產(chǎn)品描述（Description）
肽N-糖苷酶 F (PNGase F)是一種酰胺水解酶，主要由腦膜炎膿桿菌等革蘭氏陰性菌分泌。PNGase F可以裂解由天冬酰胺連接的高甘露糖，及雜合和復(fù)雜的寡糖糖蛋白。PNGase F的切割位點(diǎn)為糖蛋白內(nèi)側(cè)N-乙酰葡萄糖胺（GlcNAc）和天冬酰氨殘基之間的酰胺鍵，同時(shí)將酶解后蛋白上的天冬氨酰轉(zhuǎn)化為天冬氨酸。
PNGase F 不會(huì)去除常見(jiàn)植物糖蛋白上含有核心α-(1,3)- 巖藻糖連接的寡糖。
儲(chǔ)存條件（Storage）
儲(chǔ)存于 -20°C，保質(zhì)期 12 個(gè)月。
運(yùn)輸方式（Shipping）
藍(lán)冰運(yùn)輸
狀態(tài)（Form）
Liquid
儲(chǔ)存溶液（Buffer）
20 mM Tris-HCl pH 7.5, 50 mM NaCl, 5 mM EDTA,50%Glycerol
表達(dá)宿主（Host）
E. coli
酶切位點(diǎn)
PNGase F幾乎可以水解糖肽/糖蛋白中所有N-連接糖 (x = H 或寡糖) 。
分子量
36kDa
純度
>95% as determined by SDS-PAGE
比活性
1,800,000 U/mg
酶活單位定義
1個(gè)酶活力單位指在10ul的反應(yīng)體系中，37℃條件下1小時(shí)從10ug變性RNase B中除去超過(guò)95%的碳水化合物所需要的酶量定義為一個(gè)活性單位（U）。
酶切反應(yīng)條件
37℃ ，酶切反應(yīng)1h，每1ug酶可以酶切10ug底物。
使用方法（Standard Operating Procedure）icon
1. 在變性條件下進(jìn)行SDS-PAGE的蛋白質(zhì)去糖基化
(1) 在水中加入50μg目標(biāo)糖蛋白（或低離子強(qiáng)度的相容緩沖液）至最終體積為12μl。
(2) 加入1μl 的5％SDS。
(3) 加入1μl的 1MDTT。
(4) 在95℃加熱5min使樣品變性。
(5) 在室溫下冷卻5min。
(6) 加入2μl的0.5M磷酸鈉緩沖液（pH 7.5）。如果pH在PNGase F（pH 6-10）范圍內(nèi)，可以使用其他緩沖液。
(7) 加入2μl的10％NP-40?？捎肨riton X-100替代NP-40。
(8) 加入2μl的PNGase F.
(9) 在37°C孵育1-3h。
注意：糖蛋白的去糖基化可以通過(guò)SDS-PAGE上的凝膠移位來(lái)觀察，去糖基化的產(chǎn)物比糖基化的底物移動(dòng)的更快。
2. 在非變性條件下進(jìn)行質(zhì)譜檢測(cè)的蛋白質(zhì)去糖基化
(1) 在50mM碳酸氫銨（pH 7.8）中加入20μg的糖蛋白至終體積為18μl。
(2) 加入2μl的PNGase F.
(3) 在37°C孵育2-18h。
注意：在變性條件下大多數(shù)底物能夠更好的去糖基化，在非變性條件下可能需要增加PNGase F的量和延長(zhǎng)孵育時(shí)間。
關(guān)鍵字： PNGase F;肽N-糖苷酶;83534-39-8;酰胺水解酶;
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