一、 試劑盒簡(jiǎn)介
本試劑盒是簡(jiǎn)單快速?gòu)募?xì)胞到cDNA的一步法試劑盒,無(wú)需復(fù)雜的RNA提取步驟,即可獲得高質(zhì)量的cDNA。 具體過(guò)程是:根據(jù)細(xì)胞數(shù),按照80 μl /10萬(wàn)細(xì)胞的量加Cell Lysis Buffer,吹吸10次,充分裂解細(xì)胞;立即吸出4 - 8 μl細(xì)胞裂解產(chǎn)物,加入逆轉(zhuǎn)錄試劑,充分混勻后,只需42℃、25 min即可得到cDNA。
二、 產(chǎn)品組分
Components | B0003-S (10 Rxns) | B0003-L (100 Rxns) |
Cell Lysis Buffer | 2.2 ml | 22 ml |
RT Enzyme Mix | 22 μl | 220 μl |
2× RT Buffer | 110 μl | 1.1 ml |
ddH2O | 1 ml | 2 ml |
三、 保存條件
此試劑盒建議置于-20℃冰箱中保存。
四、試劑盒特點(diǎn)
1、簡(jiǎn)單、快速:僅需2步、30 min即可獲得高質(zhì)量的cDNA。
2、所需樣品少:最低可提取1000個(gè)細(xì)胞。
3、 安全無(wú)毒:不使用苯酚、氯仿、異丙醇、DEPC水等對(duì)身體有害的物質(zhì)。
五、注意事項(xiàng)
1、本試劑盒是專(zhuān)為qPCR設(shè)計(jì)的,盡量不要用于基因克隆。
2、建議用24、48或96孔板培養(yǎng)細(xì)胞。細(xì)胞密度達(dá)到80%為。
3、細(xì)胞從培養(yǎng)箱中取出后建議放在室溫,切勿放在冰上,以免影響細(xì)胞狀態(tài)。
4、初次使用時(shí)建議對(duì)細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù),之后可參考細(xì)胞估數(shù)圖進(jìn)行估數(shù)。
5、Cell Lysis Buffer解凍后,需顛倒幾次使之充分混勻,再放在冰上以備使用,請(qǐng)勿渦旋振蕩。
6、本試劑盒是根據(jù)細(xì)胞來(lái)加裂解液,裂解液最少應(yīng)該能夠充分覆蓋培養(yǎng)孔底部,否則過(guò)少容易導(dǎo)致吹出泡沫,或者裂解不充分。
7、RT Enzyme Mix和2× RT Buffer在使用前都要上下顛倒混勻,短暫離心至管底。由于酶保存液中含有50%的甘油,粘度高,分取時(shí)應(yīng)慢慢吸取。同時(shí),要使用精確、量程適合的移液槍?zhuān)⑶也灰?/span>Tip插入液面過(guò)深,否則會(huì)因Tip壁粘著造成損失,而使酶量不足。
8、當(dāng)同時(shí)需要進(jìn)行數(shù)次反應(yīng)時(shí),應(yīng)先配制各種試劑的混合液,然后再分裝到每個(gè)反應(yīng)管中。這樣可使所取的試劑體積更準(zhǔn)確,減少試劑損失,避免重復(fù)分取同一試劑。同時(shí)也可以減少實(shí)驗(yàn)操作或?qū)嶒?yàn)之間產(chǎn)生的誤差。
關(guān)鍵字: 一步,cDNA,試劑盒,單細(xì)胞;