CHO-K1細胞系：

親代 CHO 細胞系的亞克隆，來自成年中國倉鼠的卵巢。由于缺乏脯氨酸合成基因，細胞需要脯氨酸，生物合成鏈中的障礙在于將谷氨酸轉化為谷氨酰胺γ絲醛的步驟。它們會因霍亂毒素而發(fā)生形態(tài)變化。

應用：營養(yǎng)和基因表達研究倉鼠的 CHO-K1 細胞系已用于通過慶大霉素保護試驗研究質粒 pCM01 誘導對細菌與 CHO-K1 細胞結合的影響。它還可以在有或沒有乳酸的情況下培養(yǎng)，以測量細胞增殖的時間序列。

CHO表達的優(yōu)勢：

--CHO 細胞在復雜蛋白質的蛋白質折疊方面表現(xiàn)出色，具有準確的轉錄后修飾功能，表達的蛋白在分子結構、理化特性和生物學功能方面最接近于天然蛋白分子

--CHO 細胞可以在無血清細胞培養(yǎng)基中生長良好，消除了血清作為傳染源的潛在來源，提供了更高的安全性

--既可貼壁生長，又可以懸浮培養(yǎng)，且有較高的耐受剪切力和滲透壓能力

--具有重組基因的高效擴增和表達能力，外源蛋白的整合穩(wěn)定

--CHO 細胞的蛋白質產量很高——通常可以達到2 – 6 g/L

--無血清培養(yǎng)基中的 CHO 細胞可輕松進行下游加工

--CHO 細胞可以瞬時或穩(wěn)定轉染以表達蛋白質

--在單克隆抗體的情況下，中國倉鼠卵巢 (CHO) 和 NS0 (小鼠骨髓瘤) 細胞是最常用的細胞系

GS系統(tǒng)工作原理：

圖1顯示了 GS 酶如何催化谷氨酸和氨生成谷氨酰胺，從而使細胞能夠復制。

當 CHO 細胞中的蛋白質表達系統(tǒng)有 GS 缺失時，研究人員用重組 DNA轉染CHO 細胞，該 DNA 由與 GS 基因密切相關的目的基因組成。甲硫氨酸亞砜胺 (MSX) 選擇系統(tǒng)用于選擇產生目標蛋白質的 CHO 細胞。 MSX 是一種類似于谷氨酸的藥物，可與 GS 結合，從而抑制谷氨酰胺的產生，而谷氨酰胺是細胞生長所必需的。在基因擴增過程中，CHO 細胞在高水平的 MSX 中培養(yǎng)。選擇具有目標基因的 GS 基因拷貝數(shù)增加的 CHO 細胞。GS 水平不足的 CHO 細胞會死亡。一旦選定，來自 CHO GS 陰性宿主的轉染細胞系不需要培養(yǎng)基中的 MSX。

圖1  GS 酶催化谷氨酸和氨生成谷氨酰胺

艾普蒂生物根據(jù)客戶不同表達系統(tǒng)的選擇，為客戶提供需要插入配套的穩(wěn)轉細胞系構建的表達載體，也為客戶提供表達載體定制的服務。

表達系統(tǒng)的選擇：

DHFR 系統(tǒng)用于 CHO 細胞，其中突變型 CHO dhfr細胞系用含有靶基因和dhfr的載體轉染標記基因。選擇發(fā)生在不含次黃嘌呤、甘氨酸和胸苷的培養(yǎng)基中。同時，由于 MTX 能夠抑制 DHFR 酶，因此逐漸增加甲氨蝶呤 (MTX) 濃度以放大蛋白質產物的表達。GS 系統(tǒng)已用于 NS0 和 CHO細胞系，其中細胞用除 GS 基因外還含有目的基因的載體轉染。擁有GS基因的細胞可以合成自己的細胞內谷氨酰胺；因此，這些細胞可以在添加谷氨酸和天冬酰胺提供的氨基團的無谷氨酰胺培養(yǎng)基中培養(yǎng)。

與 DHFR 系統(tǒng)相比，GS 選擇系統(tǒng)的一個優(yōu)點是細胞培養(yǎng)物產生的氨較少，這會對重組蛋白的糖基化產生負面影響；此外，GS 系統(tǒng)通常提供較短的選擇周期，因為該系統(tǒng)需要較低的基因拷貝數(shù)來實現(xiàn)類似的擴增轉基因表達水平。

