產(chǎn)品概述

　　BstLDNA聚合酶是在野生型BacillusstearothermophilusDNA聚合酶I大片段（BstDNA聚合酶大片段）的基礎(chǔ)上，通過定向進(jìn)化、理性設(shè)計、半理性設(shè)計等多輪分子改造進(jìn)化而來，相比于野生型BstDNA聚合酶大片段，BstLDNA聚合酶顯著提升了擴增速度、

　　產(chǎn)量、耐鹽性和熱穩(wěn)定性等性能。BstLDNA聚合酶具有5′→3′的聚合酶活性和強鏈置換活性，但沒有5′→3′核酸外切酶活性。使用本產(chǎn)品能夠大幅度提升環(huán)介導(dǎo)等溫擴增（LAMP）體系的性能。

　　注：BstLDNA聚合酶的貯存液為：10mMTris-HC（lpH7.1）,50mMKCl,0.1mMEDTA,1mMDTT,0.1%TritonX-100,50%甘油。

　　應(yīng)用

　　1）用于LAMP等溫擴增體系檢測靶標(biāo)DNA；

　　2）與瀚海RTL逆轉(zhuǎn)錄酶產(chǎn)品聯(lián)合使用，進(jìn)行RT-LAMP等溫擴增檢測靶標(biāo)RNA。

　　運輸與保存方法

　　0℃以下運輸，-20℃保存。避免反復(fù)凍融，產(chǎn)品有效期18個月。

　　活力定義

　　65℃,30min內(nèi)使10nmol的dNTP摻入酸不溶性沉淀物所需要的酶量，定義為1個活性單位(U)。

　　質(zhì)量控制

　　核酸內(nèi)切酶殘留檢測：基于HHBstL反應(yīng)緩沖液配制50μL反應(yīng)體系，其中包含1μg的pUC19DNA和500U本酶，在37℃下孵育4小時，由瓊脂糖凝膠電泳檢測，pUC19DNA電泳條帶沒有明顯變化。

　　核酸外切酶殘留檢測：基于HHBstL反應(yīng)緩沖液配制50μL反應(yīng)體系，其中包含1μg的Lambda-HindIIIDNA和500U的本酶，在37℃下孵育4小時，由瓊脂糖凝膠電泳檢測，電泳條帶沒有明顯變化。

　　RNase殘留檢測：基于HHBstL反應(yīng)緩沖液配制10μL反應(yīng)體系，其中包含40ng的MS2RNA(3500nt)和8U本酶，在37℃下孵育16小時，由瓊脂糖凝膠電泳檢測，電泳條帶沒有明顯變化。

　　大腸桿菌DNA殘留檢測：120U本酶中殘留的核酸經(jīng)E.coligDNA特異性的TaqManqPCR檢測，E.coli基因組殘留低于1拷貝。

　　實驗流程

　　1）將10×HHBstLBuffer取出，冰上解凍，使用前渦旋10s混勻，并短暫離心。

　　2）除模板DNA外，其余組分按下表順序配制反應(yīng)混合液。

　　3）用移液器吹打混勻，并短暫離心。

　　4）60-65°C恒溫孵育1h，觀察擴增產(chǎn)物。

　　注意事項

　　1）10×HHBstLBuffer可以室溫融化，融化后宜存放于冰盒內(nèi)或冰浴上，使用完畢后應(yīng)立即置于-20℃保存。

　　2）如果用本產(chǎn)品進(jìn)行核酸檢測，應(yīng)當(dāng)謹(jǐn)防擴增產(chǎn)物DNA造成的氣溶膠污染，建議在PCR操作間中操作；擴增后的陽性樣本不建議開蓋，建議置于密閉塑料容器后丟棄。

　　3）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。