腔腸素-H Coelenterazine H
分子式:C26H21N3O2 分子量:407.46
簡(jiǎn)介:腔腸素(Coelenterazine)是自然界中資源最豐富的天然熒光素,是絕大多數(shù)海洋發(fā)光生物(超過(guò)75%)的光能貯存分子。腔腸素可作為許多熒光素酶的底物,比如海腎熒光素酶(Rluc),Gaussia分泌型熒光素酶(Gluc),以及包括水母發(fā)光蛋白(aequorin)和藪枝螅發(fā)光蛋白(Obelia)在內(nèi)的光蛋白(Photoproteins)。其發(fā)光原理是:以腔腸素為底物的熒光素酶在有分子氧的條件下,氧化腔腸素,產(chǎn)生高能量的中間產(chǎn)物,并在此過(guò)程中發(fā)射藍(lán)色光,峰值發(fā)射波長(zhǎng)約為450~480nm。與甲蟲(chóng)(或螢火蟲(chóng))熒光素/熒光素酶系統(tǒng)不同,腔腸素/熒光素酶系統(tǒng)不需要三磷酸腺苷(ATP),因此更便于體內(nèi)生物熒光的研究。我司腔腸素-H經(jīng)過(guò)核磁結(jié)構(gòu)驗(yàn)證,并在體外進(jìn)行生物發(fā)光強(qiáng)度檢測(cè),其發(fā)光強(qiáng)度高,和進(jìn)口對(duì)照品牌效果相媲美。
物理性狀及指標(biāo):
激發(fā)波長(zhǎng)(nm):……………………437
發(fā)射波長(zhǎng)(nm):……………………466
儲(chǔ)存條件:-20℃,避光防潮密閉干燥, 保存在惰性氣體下以避免接觸空氣。
運(yùn)輸條件:濕冰運(yùn)輸
應(yīng)用方向:
1、腔腸素常用作基于熒光分析的報(bào)告基因檢測(cè)以及活體動(dòng)物檢測(cè)的發(fā)光底物;
2、腔腸素還能在酶非依賴性的氧化體系中自發(fā)熒光,細(xì)胞和組織內(nèi)的超氧陰離子和過(guò)氧化亞硝基陰離子能夠增強(qiáng)該自發(fā)光信號(hào),因此其也可用來(lái)檢測(cè)細(xì)胞/組織內(nèi)活性氧(ROS)水平。
3、更為重要的一個(gè)功能,水母發(fā)光蛋白復(fù)合物(Aequorin)由22kDa的水母蛋白(Apoaequorin protein)、分子氧和底物腔腸素組成。只有當(dāng)鈣離子(Ca2+)與該復(fù)合物結(jié)合后,腔腸素才能被氧化生成高能量產(chǎn)物Coelenteramide,同時(shí)釋放出CO2和藍(lán)色熒光(~466 nm)。正是此Ca2+依賴性的反應(yīng)過(guò)程,使得腔腸素非常適用于監(jiān)測(cè)活細(xì)胞內(nèi)鈣離子水平。
使用方法(僅供參考):
腔腸素溶解特性:腔腸素及所有衍生物溶于乙醇或者甲醇,切忌溶于DMSO。腔腸素的水溶性相當(dāng)?shù)停话闱闆r需用乙醇等配置成母液后再用水溶性緩沖液稀釋到需要的工作液,現(xiàn)配現(xiàn)用。
腔腸素母液的配制:4mg加入2ml無(wú)水乙醇配制成5mM(相當(dāng)于2mg/ml)母液,避光備用。對(duì)于所有進(jìn)行熒光信號(hào)檢測(cè)的試驗(yàn)建議溶液現(xiàn)用現(xiàn)配。不建議將腔腸素的乙醇母液放到-20℃或者更低溫度保存,因?yàn)槠涓吣芰康亩醐h(huán)丁酮結(jié)構(gòu)即使在低溫的情況下也會(huì)瞬時(shí)降解,導(dǎo)致熒光強(qiáng)度明顯變?nèi)酢?/p>
腔腸素工作液的配制:可直接用PBS或者其他類型生理緩沖液稀釋?,F(xiàn)配現(xiàn)用??芍苯佑貌缓?span style="border-style: none;border-color: inherit;border-width: 0px;padding: 0px;list-style-type: none;margin-left: 0px;margin-top: 0px;margin-bottom: 0px">Ca2+/Mg2+的PBS緩沖液將儲(chǔ)存液稀釋到實(shí)驗(yàn)所需的工作液濃度,4°C避光短暫存放。若是體外實(shí)驗(yàn),需要使用前室溫平衡15-20min。
【注意】
●我司產(chǎn)品為非無(wú)菌包裝,若用于細(xì)胞培養(yǎng),請(qǐng)?zhí)崆白鲱A(yù)處理,除去熱原細(xì)菌,否則會(huì)導(dǎo)致染菌。
●腔腸素H的干燥粉末在密封狀態(tài)下較穩(wěn)定,可避光保存于-20℃或更低溫度??赏ㄟ^(guò)在管內(nèi)充入惰性氣體(氮?dú)饣驓鍤猓┓乐蛊溲趸?/p>
●當(dāng)使用多孔板進(jìn)行熒光值的檢測(cè)時(shí),建議通過(guò)設(shè)置對(duì)照孔來(lái)消除由于腔腸素在工作液中不斷被氧化所帶來(lái)的誤差。
●不同種類的熒光素酶存在很大的區(qū)別。如腔腸素H可作為海腎熒光素酶的底物,但對(duì)于Gaussia熒光素酶是無(wú)效的。
●部分產(chǎn)品我司僅能提供部分信息,我司不保證所提供信息的權(quán)威性,以上數(shù)據(jù)僅供參考交流研究之用。
關(guān)鍵字: 腔腸素-H;鈣離子熒光探針腔腸素 h;
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