GS-CHO系統(tǒng)的表達載體：

此外，瑾萱的科學家可根據(jù)客戶的項目需求為您定制表達質粒，詳情請與艾普蒂生物的工作人員聯(lián)系。

客戶提供：

服務優(yōu)勢：

--密碼子優(yōu)化：包含稀有密碼子分析，蛋白親水性分析和跨膜結構域的預測分析

--多種融合標簽載體和宿主，以保證高可溶蛋白表達和高蛋白活性

--高活性表達：實現(xiàn)復雜的糖基化修飾和磷酸化修飾，具有完整的空間結構特征

--多重表達模式：穩(wěn)定表達和瞬時表達

--低內毒素水平：LAL檢測法<0.1EU/ug

--完整的GMP文件支撐體系，保證您的產品所有材料、試劑和制備信息可追溯

更多技術服務：

高爾基染色（神經纖維染色）服務

剛果紅染色服務

油紅O染色服務

瑞氏染色服務

姬姆薩染色服務

瑞氏-吉姆薩復合染色服務

ALP堿性磷酸酶染色（NAP偶氮偶聯(lián)法)服務

ALP酸性磷酸酶染色（ACP）(改良Gomori鈣鈷法)）服務

番紅-固綠染色（軟骨）服務

甲苯胺藍染色/toluidine blue染色服務

普魯士藍染色/鐵染色服務

TTC染色（梗死面積檢測方法）服務

β-半乳糖苷酶染色服務

Trichrome masson goldner 染色/Goldner三色法染色/Villanueva-Goldner染色服務

ATPase染色/ATP酶鈣鈷法染色/腺苷三磷酸酶染色服務

基底膜六胺銀染色（PASM）服務

抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色服務

纖維素染色(改良 MSB 法)服務

Van Gieson染色/VG染色/VCG染色 （纖維組織）服務

亞甲基藍堿性品紅染色服務

吖啶橙(Acridine Orange, AO)染色服務

細胞自噬MDC單獨染色服務

鈣黃綠素染色服務

尼羅紅染色（動物）服務

免疫組化染色累積光密度值（IOD）分析服務

免疫組化染色平均光密度值（MOD）分析服務

電鏡-超微病理分析服務

電鏡-測量分析服務

電鏡-統(tǒng)計分析服務

微血管定量計數(shù)微血管密度（MVD）分析費服務

HE病理分析--病理描述類服務

HE病理分析--病理評分類服務

HE病理分析--病理描述+評分類服務

病理形態(tài)測量分析服務

膠原纖維面積百分比服務

芯片組化掃描結果分析服務

免疫熒光陽性結果分析服務

細胞相關檢測服務

項目名稱服務

細胞復蘇服務

細胞培養(yǎng)/代養(yǎng)細胞（一類培養(yǎng)基）服務

裸鼠成瘤細胞培養(yǎng)費用服務

細胞增殖：MTT/CCK8檢測（96T）服務

凋亡檢測服務

AnnexinV-FITC/PI凋亡檢測試劑盒服務

AnnexinV-PE/7 AAD凋亡檢測試劑盒（細胞轉染帶綠色熒光用此試劑盒）服務

流式細胞周期檢測服務

PI/Rnase Staining Buffer Solution服務

流式表面抗原鑒定上機（單標）服務

流式表面抗原鑒定單標/流式單標檢測服務

流式表面抗原鑒定雙標/流式雙標檢測服務

流式表面抗原鑒定三標/流式三標檢測服務

流式表面抗原鑒定四標/流式四標檢測服務

流式檢測細胞吞噬FITC-dextran服務

外周血淋巴細胞分離（2ml血液算1個樣本）服務

大鼠/小鼠脾臟淋巴細胞分離服務

外周血血小板分離（2ml血液算1個樣本）服務

外周血單核細胞PBMC分離費用服務

組織單細胞懸液制備費用服務

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細胞刺激-活化-破膜費服務

ROS活性氧檢測（綠光）服務

ROS活性氧檢測（紅光）服務

JC-1/線粒體膜電位流式檢測服務

軟瓊脂集落形成實驗服務

平板克隆形成服務

細胞劃痕服務

成管實驗/體外血管生成實驗服務

Transwell遷移服務

Transwell侵襲服務

細胞成球實驗服務

細胞粘附實驗服務

臺盼藍染色服務

細胞BrdU染色(IHC法）服務

細胞BrdU染色（ICF法）服務