Cell Counting Kit-8（CCK-8）細胞增殖試劑盒

儲存條件：4℃避光保存，長期儲存置于-20℃，有效期見外包裝。

產(chǎn)品介紹：

Cell Counting Kit-8簡稱CCK8（或WST-8）試劑盒，是一種基于WST-8（化學名：2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4- 二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽）顯色反應的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快速高靈敏度檢測試劑盒。 

WST-8 工作原理：在電子耦合試劑存在的條件下，可以被線粒體內(nèi)的脫氫酶還原生成高度水溶性的橙黃色的甲臜產(chǎn)物 （formazan）。顏色的深淺與細胞的增殖成正比，與細胞毒性成反比。使用酶標儀在 450 nm 波長處測定 OD 值，間接反映 活細胞數(shù)量。 

WST-8 是 MTT 的一種升級替代產(chǎn)品，和 MTT 或其它 MTT 類似產(chǎn)品如 XTT、MTS 等相比有明顯的優(yōu)點。首先，MTT 被線粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成的甲臜不是水溶性的，需要有特定的溶解液來溶解；而 WST-8、XTT 和 MTS 產(chǎn)生的甲臜 都是水溶性的，可以省去后續(xù)的溶解步驟。其次，WST-8 產(chǎn)生的甲臜比 XTT 和 MTS 產(chǎn)生的甲臜更易溶解。再次，WST-8 比 XTT 和 MTS 更加穩(wěn)定，使實驗結果更加穩(wěn)定。另外，WST-8 與 MTT、XTT 相比線性范圍更寬，靈敏度更高。 

CCK 法廣泛應用于藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗以及生物因子的活性檢測等方面。

使用方法：

1. 細胞活性檢測

（1）在 96 孔板中接種細胞懸液（100 μL/孔），建議可以設置 8 個細胞濃度梯度，每個濃度設置 6 個重復進行細胞鋪板， 例如按照細胞個數(shù) 0/312.5/625/1250/2500/5000/10000/20000 cells/96 孔板進行鋪板。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜（37℃, 5% CO2）。

（2）向每孔加入 10 μL CCK 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響 OD 值的讀數(shù)）。 注：如產(chǎn)品有析出，可 37℃水浴處理，不影響使用。 

（3）將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 0.5 - 4 h。 注：初次實驗可以在 0.5、1、2 和 4 h 后分別用酶標儀檢測，然后選取吸光度范圍比較適宜的一個時間點用于后續(xù)實驗。 

（4）用酶標儀測定在 450 nm 和 600 nm（消除孔板本底干擾）處的吸光度。 （5）若暫時不測定 OD 值，可以向每孔中加入 10 μL 0.1 M 的 HCl 溶液或者 1% w/v SDS 溶液，并將培養(yǎng)板在室溫條件下避 光保存。24 h 內(nèi)測定，吸光度不會發(fā)生變化。

示例：

圖 1. CCK 8 檢測 HeLa 細胞活性

2. 細胞增殖-毒性檢測

（1）在 96 孔板中接種 100 μL 的細胞懸液，建議可以設置 8 個細胞濃度梯度，每個濃度設置 6 個重復進行細胞鋪板，例如 按照細胞個數(shù) 0/312.5/625/1250/2500/5000/10000/20000 cells/96 孔板進行鋪板。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜（37℃, 5% CO2）

（2）向培養(yǎng)板加入 1 - 10 μL 特定的藥物刺激。 

（3）于培養(yǎng)箱中孵育一段時間（例如：6、12、24 或 48 h）。

（4）向每孔加入 10 μL CCK 溶液（注意不要在孔中生成氣泡，它們會影響 OD 值的讀數(shù)）。 注：如產(chǎn)品有析出，可 37℃水浴處理，不影響使用。

（5）將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 0.5 – 4 h。 注：初次實驗可以在 0.5、1、2 和 4 h 后分別用酶標儀檢測，然后選取吸光度范圍比較適宜的一個時間點用于后續(xù)實驗。

（6）用酶標儀測定在 450 nm 和 600 nm（消除孔板本底干擾）處的吸光度。

（7）若暫時不測定 OD 值，可以向每孔中加入 10 μL 0.1 M 的 HCl 溶液或者 1% w/v SDS 溶液，并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室 溫條件下。24 h 內(nèi)測定，吸光度不會發(fā)生變化。

注：如果待測物質(zhì)有氧化性或還原性的話，可在加 CCK 之前更換新鮮培養(yǎng)基（除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次，然 后加入新的培養(yǎng)基），去掉藥物影響。當然藥物影響比較小的情況下，可以不更換培養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入藥物后的 空白吸收即可。

3. 計算公式

細胞存活率=[(As-Ab)/(Ac-Ab)]x100% 抑制率 =[(Ac-As)/(Ac-Ab)]x100% As:實驗孔(含有細胞的培養(yǎng)基、CCK-8、待測藥物)的吸光度 Ac:對照孔(含有細胞的培養(yǎng)基、CCK-8、沒有待測藥物)的吸光度 Ab:空白孔(不含細胞和待測藥物的培養(yǎng)基、CCK-8)的吸光度

注意事項

1. 使用前請將產(chǎn)品瞬時離心至管底，再進行后續(xù)實驗。

2. 使用96孔進行細胞鋪板，如果培養(yǎng)時間較長， 一定要注意蒸發(fā)問題。建議采取棄用周圍一圈的辦法，改加相同量的PBS、 水或者培養(yǎng)液。 

3. 用酶標儀檢測前需確保每個孔內(nèi)沒有氣泡，否則會干擾測定。 

4. 本產(chǎn)品僅限于科研，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品，不得存放于普通住宅內(nèi)。 

5. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。