鼠腹水癌細(xì)胞Walker256
YS2660 HPDLF 人牙周膜成纖維細(xì)胞HPDLF
YS2661 CPAE 牛肺血管內(nèi)皮細(xì)胞CPAE
YS2662 CPA47 牛肺血管內(nèi)皮細(xì)胞CPA47
YS2663 NEC8 人畸胎瘤細(xì)胞NEC8
YS2664 HSAS3 人皮膚成纖維細(xì)胞HSAS3
YS2665 MMVECs 小鼠心肌微血管內(nèi)皮細(xì)胞MMVECs
YS2666 OV2008 人卵巢癌細(xì)胞OV2008
YS2667 JKT1 人精原瘤細(xì)胞JKT1
YS2668 JG 小鼠腎小球旁細(xì)胞JG
YS2669 95C 人肺巨細(xì)胞癌細(xì)胞(低轉(zhuǎn)移)95C
YS2670 697 人前B細(xì)胞白血病細(xì)胞697
YS2671 ML2 人急性髓單核細(xì)胞白血病細(xì)胞ML2
YS2672 WiDr 人結(jié)直腸癌細(xì)胞WiDr
YS2673 MCF12A 人乳腺癌細(xì)胞MCF12A
YS2674 EVSAT 人乳腺癌細(xì)胞EVSAT
YS2675 MDAMB435 人乳腺癌細(xì)胞MDAMB435
YS2676 SW1417 人結(jié)腸癌細(xì)胞SW1417
YS2677 KBM7 人慢性髓白血病細(xì)胞KBM7
YS2678 SUM149PT 人乳腺癌細(xì)胞SUM149PT
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上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月，是一家面向生命科學(xué)領(lǐng)域，提供科研類(lèi)試劑、耗材、儀器、技術(shù)服務(wù)的生物企業(yè)。包括分子生物學(xué)、免疫學(xué)、微生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)等 。旗下?lián)碛?“雅吉生物”、“晶風(fēng)生物”、“彩佑實(shí)業(yè)”、“GTX” 品牌。通過(guò)公司各部門(mén)員工的共同努力在行業(yè)內(nèi)擁有較高知名度，深得新老客戶厚愛(ài)，本著“優(yōu)質(zhì)、服務(wù)、信譽(yù)”的精神，堅(jiān)持以?xún)?yōu)良的技術(shù)、優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、良好的信譽(yù)為國(guó)內(nèi)外廣大用戶提供優(yōu)質(zhì)生物產(chǎn)品和服務(wù)。
公司在重視產(chǎn)品質(zhì)量的同時(shí)，也建立了一套集技術(shù)支持，物流售后服務(wù)等多部門(mén)聯(lián)動(dòng)服務(wù)體系，努力把我們方便、快捷、周到的服務(wù)提供給每一個(gè)客戶，雅吉生物的試劑盒，在國(guó)內(nèi)眾多重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室廣泛使用，深受廣大科研人員好評(píng)，先后在權(quán)威雜志文章中被引用。
本公司鄭重承諾：質(zhì)量保證、供貨及時(shí)、服務(wù)周到。