1.售前須知:
該細(xì)胞貼壁松散,操作時(shí)請(qǐng)盡量輕柔;換液時(shí)需預(yù)熱培養(yǎng)基;收貨如有大塊脫落的細(xì)胞團(tuán),為正常現(xiàn)象,請(qǐng)按照收貨注意事項(xiàng)處理。
2.細(xì)胞起源:
細(xì)胞簡(jiǎn)稱(chēng) 293T/17
細(xì)胞別稱(chēng) HEK 293T/17; 293T/17
細(xì)胞背景描述 293T/17細(xì)胞株是293T細(xì)胞株的衍生株,293T是293 [HEK-293]細(xì)胞株插入了SV40 T-antigen的溫度敏感基因形成的高轉(zhuǎn)衍生株。293T細(xì)胞進(jìn)行克隆,檢測(cè)pBND和pZAP載體,得到一株能生成高滴度感染逆轉(zhuǎn)錄病毒的衍生株293T/17細(xì)胞。293T/17細(xì)胞持續(xù)表達(dá)猿病毒40(SV40)大T抗原,而因其高轉(zhuǎn)染能力篩選到17號(hào)克隆。293T/17細(xì)胞用pCRIPenv-和pCRIPgag-2載體轉(zhuǎn)染得到ANJOU65細(xì)胞株,ANJOU65細(xì)胞再用pCRIPgag-2和pGPT2E載體轉(zhuǎn)染得到親宅性外殼表達(dá)細(xì)胞株BOSC 23。ANJOU65細(xì)胞用攜帶gpt抗性基因的pCRIPAMgag載體轉(zhuǎn)染得到Bing雙向性表達(dá)包裝細(xì)胞株。
供體年齡 胚胎
組織來(lái)源 腎
細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣
細(xì)胞類(lèi)型 轉(zhuǎn)化細(xì)胞系
生長(zhǎng)特性 貼壁細(xì)胞
生物安全等級(jí) 2
3.培養(yǎng)及保藏:
完全培養(yǎng)基 DMEM(PM150210)+10% FBS(164210-50)+1% P/S(PB180120)
培養(yǎng)環(huán)境 空氣,95%;CO 2,5%
37℃
凍存條件 55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40%FBS+5%DMSO液氮
4.傳代方法:
傳代步驟 1、吸出原培養(yǎng)液;
2、加入2ml左右PBS,輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶潤(rùn)洗細(xì)胞,吸出PBS丟棄;
3、加入1ml左右0.25%胰蛋白酶溶液(含EDTA),輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶使之浸潤(rùn)所有細(xì)胞;
4、放入培養(yǎng)箱消化,顯微鏡下看到細(xì)胞塊中間的細(xì)胞明顯變圓有間隙時(shí)可終止,全程不要拍打培養(yǎng)瓶;
5、加入3ml含血清的培養(yǎng)基終止消化,吹打細(xì)胞使之脫壁并在液體里反復(fù)吹打使細(xì)胞盡量呈單顆細(xì)胞的懸浮液;
6、收集細(xì)胞懸液離心,1200rpm/min 3分鐘,離心完吸出上清丟棄;
7、加入新鮮培養(yǎng)基,吹打幾下混勻細(xì)胞即可,按比例接種到新培養(yǎng)瓶,補(bǔ)足培養(yǎng)基,擰松瓶蓋或使用透氣瓶蓋進(jìn)行培養(yǎng)。
消化時(shí)間 0.5~1分鐘
傳代比例(密度) 1:3-1:4
換液頻次 2~3次/周
本產(chǎn)品僅供科研使用。不能用于人和動(dòng)物治療等其它臨床診斷使用!以實(shí)際收貨產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn),網(wǎng)站說(shuō)明書(shū)僅供參考。