中文名：Western及IP細(xì)胞裂解液

英文名：Cell Total Protein Lysate for Western Blotting & Immunoprecipitation

純度：無抑制劑

貨號(hào)：C301898

包裝：100ml

存儲(chǔ)溫度：2-8°C儲(chǔ)存

產(chǎn)品介紹：

產(chǎn)品介紹：

Western及IP細(xì)胞裂解液（Cell Total Protein Lysate for Western Blotting & Immunoprecipitation）是一款較為常用的，針對(duì)免疫沉淀實(shí)驗(yàn)的蛋白裂解液。所采用的提取方法較為溫和，所獲得的蛋白質(zhì)可用于Western Blot、免疫沉淀和免疫共沉淀等。
使用方法：
?(一)貼壁培養(yǎng)細(xì)胞1.取本品置于室溫溶解混勻，根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求加入酶抑制劑。2.去除貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液，用 PBS、NS 或無血清培養(yǎng)液清洗1次，低速離心，棄上清，留取沉淀。3.按照 6 孔板每孔加入150～250μl 含有酶抑制劑的裂解液的比例，加入本品。移液器輕輕吹打，使裂解液和細(xì)胞充分接觸。置于冰上或 4℃裂解，通常裂解液作用于細(xì)胞 1～3s 內(nèi)，細(xì)胞就會(huì)被裂解。通常 6 孔板每孔細(xì)胞加入 150μl 裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到 200～250μl。4.10000～12000g，4℃離心 5～10min(如無低溫離心機(jī)，室溫下離心亦可)，取上清。5.后續(xù)的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。(二)懸浮培養(yǎng)細(xì)胞1.取本品置室溫溶解混勻后，加入酶抑制劑。2.低速離心懸浮細(xì)胞，棄上清，收集沉淀。3.用手指輕彈細(xì)胞，使其松散。按照 6 孔板每孔細(xì)胞加入150～250μl含有酶抑制劑的裂解液的比例，加入本品。通常 6 孔板每孔細(xì)胞加入 150μl 裂解液已經(jīng)足夠，但如果細(xì)胞密度非常高可以適當(dāng)加大裂解液的用量到 200～250μl。再用手指輕彈以充分裂解細(xì)胞，充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細(xì)、胞沉淀。4.10000～12000g，4℃離心 5～10min(如無低溫離心機(jī)，室溫下離心亦可)，取上清。5進(jìn)行后續(xù)的 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。(三)組織樣本1.取本品置于室溫溶解混勻后，加入酶抑制劑。2.把組織剪切成細(xì)小的碎片，越小越好。3.取在液氮或超低溫冰箱中冷凍 30min 以上的組織，迅速用液氮研磨，研磨過程盡量控制在1～2min 之內(nèi)，以減少蛋白的降解。4.按照每 20mg 組織加入 150～250μl 裂解液的比例，加入含有酶抑制劑的裂解液。冰上或4℃裂解 15～30min。5.步驟 3、4 亦可以采用如下過程：按照每 20mg 組織加入 150～250μl 裂解液的比例加入含有酶抑制劑的本品。用玻璃勻漿器或組織研磨器勻漿，直至充分裂解，該過程盡量控制在 1～2min 之內(nèi)，以減少蛋白的降解。6.10000～12000g，4℃離心 5～10min(如無低溫離心機(jī)，室溫下離心亦可)，取上清。7.進(jìn)行后續(xù)的 PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。注意事項(xiàng) 1.去除貼壁細(xì)胞的培養(yǎng)液后，如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不用清洗。2.如果裂解不充分可以適當(dāng)增加裂解液的用量，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當(dāng)減少裂解液的用量。3.如果細(xì)胞量較多，必需分裝成 50～100 萬細(xì)胞/離心管，然后再裂解。大團(tuán)的細(xì)胞較難裂解充分，而少量的細(xì)胞由于裂解液容易和細(xì)胞充分接觸，相對(duì)比較容易裂解充分。4.如果組織樣品本身非常細(xì)小，可以適當(dāng)剪切后直接加入裂解液裂解，通過強(qiáng)烈 Vorte× 使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。直接裂解的優(yōu)點(diǎn)是比較方便，不必使用勻漿器，缺點(diǎn)是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。5.在低溫情況下有可能出現(xiàn)渾濁現(xiàn)象，可 37℃水浴促其溶解，不會(huì)影響使用效果；溶解時(shí)間不易過長，避免有效成分失效。6.裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物，屬正?，F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組 DNA 等的復(fù)合物。在不檢測(cè)和基因組 DNA 結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)；如果需要檢測(cè)和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。7.細(xì)胞裂解的操作步驟，應(yīng)置于冰上或 4℃進(jìn)行。
使用范圍：
適用于一般生物學(xué)及醫(yī)學(xué)研究

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