PKH26熒光細胞連接試劑盒采用采用本公司專利膜標記技術，能夠?qū)в休^長脂質(zhì)尾巴的黃色-橙色熒光染料結(jié)合到細胞膜脂質(zhì)區(qū)域上。染色方式依賴于細胞與膜的類型，主要用于細胞體外標記、體外細胞增殖研究及體內(nèi)外細胞示蹤研究。試劑盒中提供染色過程中所需的溶劑（稀釋液C），該溶劑可以可以在染色過程中，增加染料溶解度和染色效率，同時維持細胞活力。稀釋液C與哺乳動物細胞等滲，且不含去垢劑或有機溶劑，也不含生理鹽水和緩沖鹽。根據(jù)細胞類型及標記后細胞膜內(nèi)在的變化，標記后的細胞表面會由均一透亮變得有點狀凸起或補丁狀。但在生理范圍內(nèi)，PKH26熒光不受pH的影響，每個細胞的熒光強度與染料標記位置無關。

PKH26熒光在黃色-橙色區(qū)域（λex=551 nm,  λem=567 nm），可用來標記追蹤體內(nèi)外多種細胞。在細胞毒性分析，熒光蛋白、抗體或DNA染料在該區(qū)域發(fā)出的紫色、綠色、紅色和遠紅外等，不會與PKH26產(chǎn)生干擾。PKH26最常被用于基于染料稀釋增殖的分析的染料稀釋應用，包括建立抗原特異性前體頻譜和正常或腫瘤組織中靜止或緩慢干細胞或祖細胞的鑒定。同時PKH26也可用于監(jiān)測外來病毒、血小板和其他納米顆粒的攝入；干細胞分裂過程中膜的分配；細胞-細胞之間膜的轉(zhuǎn)移；細胞吞噬作用；抗原呈遞；粘附；通過間隙連接的信號傳遞；以及組織切片中的神經(jīng)元遷移。PKH26熒光穩(wěn)定性很強，特別是標記的細胞的研究周期超過一周時PKH26被用于體內(nèi)細胞追蹤研究。

注意事項：

● 染料的工作液隨用隨配，不要將配好的染料貯存，影響染?效果。

●PKH26染色過程中，不能存在疊氮化物或代謝毒性物。

●雖然貼壁細胞也可以染色，但為獲得均勻染色，單細胞懸液。因此用蛋白酶（trypsin/EDTA）將貼壁細胞消化成單個懸浮細胞后再染色效果更佳。

●染色前去除血清和脂質(zhì)以提高染色效果。

●鹽的存在會導致染料形成顆粒，干擾染色反應。因此，加染料前細胞重新懸置是很重要的。染料應直接加到細胞懸液中，而不是加到細胞團上。

● 過度的細胞標記將導致膜完整性喪失、細胞數(shù)量下降。本樣品細胞和染料濃度是參照濃度適合大部分細胞，但染料/細胞由使用者根據(jù)細胞類型和實驗目的決定，另外使用者還要評估細胞的生存力（排碘），熒光強度，熒光峰值的變異系數(shù)，染色的均勻性。

● 染?濃度根據(jù)細胞種類的不同和每孔內(nèi)細胞數(shù)量的多少?異。不同的細胞種類標記后可以?蹤的代次或時間差異較?，請根據(jù)實際情況或參考?獻進?檢測。

操作注意：快速均勻的混合對標記非常重要，為獲得效果應采取下述措施：
1） 混合時細胞懸液和工作染液應等量；
2） 避免染太多(>5ml)或太少（<100ul）的液體。避免用沾血清的移液管加染料；
3） 液體量應盡可能精確以保證細胞和染料濃度被精確復制。
4）染料和稀釋液作用于細胞的時間盡量短，有一定毒性?？捎孟♂屢喊瓷鲜霾襟E作用于細胞看其受損程度。
5） 加等量血清終止反應，在終止染色反應前別離心稀釋液C中的細胞，清洗時用含血清培養(yǎng)基可增加清洗效果。
6） 細胞應單獨移至新試管中離心，清洗3次時不用稀釋液C而用培養(yǎng)基。
7） 可用于體外干細胞、淋巴細胞、單核細胞、內(nèi)皮細胞等的標記較理想。
8） 全細胞標記應先于單抗染色的標記，當4℃單抗染色時細胞跟蹤探針將保持穩(wěn)定；如后于單抗染色的標記，很可能出現(xiàn)“蓋帽”現(xiàn)象。
9） 染色細胞用2%多聚甲醛固定穩(wěn)定性達3w以上。

所需材料：

均勻的單細胞懸液；含血清培養(yǎng)基；無血清培養(yǎng)基或不含Ca2+Mg2+的PBS液；血清、白蛋白或與培養(yǎng)基兼容的蛋白源；聚丙烯錐形離心管；溫度可控的離心機（0-1000g）；熒光分析儀（熒光計，熒光顯微鏡，流式細胞儀，熒光圖象分析儀）；超凈臺；細胞計數(shù)儀；載玻片。

操作步驟：