變性劑(脲和鹽酸胍)可使蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)中的氫鍵發(fā)生斷裂,這增加了非極性分子包括氨基酸側(cè)鏈的溶解度,減少了疏水相互作用;脲還可以深入到蛋白質(zhì)分子的內(nèi)部影響蛋白質(zhì)分子的密堆積。此外,去污劑、有機溶劑、重金屬、熱、機械力、冷凍、超聲、高壓、輻射等均可引起蛋白質(zhì)的變性。這些變性均不會破壞蛋白質(zhì)的共價鍵而是只涉及到氫鍵、鹽鍵、疏水相互作用、范得華相互作用等次級鍵的破壞。有些變性的蛋白質(zhì)當變性因素被除去后又可自動地恢復到天然狀態(tài),這種現(xiàn)象稱為蛋白質(zhì)的復性(renaturation),這種復性即蛋白質(zhì)折疊研究中的重折疊(refolding)。包涵體蛋白質(zhì)提純大多數(shù)在pH8的條件下,一般用強的變性劑如尿素(6-8mol/L)、鹽酸胍(GdnHCl5~8mol/L或6mol/L),通過離子間的相互作用,打斷包涵體蛋白質(zhì)分子內(nèi)和分子間的各種化學鍵,使多肽伸展,一般來講,鹽酸胍優(yōu)于尿素,因為鹽酸胍是較尿素強的變性劑,它能使尿素不能溶解的包涵體溶解,而且尿素分解的異氰酸鹽能導致多肽鏈的自由氨基甲?;貏e是在堿性pH值下長期保溫時。或用去垢劑,如SDS、正十六烷基三甲基銨氯化物、Sarkosyl等,可以破壞蛋白內(nèi)的疏水鍵,也可溶解一些包涵體蛋白質(zhì)。用TritonX-100來溶解Zymononasmobilislevansucrase包涵體蛋白。另外,對于含有半胱氨酸的蛋白質(zhì),分離的包涵體中通常含有一些鏈間形成的二硫鍵和鏈內(nèi)的非活性二硫鍵。還有有機溶劑、堿性環(huán)境(大于9)或酸(70%甲酸)也可使之溶解。
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