三羥甲基氨基甲烷廣泛應(yīng)用于急性代謝性及呼吸性酸血癥,是一種堿性緩沖劑,對(duì)代謝酸中毒和酶活動(dòng)反應(yīng)具有良好的緩沖作用。Tris常用作生物緩沖液,常配成pH值為6.8,7.4,8.0,8.8。其結(jié)構(gòu)式,pH值隨溫度變化很大。一般來(lái)說(shuō),溫度每升高一度,PH值下降0.03。Tris被廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中的緩沖液的制備。例如,在生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)中常用的TAE和TBE緩沖液(用于核酸的溶解)都需要用到Tris。由于它含有氨基因此可以與醛發(fā)生縮合反應(yīng)。Tris為弱堿,在室溫(25℃下,它的pKa為8.1;根據(jù)緩沖理論,Tris緩沖液的有效緩沖范圍在pH7.0到9.2之間。Tris堿的水溶液pH在10.5左右,一般加入鹽酸以調(diào)節(jié)pH值至所需值,即可獲得該pH值的緩沖液。但同時(shí)應(yīng)注意溫度對(duì)于Tris的pKa的影響。由于Tris緩沖液為弱堿性溶液,DNA在這樣的溶液中會(huì)被去質(zhì)子化,從而提高其溶解性。人們常常在Tris鹽酸緩沖液中加入EDTA制成“TE緩沖液”,TE緩沖液被用于DNA的穩(wěn)定和儲(chǔ)存。如果將調(diào)節(jié)pH值的酸溶液換成乙酸,則獲得“TAE緩沖液”(Tris/Acetate/EDTA),而換成硼酸則獲得“TBE緩沖液”(Tris/Borate/EDTA)。這兩種緩沖液通常用于核酸電泳實(shí)驗(yàn)中。由Tris配成的TAE,TBE等是DNA電泳最常用的試劑,TE(pH8.0)主要用于溶解DNA。(TE為T(mén)ris加EDTA合稱(chēng)。)1MTris-HCl6.8和1.5MTris-HCl8.8是SDS-PAGE最常用的試劑。(具體配置方法如下):1MTris-HCl(pH7.4,7.6,8.0)組份濃度1MTris-HCl配制量1L配制方法1.稱(chēng)量121.1gTris置于lL燒杯中。2.加入約800ml的去離子水,充分?jǐn)嚢枞芙狻?.按下表加入濃HCl量調(diào)節(jié)所需要的pH值。pH值濃HCl7.4約70ml7.6約60ml8.0約42ml4.將溶液定容至1L。5.高溫高壓滅菌后,室溫保存。注意:應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值,因?yàn)門(mén)ris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大,溫度每升高1℃,溶液的pH值大約降低0.03個(gè)單位。1.5MTris-HCl(pH8.8)組份濃度1.5MTris-HCl配制量1L配制方法1.稱(chēng)量181.7gTris置于1L燒杯中。2.加入約800ml的去離子水,充分?jǐn)嚢枞芙狻?.用濃HCl調(diào)節(jié)pH值至8.8。4.將溶液定容至1L。5.高溫高壓滅菌后,室溫保存。注意:應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值,因?yàn)門(mén)ris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大,溫度每升高1℃,溶液的pH值大約降低0.03個(gè)單位。Tris緩沖液不僅被廣泛用作核酸和蛋白質(zhì)的溶劑,還有許多重要用途。Tris被用于不同pH條件下的蛋白質(zhì)晶體生長(zhǎng)。Tris緩沖液的低離子強(qiáng)度特點(diǎn)可用于線蟲(chóng)(C.elegans)核纖層蛋白(lamin)的中間纖維的形成。Tris也是蛋白質(zhì)電泳緩沖液的主要成分之一。此外,Tris還是制備表面活性劑、硫化促進(jìn)劑和一些藥物的中間物。Tris也被用作滴定標(biāo)準(zhǔn)物。
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