產(chǎn)品名稱：人表皮細胞/角質(zhì)形成細胞hacat
傳代方法 | 次建議1:2傳代 | 凍存條件 | 人腦髓母細胞瘤細胞DAOY 無血清凍存液（貨號：C7001） |
細胞描述 | 本庫的細胞僅用于科研工作，未經(jīng)許可不得用于其他目的，使用者不得將本庫細胞轉(zhuǎn)讓給第三者。 |
培養(yǎng)備注 | 用無菌離心管收集瓶子培養(yǎng)基，留作過渡培養(yǎng) |
人表皮細胞/角質(zhì)形成細胞hacat處理
細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細胞運輸?shù)霓k法。收到細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內(nèi)，嚴格無菌操作，培養(yǎng)箱靜置2-4小時。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中，加入6ml完全培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng)；超過80%匯合度時，根據(jù)情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。（注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話，放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶里面的完全培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的完全培養(yǎng)基）
人表皮細胞/角質(zhì)形成細胞hacat培養(yǎng)步驟
一、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓毎麘乙杭尤?cm皿中），培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
二、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
a）、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細胞，完全脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
b）、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。
方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。
PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內(nèi)，嚴格無菌操作；將小管細胞轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿，加入5ml左右完全培養(yǎng)基混勻，放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續(xù)培養(yǎng)，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。
三、細胞凍存：（注：無血清凍存液凍存細胞的方法請參考我司官網(wǎng)貨號：C7001）
1、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時，棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細胞一次；
2、添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；
3、用適量的凍存液重懸細胞，并放置于凍存管中；
4、先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃
人表皮細胞/角質(zhì)形成細胞hacat部分相關(guān)細胞如下：
YS1067 Detroit562 人口腔咽頭癌胸水轉(zhuǎn)移細胞Detroit562
YS1068 DLD1 人結(jié)直腸腺癌細胞DLD1
YS1069 DMS53 人小細胞肺癌細胞DMS53
YS1070 DU145 人前列腺癌細胞DU145
YS1071 EAhy926 人臍靜脈細胞融合細胞EA.hy926
YS1072 Eca109 人食管癌細胞Eca109
YS1073 Ect1E6E7BSL1 人宮頸上皮/陰道上皮Ect1E6E7BSL1
YS1074 ECV304 人膀胱癌細胞人臍靜脈內(nèi)皮ECV304
YS1075 ECV304/RFP 人膀胱癌細胞+RFP人臍靜脈內(nèi)皮ECV304/RFP
YS1076 EJ1T24 人膀胱癌細胞EJ1T24
YS1077 ES2 人卵巢透明細胞癌細胞ES2
YS1078 F56 小鼠腺癌細胞系F56
YS1079 FADu 人舌咽鱗癌細胞FADu
YS1080 GBCSD 人膽囊癌細胞GBCSD
YS1081 GBCSD/LUC 人膽囊癌細胞GBCSD/LUC
YS1082 GES1 人胃黏膜上皮細胞GES1
YS1083 GSHEPG2 人肝癌細胞亞型（過表達谷氨酰氨合成酶）GSHEPG2
YS1084 h1 人胚胎干細胞H1h1
YS1085 h9 人胚胎干細胞H9h9
YS1086 H9HTLVIIIB 人T淋巴瘤白血病細胞H9HTLVIIIB
YS1087 hacat 人表皮細胞/角質(zhì)形成細胞hacat
YS1088 hacat/LUC 人表皮細胞/角質(zhì)形成細胞+LUChacat/LUC
YS1089 HBE135E6E7 人支氣管上皮細胞HBE135E6E7
YS1090 HBL100 人整合SV40基因的乳腺上皮細胞HBL100
YS1091 HBVP 人腦血管周細胞（原代）HBVP
YS1092 HCC38 人乳腺導管癌細胞（三陰性）HCC38
YS1093 hcc1937 人乳腺癌細胞（三陰性）hcc1937
YS1094 HCC827 人非小細胞肺癌細胞HCC827
YS1095 HCC827/LUC 人非小細胞肺癌細胞HCC827/LUC
YS1096 HCC94 人子宮鱗癌細胞(高分化)HCC94
YS1097 hccc9810 人膽管細胞型肝癌細胞hccc9810
YS1098 HCCLM3MHCC97 人高轉(zhuǎn)移肝癌細胞HCCLM3MHCC97
YS1099 HCMECD3 人腦微血管內(nèi)皮細胞HCMECD3
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上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月，是一家面向生命科學領(lǐng)域，提供科研類試劑、耗材、儀器、技術(shù)服務(wù)的生物企業(yè)。包括分子生物學、免疫學、微生物學、細胞學等 。旗下?lián)碛?“雅吉生物”、“晶風生物”、“彩佑實業(yè)”、“GTX” 品牌。通過公司各部門員工的共同努力在行業(yè)內(nèi)擁有較高知名度，深得新老客戶厚愛，本著“優(yōu)質(zhì)、服務(wù)、信譽”的精神，堅持以優(yōu)良的技術(shù)、優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品、良好的信譽為國內(nèi)外廣大用戶提供優(yōu)質(zhì)生物產(chǎn)品和服務(wù)。
公司在重視產(chǎn)品質(zhì)量的同時，也建立了一套集技術(shù)支持，物流售后服務(wù)等多部門聯(lián)動服務(wù)體系，努力把我們方便、快捷、周到的服務(wù)提供給每一個客戶，雅吉生物的試劑盒，在國內(nèi)眾多重點實驗室廣泛使用，深受廣大科研人員好評，先后在權(quán)威雜志文章中被引用。
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